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[摘要] 目的 探讨血管内皮生长因子受体（KDR）在胃癌中的表达及其临床意义。方法 收集60例手术切除的胃癌标本，同时取距离肿瘤组织5cm以上的正常组织，采用免疫组织化学SP法检测癌组织及癌旁组织中KDR的表达。结果 60例患者中胃癌组织KDR的阳性率为55%，癌旁组织中为18.3%，KDR在胃癌组织内的阳性表达率明显高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.01）；KDR的阳性表达率随着胃癌组织的TNM分期Ⅰ～Ⅳ期进展不断增高，具有统计学意义（P＜0.05）。结论 KDR在胃癌组织中存在高表达，且其与胃癌的TNM分期密切相关，通过检测KDR可能会对我们评估胃癌患者的预后情况提供一定的帮助。
[关键词] 胃癌；KDR；免疫组化
[中图分类号] R735.2[文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2011）27-98-02
The Role of Vascular Endothelial Growth Factor Receptor（KDR）in Invasion and Metastasis of Gastric Cancer
YANG YingqiangSONG Zhenya
Department of Gastroenterology, Luqiao Hospital of Taizhou City in Zhejiang Province, Taizhou 318050, China
[Abstract] Objective To study the expression of vascular endothelial growth factor receptor KDR in gastric cancer and its clinical value. Methods Collected 60 specimens from gastric cancer patients. The expression of KDR in gastric cancer tissues and their adjacent normal tissues were detected with SP immunohistochemistry. Results The positive rate of KDR expression in gastric cancer tissue was higher than that in normal tissue（55.0% vs 18.3%）. There was significant difference in the expression of KDR between the gastric cancer tissue and their adjacent normal tissue（P＜0.01）. Besides, the expression rate of KDR in gastric cancer tissue was correlated with gastric cancer TNM stages（P＜0.05）. Conclusion KDR is highly expressed in gastric cancer tissues, and it is closely related to the TNM staging of gastric cancer. To detect the expression of KDR in gastric cancer tissues may be helpful to evaluate the prognosis of patients with gastric cancer.
[Key words] Gastric cancer；KDR；Immunohistochemistry
胃癌作为消化系统常见的恶性肿瘤之一，其死亡率一直位居所有恶性肿瘤之首。研究表明血管的形成是与肿瘤的生长转移密切相关的条件，而大量抗血管生长因子和促血管生长因子的共存，在调节血管形成过程中起重要作用，其中血管内皮生长因子（VEGF）通过与细胞膜上相应的受体（VEGFR）结合在调节血管的形成过程中起主导作用。人血管内皮生长因子受体-2基因（KDR）多分布在血管内皮细胞上，但有研究发现肿瘤细胞KDR表达更强于内皮细胞，其与肿瘤新生血管形成的关系受到越来越多学者的关注。本实验对不同胃癌组织的VEGF受体KDR用免疫组化法进行检测，并将其和正常的组织作为对照，以探讨血管内皮生长因子受体（KDR）与胃癌浸润和转移的关系。
