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【摘 要】目的建立高效液相色谱-紫外-电喷雾质谱（HPLC-UV-ESI/MS）联用测定槟榔食品中槟榔碱的方法。方法 以甲醇和0．1%三乙胺水溶液作流动相,在反相C18(5 μm,250 mm×4．6 mm)柱上梯度淋洗,以质谱定性,紫外定量进行检测。结果 在0．2～20 μg/ml内峰面积和浓度呈良好的线性关系。结论 该方法抗干扰能力强,可以快速、准确地测定槟榔食品中的槟榔碱。【关键词】槟榔;槟榔碱;色谱法；高压液相;光谱分析；质量
【关键词】
Determination of arecoline in betelnut foods by high performance liquid chromatography/electrospray mass spectrometryWEN Kai-qi． Vocational Technical College，Yongzhou Hunan Province Yongzhou 425006，China
【Abstract】 Objective A method for determining arecoline in betelnut foods by on line HPLC-UV-ESI/MS was established．Methods The separation was operated on an analytical spherigel C18 column (5 μm,250 mm×4．6 mm)with acetonitrile:water (containing 0．1% triethylamine)as mobile phase．Results Good linearity between peak areas and concentrations was obtained within the range of 0．2-20μg/ml．Conclusion The method is simple and can determine arecoline in betelnut foods accurately．
【Key words】 Betelnut；Arecoline；Chromatography;High pressure liquid；Spectrum analysis;Mass
槟榔的主要作用是由槟榔碱的功效体现的，一定量的槟榔碱能使人产生兴奋发热作用,像烟草的尼古丁一样,给人以劲头和生理满足感。判断槟榔质量的好坏主要是槟榔碱的含量和纤维质量的优劣。目前，槟榔中槟榔碱含量的测定，通常采用滴定法测定槟榔中总生物碱的含量来代替[1]，这种方法不能准确测定槟榔碱的含量。而薄层扫描法[2]、毛细管电泳法[3]、光度法[4]、高效阳离子交换色谱法[5]也有报道。本文建立了测定槟榔碱含量的高效液相色谱/质谱联用法。
1 材料与方法
1．1 仪器与试剂 Waters 2695分离单元、Waters 2487双波长检测器、Waters ZQ 2000质谱检测器(Waters公司，美国)；色谱纯甲醇（湖南化工研究院精细化工研究所）、三乙胺（上海三浦化工有限公司）；含量＞99%(HPLC)槟榔碱标准品(本实验自制,经NMR、IR结构认证) 。本文中配试剂所用水都为双重纯水，其他试剂均为分析纯试剂。
1．2 液相色谱-质谱条件 色谱柱：Spherigel C18，(250 mm×4．6 mm，5 mm 大连江申)，流动相：甲醇+水溶液（0．02 mol/L KH2PO4-H3PO4的缓冲溶液和体积约为1．4 ml三乙胺；H3PO4的作用主要是调节溶液pH=3，每次水溶液均以1 000 ml�配置而成） =10 +90（体积比），进样前柱子用流动相平衡20 min；流速：1 ml/min；检测波长：215 nm；柱温：室温（25℃）；进样量：10 μl。
1．3 质谱条件：用电喷雾离子化正离子采集模式（ESI+），m/z范围：180～600 amu，毛细管电压：3．5 kV，锥孔电压:20 V,萃取电压5．0 V,源温度:105℃,脱溶剂温度:250℃,脱溶剂气:300 L/h,锥孔反吹气:50 L/h。
2 方法与结果
2．1 提取条件的考察
2．1．1 提取方法的选择 根据相似相容原理，有机溶剂提取生物碱是一种比较方便快捷的方法，在选择有机溶剂时，以提取效率和容易分离为主要标准。本实验考察了用水、乙醇、乙醚三种溶媒，比较其提取情况。结果乙醚提取效率非常低；水、乙醇提取的杂质太多，浓缩、净化存在较大的困难；用无水乙醚作为其提取溶剂，在提取过程中加入适量的浓氨水可使槟榔内部纤维或木质素润胀，以便于提取。并且提取率高、溶液相对较纯，故选用氨性乙醚超声提取。
2．1．2 提取过程中槟榔碱稳定性的考察 本实验取样品分别在不同时间段测得的峰面积，得到时间与峰面积的稳定性实验如图1。
图1结果说明，槟榔碱对于短时间内在乙醚溶液中的稳定性比较好，随着时间延长稳定性有稍微有下降趋势，这可能跟氨的挥发、碱性下降相关，也说明槟榔碱本身的不稳定性需要以盐的形式存在或存在于溶剂中。
2．2 测定条件的选定 检测波长的选择：取槟榔碱对照品以流动相稀释至吸收度适中的溶液，在紫外分光光度计上扫描测定，槟榔碱只有末端吸收，参照文献选用215 nm为检测波长[6]。
2．3 线性关系的考察 将槟榔碱标准品的乙醚液作为标准贮备液，将贮备液再稀释配成 5 种不同浓度的标准品溶液，分别注入液相色谱仪，以浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标作线性回归，得到的标准曲线图。
2．4 检测限与定量限 信噪比 3：1 时得到槟榔碱的检测限为 9 ng/ml（ppb）,信噪比 10∶1 时得到槟榔碱的定量限为 22 ng/ml（ppb）。
2．5 方法的精密度 以槟榔碱制备品作为试样，用自动进样器进样连续九次进行精密度试验，以峰面积计算，得到槟榔碱的 RSD=1．16%，槟榔碱用此法测定精密度良好。
2．6 槟榔碱的回收率 取已知槟榔作为样品，分别加入不同浓度的制备标准样品，配成3种不同浓度的样品，按实验条件进行测定，以2次测定的平均计算，测定结果如表所示。
从表中可以看出，槟榔碱的对制备标样的 LC/MS 回收率在 99．6%～103．3%，这说明该方法准确度比较高。
3 试样测定
3．1 样品处理 将槟榔样品充分切碎，混匀。精密称取0．5 g置小烧杯中,加氨水0．5 ml,立即加乙醚50 ml加超声（在25℃以下）5 min，倾出乙醚提取液至预置1 ml磷酸液（5→1 000）的蒸发皿中，再分别加乙醚30、20 ml超声2次，每次2 min，合并乙醚提取液，挥去乙醚，残渣加50%乙腈使溶解，转移至10 ml量瓶，并以同一溶剂稀释至刻度，摇匀，离心（3 000 r/min）5 min，取上清液过0．45 μm滤膜，取续滤液作为供试液。
3．2 测定 分别精密量取取样品处理液和标准使用液各10 μl,按上述色谱条件测定，以外标一点法计算样品中槟榔碱含量为0．35%。图3为检测试样的紫外色谱图及质谱图。
参考文献
1 中华人民共和国卫生部药典委员会．中华人民共和国药典（一部）．广东科技出版社，1995：320．
2 林励，徐鸿华，邓沛峰．槟榔中槟榔碱含量的薄层扫描测定．中国中药杂志，1992，17（8）：491．
3 袁炜，吕建德，傅小芸．槟榔中槟榔碱和槟榔次碱的毛细管电泳分析．分析化学，2000，6（28）：749．
4 高敏，高淑芹．光度法测定槟榔中槟榔碱的含量．化学分析计量，2003，12（1）：28-29．
5 陈浩桉，赖宇红，王晓钰,等．高效阳离子交换色谱法测定槟榔中槟榔碱的含量．中药材，2002，25（1）：27-28．
6 Huang JL．High-performance liquid chromatographic determinnation of the alkaloids in betel nut．J Chromatogr,1989，475：447．
