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[摘要] 目的 检测Ki-67、ER、PR和C-erbB-2在乳腺癌组织中的表达并探讨其相关关系。方法 应用免疫组化法，检测乳腺癌组织中ER、PR和C-erbB-2的表达，分析前者与后三者间的相关关系。结果 Ki-67、ER、PR和C-erbB-2阳性表达率分别为79.52%、63.25%、60.24%、66.26%，Ki-67表达强度与C-erbB-2 呈正相关性，与ER、PR 呈负相关性。结论 乳腺癌组织中Ki-67与ER、PR和C-erbB-2有明确的相关关系，联合检测具有实际的临床意义，可作为临床病理因素之外早期识别具有高浸润和转移潜能的乳腺癌及判断其预后的有用指标。
[关键词] 乳腺癌； 免疫组化； Ki-67； ER； PR； C-erbB-2
[中图分类号] R737.9 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2009）13-03-03
Study of the Relationship between Ki-67，ER，PR and C-erbB-2 in Breast Cancer Tissues
GUO Yanwei
Department of Oncology，The First Affiliated Hospital of Nanyang Medical College，Henan 473058
[Abstract] ObjectiveTo detect the expression ofKi-67，ER，PR and C-erbB-2 in breast cancer tissues and discuss the relationship between Ki-67，ER，PR，C-erbB-2 and clinical pathological factors. MethodsImmunohistochemical method was used to detect the expression ofKi-67，ER，PR and C-erbB-2 in breast cancer tissue. ResultsThe positivity rate of the expression ofKi-67，ER，PR and C-erbB-2 were 79.52%，63.25%，60.24%，66.26% respectively. The expression of Ki-67 had positive correlation with C-erbB-2（x2＝109.79，P＜0.01），but had negative correlation with ER and PR（x2＝30.14，P＜0.01；x2＝36.71，P＜0.01）. ConclusionThe expression of Ki-67，ER，PR and C-erbB-2 are all higher in breast tumor tissues，which indicates to be useful for the prognosis judgement. Co-detection ofKi-67，ER，PR and C-erbB-2 can elevate the sensitivity of prognosis evaluation. So，they can be used to detect high infiltrating and high metastasizing tumor，and evaluate their prognosis.
[Key Words]Breast cancer； Immunohistochemistry； Ki-67； ER； PR； C-erbB-2
目前国内外对Ki-67与ER、PR和C-erbB-2相关关系方面的研究还存在较多的不同观点。我们应用免疫组化实验方法联合检测166例乳腺癌组织中Ki-67、ER、PR和C-erbB-2的表达，并探讨其相关关系，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源
乳腺癌肿瘤组织均来自2004年12月～2007年2月南阳医学高等专科学校附属医院，有完整原癌病灶、淋巴结和癌旁组织的乳腺癌标本。均为女性，年龄27~79岁，平均（53.2±11.2）岁。组织学类型：浸润性导管癌150例，浸润性小叶癌8例，髓样癌6例，小管癌2例。有区域淋巴结转移者68例。
1.2 方法
免疫组化S-P染色，步骤如下：（1）烤片，68℃，20min；（2）常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水；（3）阻断：灭活内源性过氧化物酶：3%H2o2 37℃孵育10min，PBS冲洗3×5min；（4）抗原修复：置0.01M枸橼酸缓冲液（pH 6.0）中用煮沸（95℃，15~20min），自然冷却20min 以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温，PBS冲洗3×5min。（5）正常羊血清工作液封闭，37℃10 min，倾去勿洗；（6）滴加一抗4℃ 冰箱孵育过夜，PBS冲洗3×5min（用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照）；滴加生物素标记二抗，37℃孵育30min，PBS冲洗3×5min；（7）滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37℃孵育30min，PBS冲洗3×5min；（8）DAB/ H2o2反应染色，自来水充分冲洗后，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。
1.3 Ki-67、ER、PR和C-erbB-2在乳腺癌组织中的表达及判断标准
1.3.1 ER（PR）阳性判断标准 肿瘤细胞细胞核呈棕黄色为阳性结果。0级：无细胞核棕黄染色或少于5%的肿瘤细胞细胞核较弱棕黄染色；1级：5%～30%的肿瘤细胞细胞核弱棕黄染色，个别可中到强着色；2级：30%～60%的肿瘤细胞细胞核弱到中度棕黄着色，个别可强着色；3级：多于60%的肿瘤细胞细胞核中到强棕黄着色，个别可弱着色。见封三图1，2。