1材料与方法
1.1一般资料
随机选取60例胃癌组织标本，均来自浙江省肿瘤医院外科手术住院患者，其中男26例，女34例，年龄27～78岁，平均56.34岁。所有胃癌标本通过手术切除后经病理证实，癌旁组织取自距肿瘤边缘≥5cm部位的正常组织，通过病理证实未发现肿瘤组织。胃癌组织按照TNM分期法分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期，根据组织学类型的不同分成高分化组和低分化组：高分化组中包括乳头状腺癌和管状腺癌；低分化组则包括印戒细胞癌、黏液腺癌和低分化腺癌。
1.2方法
100g/L甲醛溶液固定所有标本约12～24h，石蜡包埋后制备厚约5μm的连续切片，贴附于预先涂有5g/L铬矾明胶作为黏附剂的载玻片上，制成石蜡切片。切片采用免疫组织化学SP法染色，染色后用10×10及10×50高倍显微镜观察，分析结果。
1.3结果判断
KDR染色阳性：胞浆及胞膜上出现棕黄色的细颗粒。分级根据阳性细胞数量以及染色强度和背景染色两项指标综合分析。根据阳性细胞数量进行分级：阳性细胞数＜25%计为0分；25%～50%为1分；50%～75%为2分；＞75%为3分。根据染色强度和背景染色进行分级：0分：基本未染色、染色和背景近似；1分：染色较浅、略深于背景颜色；2分：着色中度、明显高于背景；3分：强染、深棕着色。两项相加后分为四个等级：0～1分为（-），2分为（+），3～4分为（++），5分以上为（+++）。
1.4统计学处理
应用SPSS11.0统计分析软件，两个样本率的比较采用χ2检验，多个样本间率的比较采用趋势卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
癌旁组织中免疫反应呈阴性或弱阳性信号。胃癌组织中KDR免疫反应阳性物质主要位于癌组织及周边的血管内皮细胞上，呈棕褐色、细颗粒状，背景不着色或略显淡黄色。所有的胃癌组织中，3例肿瘤细胞上（定位于胞膜及胞浆中）有KDR染色信号阳性反应（图1、2）。
胃癌组织中KDR的表达率为55%，癌旁组织中KDR的表达率为18.3%。KDR在胃癌组织内的阳性表达率明显高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.01），见表1。KDR的阳性表达率与胃癌组织的TNM分期密切相关，KDR的阳性表达率随着胃癌的进展存在统计学意义上的增高（P＜0.05），见表2。但KDR与胃癌是否伴淋巴结转移及分化程度没有统计学意义（P＞0.05），见表3。
表1胃癌组织和癌旁组织中的KDR表达[n（%）]
组别 例数 KDR染色
阳性 阴性
癌组织 60 33（55.0） 27（45.0）
癌旁组织 60 11（18.3） 49（81.7）
χ2值 17.3684
P ＜0.01
表2不同TNM分期组胃癌中KDR的表达[n（%）]
胃癌组织TNM分期 例数 KDR染色
阳性 阴性
Ⅰ 8 2（25.0） 6（75.0）
Ⅱ 7 3（42.9） 4（57.1）
Ⅲ 15 8（53.3） 7（46.7）
Ⅳ 3020（66.7） 10（33.3）
χ2值 4.9930
P ＜0.05
表3胃癌是否淋巴结转移组和不同分化程度组中KDR的表达[n（%）]
组别 例数 KDR染色 χ2值 P
阳性 阴性
伴淋巴结转移 4628（60.9） 18（39.1） 2.7442 ＞0.05
不伴淋巴结转移 145（35.7） 9（64.3）
低分化、未分化胃癌 4425（56.8） 19（43.2） 0.2204 ＞0.05
中分化、高分化胃癌 168（50.0） 8（50.0）
3讨论
VEGFR是VEGF高亲和力的特异性膜受体，自从1990年Nora vaisman等首先在牛主动脉弓上皮细胞提取出VEGFR以来，人们已陆续发现了VEGFR-1（Flt-1）、VEGFR-2（KDR）、VEGFR-3（Flt-4）等多种受体类型。KDR是目前研究较多的一种，它主要分布在血管内皮细胞上，可与VEGF-A、VEGF-C以及VEGF-D等结合，起着诱导细胞有丝分裂、增殖和迁移的作用。KDR对血管发生和生长起关键作用，仅在创伤或恶性肿瘤等应激或病理状态下才会出现明显的高表达状态，而正常情况下，KDR处于低表达状态，能维持正常的血管密度和基本渗透功能，以利于营养物质的运输。
