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【摘要】 目的 检测妊高征胎盘的Fas蛋白表达水平，探讨妊高征的发病机制。方法 采用免疫组织化学方法结合病理图像分析技术，定量分析10例正常妊娠组与30例妊高征组胎盘Fas蛋白表达。结果 Fas蛋白主要表达与胎盘绒毛滋养细胞的胞膜及胞浆内。与正常妊娠组比较，妊高征组胎盘Fas蛋白表达显著增加，轻度、中度、重度妊高征组比较，有显著性差异。结论 胎盘滋养层细胞Fas蛋白表达增加可能是妊高征的发病机制之一，从而为临床治疗妊高征提供新的方向。
【关键词】Fas蛋白；妊高征；胎盘；滋养层细胞
The expression and significance of Fas in pregnancy-induced hypertension’s placenta QIU shu, LI Qin,WANG jian-jun.Department of Obstetrics and Gynecology, Yangzhou Women and Children’s Healthcare Hospital,Yangzhou 225001,China
【Abstract】 Objective Detection of expression of Fas in placenta explores the pathogenesis of pregnancy-induced hypertension. Methods Immunohistochemical staining method with pathological image analysis technology analysis 10 patients with normal pregnancy group of 30 cases of placental pregnancy induced hypertension group in trophoblast cells" expression. Results expression of Fas mainly lies in placental trophoblast cells" membrane and the cytoplasm. With the normal pregnancy, expression of Fas in placenta increased significantly, mild, moderate, severe pregnancy induced hypertension group, so the difference was significant. ConclusionIncrease of the expression of Fas in trophoblast cells is the pathogenesis of PIH so as to provide a new direction in the clinical treatment of PIH.
【Key words】 Pregnancy-induced hypertension syndrome(PIH); Placenta; Trophoblast cells
本研究采用免疫组织化学法测定了妊高征患者和正常孕妇胎盘Fas蛋白的表达水平，以探讨妊高征患者胎盘Fas蛋白水平的变化及其与妊高征发病的关系。
1 资料与方法
1．1 对象选择 随 机选择2006年1月至2006年9月在扬州市妇幼保健医院产科经剖宫产术分娩的孕妇共40例。年龄在25~39岁，分娩孕周在37~41周。按照妊高征的诊断和分类标准[1]分正常、轻度、中度、重度妊娠各10例。均为单胎妊娠，无其他内科和产科合并症。胎盘娩出后于胎盘中央部分，取大小约1．0 cm�3组织块，用生理盐水漂洗去除血液后固定于4%多聚甲醛中, 常规脱水，透明，浸蜡包埋，连续切4 μm厚切片。
1．2 标本收集 孕妇外周血，每次采血2 ml，置于盛于EDTA抗凝剂的无菌试管中，生理盐水等倍稀释后备用。
1．3 实验结果判定 用捷达801形态学图象分析系统测定，以细胞膜或细胞浆出现明显的棕黄色颗粒为阳性细胞。采用Sinicrope[2]等综合计分法并稍加改进进行半定量分析。每例随机选择6个高倍视野［光学显微镜下(×200)］记数1000个细胞中的阳性细胞个数进行阳性细胞数计分，75%为4分。着色强度计分则是以多数阳性细胞数呈现的染色特征计分：淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。阳性细胞数计分+着色强度计分即为综合得分，0~1分为阴性(±)；2~3分为弱阳性(+)；4~5分为中等阳性(++)；6~7分为强阳性(+++)。
1．4 免疫组织化学染色 鼠抗人Fas(CD95)抗体和免疫组化SP试剂盒均购于北京中山生物技术有限公司，操作方法参芹)；扬州大学医学院形态实验室(王建军)
照说明书。将组织切片与鼠抗人Fas 蛋白抗体共孵过夜，用生物素标记山羊抗小鼠IgG 处理后，滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，用3,3"-二氨基联苯胺显色试剂盒显色，苏木素轻度复染，脱水，封片，显微镜下观察Fas蛋白在胎盘组织中的分布，出现棕黄色染色为阳性判断结果。以PBS代替Fas抗体作为阴性对照，并摄片。
1．5 统计学方法 数据采用SPSS10．0软件进行统计，用卡方检验方法，并进行两两比较，P0．05为差异无统计学意义。
2 实验结果
不同程度妊高征Fas蛋白在孕妇胎盘绒毛滋养细胞的表达显著不同(见表1)。Fas蛋白的棕黄色阳性染色主要位于滋养细胞的细胞膜和细胞浆中，胞核呈浅蓝色。妊高征组胎盘滋养细胞Fas蛋白的表达，高于正常妊娠组，差异有统计学意义(P Fas及Fas配体是目前唯一的通过免疫途径介导细胞凋亡的蛋白分子，他们的发现对细胞凋亡的研究起了很大的促进作用。本实验应用免疫组化的方法对正常孕妇及妊高征患者胎盘的滋养细胞Fas蛋白的表达进行研究，结果表明妊高征组胎盘的滋养细胞表达Fas蛋白的强度显著高于对照组，轻度与中度及重度之间有显著性差异。总之，这种诱导凋亡的平衡机制若一旦发生改变，就会导致胎盘发生一系列免疫病理损害，最终发展为妊高征。胎盘滋养细胞Fas与Fas-L配体表达的平衡失调，导致滋养细胞凋亡增加。影响其分化及浸润，而滋养细胞的功能异常在妊高征胎盘损伤的发生发展中起着重要的作用。这可能是妊高征的发病原因之一[3-5]。深入探索细胞凋亡的分子生物学机制，必将有助于揭示疾病的发病机理，为临床治疗提供新的思路。
综上所述,可以看出Fas/FasL系统的异常表达与PIH发病相关,导致母体对胎儿的免疫耐受减低,滋养细胞和免疫细胞凋亡增加,胎盘浅着床,形成PIH胎盘损伤的病理基础。鉴于Fas蛋白的表达与敏感性并不完全一致,尚需进一步研究体内Fas蛋白的敏感性及细胞凋亡因子之间的平衡问题。
胎盘滋养细胞表面Fas蛋白表达增加,导致母胎间的免疫耐受的破坏,引起异常的免疫反应可能导致胎盘屏障损伤，也可能是妊高征发病的重要机制。诱导Fas蛋白的产生或调节母胎间的免疫耐受,将为临床治疗妊高征提供新的方向。
参考文献
［1］ 乐杰. 妇产科学.人民卫生出版社，200：116．
［2］ Sinicrope FM, Ruan SB, Clear KR, et al．bcl-2 and p53 on copretein express during colorectal tumorigenesis．J Cancer Res, 1995, 55 (2) : 237.
［3］ 金峰，尚涛，王伟．妊高征患者胎盘滋养细胞FAS及FAS-L表达的研究．中国现代医学杂志，2004,14(2): 53-55．
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