1.3.2 Ki-67阳性判断标准 肿瘤细胞核棕黄染色为阳性结果。阳性率判断标准：以任意5个高倍镜视野中阳性细胞所占的细胞比例的平均值定义为阳性细胞百分比并作为评定依据。①阳性细胞数＜5%，不着色者为阴性（-）；②阳性细胞数在5%～25%为（+），-显色：浅棕色为弱阳性（+）；③阳性细胞数在26%～50%为（++），-显色：棕黄色为阳性（++）；④阳性细胞数大于50%为（+++）。-显色：深棕色为强阳性（+++）。以（-）和（+）为低表达组，（++）和（+++）为过表达组进行分析。见封三图3。
1.3.3 C-erbB-2阳性标准 肿瘤细胞细胞膜棕黄染色为阳性结果。0级：无细胞染色或少于10%的肿瘤细胞细胞膜较弱染色；1级：大于10%的肿瘤细胞细胞膜部分较弱染色；2级：大于10%的肿瘤细胞细胞膜完全较弱到中等染色；3级：大于10%的肿瘤细胞细胞膜完全强染色。见封三图4。
1.4 统计学处理
应用SPSS10.0统计学软件，采用x2检验。
2 结果
2.1 各项指标阳性表达率
Ki-67为79.52%（132/166），ER为63.25%（105/166），PR为60.24%（100/166），C-erbB-2为66.26%（110/166）。各项指标过表达率（表达呈++和+++的和占总例数的比例，+++为过表达）：Ki-67为47.59%（79/166），ER为44.58%（74/166），PR为45.18%（75/166），C-erbB-2为24.10%（40/166）。
2.2 Ki-67与ER，PR，C-erbB-2的关系
乳腺癌组织的Ki-67表达强度与C-erbB-2强度的表达呈正相关性（x2＝109.79，P＜0.01）；与ER的表达强度呈负相关性（x2＝30.14，P＜0.01）；与PR的表达强度呈负相关性（x2＝36.71，P＜0.01）。见表1，图1 ~ 3。
3 讨论
目前，ER、PR和C-erbB-2的检测之所以被广为接受的主要原因是它们与乳腺癌对内分泌治疗的反应有关，可以作为临床选择内分泌治疗的依据。ER和PR均阴性的肿瘤对内分泌治疗有反应的可能性小，而ER和PR均阳性的肿瘤大多数对内分泌治疗有效。C-erbB-2过表达的患者对CMF方案和三苯氧胺治疗不敏感，而对蒽环类药物和紫杉醇治疗敏感，对单克隆抗体Herceptin的治疗反应良好[1]。据文献报道，免疫组化方法测定过度表达的C-erbB-2的阳性率在20%～30%[2]，ER阳性表达占原发性乳腺癌的77%，PR表达为65%[3]。本研究结果显示，以上这些指标过度表达的标本占总数的比例分别为ER为63.25%（105/166）、PR为60.24%（100/166）、C-erbB-2为24.10%
（40/166），与国外文献统计相同[4，5]。Schippinger等[6]研究表明，C-erbB-2过表达的乳腺癌患者转移率高，5年与10年生存率较低，同时还发现，C-erbB-2的表达与雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）的表达呈负相关。本研究利用免疫组化法对166例乳腺癌组织进行检测并进行相关分析发现，C-erbB-2表达越强，Ki-67表达也越强；ER、PR表达越强，则Ki-67表达越弱，这提示在乳腺癌的发生、发展中Ki-67与C-erbB-2、ER、PR之间可能存在着特殊关系，即Ki-67的表达强度与C-erbB-2的表达强度呈正相关性，与ER、PR的表达强度呈负相关，同时也意味着Ki-67过表达可能是一个不良预后因素，其与乳腺癌发生、发展具有内在联系。本研究因随访时间有限，关于乳腺癌组织中Ki-67表达对于乳腺癌预后的判断以及指导治疗的价值有待进一步研究，但近年来有文献报道Ki-67可作为乳腺癌化疗的敏感性指标，肿瘤细胞增殖率降低，比肿瘤的肿块缩小更能反映肿瘤对化疗敏感的程度。本研究发现Ki-67在乳腺癌组织过表达，提示癌细胞增殖活性的改变在癌前病变阶段开始，并且与癌变的过程是相关的。
总之，Ki-67表达与乳腺癌发生、发展有关，与ER、PR和C-erbB-2有明确的相关关系，能促进乳腺癌细胞的增殖、浸润和转移，是一不良预后因子，可作为早期识别具有高浸润和转移潜能的乳腺癌及判断其预后的有用指标。
[参考文献]
[1] Chang J，Clark GM，A1lred DC，et al. Survival of patients with metestatic breast carcinoma：importance of prognosticmarker，of the primany tumor[J]. Cancer，2003，97（3）：545-553.
[2] Nichols DW，Wolf DJ，Self S，et al. A testingalgorithmfor determination of C-ERBB-2 status in patients with breast cancer[J]. Ann Clin Lab Sci，2002，32（1）：3-11.
[3] Fiets WE，Blankenstein MA，Struikmans H，et al. The prognostic valueof hormone receptor detection by enzyme immunoassay and immunohisto- chemistry：a prospectivestudy in patients with early breast cancer[J]. Int JBiol Markers，2002，17（1）：24-32.
[4] Kato T，Kameoka S，Kimura T，et al. p53，mitosis，apoptosis and necrosis as prognostic indicators of long-term survival in breast cancer[J]. Anticancer Res，2002，22（2B）：1105-1112.
[5]Aziz SA，Pervez S，Khan S，et a1.Relationship of p53 expression with clinicopathological variables and disease outcome：a prospective study on 315 consecutive breast carcinoma patients[J]. Malays J Patho1，2001，23（2）：65-71.
[6] Schippinger W，Regitnig P，Bauernhofer T，et al. The course of serum HER-2/neu levels as an independent prognostic factor for surviv in metastatic breast cancer[J]. Oncol Rep，2004，11（6）：1331-1336.
（收稿日期：2008-12-10）