VEGF及其受体KDR的表达与胃癌密切相关，已被多位学者研究表明。张频等[1]发现在正常以及癌变胃黏膜组织中VEGF的表达均呈递增趋势，癌变组织中VEGF表达要明显高于正常胃黏膜组织，且在发生转移后VEGF的表达更高。刘东屏等[2]采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法对胃癌组织中的KDR mRNA、Flt-1进行了检测，结果发现KDR mRNA、Flt-1在胃癌组织中的阳性表达率（80.0%、86.7%）明显高于癌旁组织（30.0%、33.0%）。对本实验的60例胃癌及癌旁组织采用免疫组化法进行分析后，结果发现胃癌组织中KDR的表达率为55.0%，而在癌旁组织中KDR的表达率为18.3%。KDR在胃癌组织内的阳性表达率明显高于癌旁组织，两者之间的差异存在显著性（χ2=17.3684，P＜0.01），这一结果与国内的其他学者得出的结论基本一致，提示KDR在胃癌组织中的高表达具有普遍性。
另外在实验结果中，我们发现KDR的阳性表达率与胃癌组织的TNM分期密切相关，并且随着病程的进展，KDR的阳性表达率存在统计学意义的增高（χ2=4.9930，P＜0.05）。这表明KDR在胃癌的生长和转移过程中起着重要的作用。在肿瘤的生长和转移过程中，随着肿瘤的过度生长，导致周围组织缺少氧供后，诱导血管内皮生长因子及其受体的表达增高，KDR表达的增高可起到诱导血管内皮细胞有丝分裂、增殖和迁移的作用。研究表明，肿瘤组织中的内皮细胞增殖指数为10%，而正常组织中的内皮细胞增殖指数仅为0.1%，这与肿瘤组织中KDR的过度表达密切相关[3，4]。本实验中KDR的表达率与胃癌的TNM分期密切相关，这提示KDR的表达可能与胃癌患者的预后有关。尹清云等国内学者通过免疫组化S-P法探讨VEGF在胃癌组织中表达与预后以及预测辅助化疗疗效的关系，结果发现VEGF阳性率在肿瘤＞4cm组和Ⅲ、Ⅳ期及T3～T4组明显高于＜4cm组和Ⅰ～Ⅱ期及T1～T2组，差别均有统计学意义，表明胃癌临床分期、肿瘤大小以及侵润深度等均能影响VEGF的阳性表达[5]。
但在本实验中，我们还发现KDR的表达率与胃癌是否伴淋巴结转移及分化程度没有显著统计学差异（P＞0.05）。这一结果与其他学者的报道不尽相同：Da MX等[6]曾通过免疫组化方法研究了VEGF-C与胃癌的淋巴浸润的关系，结果表明与之密切相关；Choi J等[7]研究了VEGF与VEGFR和胃癌淋巴结转移的相关性，认为VEGF与VEGFR和胃癌淋巴结转移密切相关，是胃癌淋巴结转移的潜在分子标志。考虑到我们收集的病例数不是很多，我们的这一实验结果尚值得商榷，收集更多的样本数可能会有所改观。
综上所述，KDR在胃癌组织中的高表达及其与TNM分期的密切相关，一方面提示我们KDR有助于评估胃癌患者的预后情况，另一方面也表明了一个潜在的新的胃癌治疗手段，通过与KDR等血管内皮因子受体为靶点结合的抗肿瘤血管生成。抗肿瘤血管生成治疗肿瘤方案作为一种全新的靶向治疗手段，具有迅速、高效、抗药性和副作用少等优点，因此通过对胃癌组织中KDR表达的全面研究，在癌症预防和治疗方面起到积极的作用。
[参考文献]
[1] 张频，狄建忠，郭明高，等. 内分泌源性血管内皮生长因子表达对胃癌侵袭性的影响[J].中国现代医学杂志，2006，16（22）：3381-3383，3387.
[2] 刘东屏，王炳元，姜若兰. 胃癌组织内血管内皮生长因子及其受体Flt、KDR mRNA的表达[J]. 中华消化杂志，2000，20（4）：252-254.
[3] 罗庆伟，田小林. 血管内皮生长因子与胃癌淋巴结转移的研究进展[J]. 中国癌症防治杂志，2010，2（2）：158-161.
[4] 王婕敏，周丽雅. 血管内皮生长因子C（VEGF-C）与胃癌淋巴转移关系的研究进展[J]. 中国微创外科杂志，2009，9（11）：992-995.
[5] 尹清云，罗湘江，刘明放，等. 胃癌组织中血管内皮生长因子的表达及其意义[J]. 临床肿瘤学杂志，2006，11（8）：587-590.
[6] Da MX，Wu XT，Wang J，et al. Expression of cyclooxygenase-2 and vascular endothelial growth factor-C correlates with lymphangiogenesis and lymphatic invasion in human gastric cancer[J]. Arch Med Res，2008，39（1）：92-99.
[7] Choi J，Oh Y，Park Y，et al. Correlation of vascular endothelial growth factor-D expression and VEGFR-3-positive vessel density with lymph node metastasis in gastric carcinoma[J]. J Korean Med Sci，2008，23（4）：592-597.
（收稿日期：2011-07-18）
