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[摘要] 目的：研究用甲磺酸伊马替尼治疗子宫肉瘤的可能性。方法：使用免疫组化的方法分析30例甲醛固定石蜡包埋的子宫肉瘤KIT的表达。结果：使用半定量免疫组化计分发现在所有检验的子宫肉瘤中只有1例KIT表达，而且较微弱，而被检验的子宫肉瘤中没有表现出很强的表达。结论：目前的资料表明甲磺酸伊马替尼不可能作为单一有效的药物对子宫肉瘤使用。
[关键词] 子宫肉瘤；KIT；甲磺酸伊马替尼；表达
[中图分类号] R737.33 [文献标识码]A[文章编号]1674-4721（2011）06（b）-033-03
KIT expression in uterine sarcoma and its clinical significance
SONG Yingjun1, LI Jun 2, WANG Xia1
1.Municipal Hospital of Qingdao, Shandong Province, Qingdao 266002, China; 2.Laizhou City Patriotic Sanitation, Shandong Province, Laizhou 261400, China
[Abstract] Objective: To investigate the possibility of treating uterine sarcomas with imatinib mesylate. Methods: Expression of KIT was analyzed immunohistochemically(n=30) in formalin-fixed paraffin-embedded uterine sarcomas. Results: Used a semi-quantitative immunohistochemical score we found only 1 case of uterine sarcomas express used KIT, and relatively weak. While none of the uterine sarcoma tested showed strong expression. Conclusion: The current data suggest that it is unlikely that imatinib mesylate could be used effectively as a single agent in patients with uterine sarcoma.
[Key words] Uterine sarcoma; KIT ; Imatinib mesylate; Expression
子宫肉瘤是女性生殖道罕见的恶性肿瘤，占生殖道恶性肿瘤的1%[1]。如绝大多数其他器官系统的恶性间质肿瘤，子宫肉瘤预后很差。按照公布的数据，尽管它的发病率只占子宫恶性肿瘤的2%~4%，但是超过了子宫恶性肿瘤死亡原因的25%。这很大程度上是由于子宫肉瘤早期症状不明显，子宫肉瘤临床表现与子宫肌瘤临床表现及其他恶性肿瘤相似，术前诊断较困难。通常在较晚期才被诊断，导致大多数患者行完全手术切除实际上是不可能的。而且，最根本的是大多数子宫肉瘤对化疗和放疗反应差。因此，开发新的治疗策略治疗子宫肉瘤是必需的。在癌症治疗中的新的进展是目标治疗剂的使用，这些患者有特殊的分子特征，因此治疗之前需先进行分子分析。在这些药物中最有希望的是甲磺酸伊马替尼，当给予那些胃肠道间质肿瘤GISTS的患者，表现出令人鼓舞的效果，甲磺酸伊马替尼是一种酪氨酸激酶抑制剂，在GISTS中对抗一种蛋白，这种蛋白在肿瘤细胞表面表达，被KIT基因编码，有酪氨酸激酶活性，这种蛋白又称为CD117。本文通过分析子宫肉瘤患者免疫组织化学表达来评估在子宫肉瘤使用甲磺酸伊马替尼的可能性。
1 材料与方法
1.1材料
选取青岛市立医院和青岛大学医学院附属医院妇科2006年1月~2010年6月资料完整、诊断明确的原发性子宫肉瘤标本30例（中位年龄45岁，年龄36~65岁），患者性别、年龄、症状、肿瘤部位、肿瘤大小等来自查体记录和手术记录。术前均未接受任何化疗和放疗。同时取普通子宫肌瘤30例（中位年龄41岁，年龄30~52岁）和富于细胞型子宫肌瘤30例（中位年龄42岁，年龄31~58岁）作为对照，各组之间年龄差异无统计学意义。免疫组化抗体为鼠抗人单克隆抗体，稀释比例为1∶250，购自北京中杉试剂公司。
1.2方法
1.2.1免疫组织化学染色方法标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，切片厚4 μm。免疫组织化学采用两步法，脱蜡水化组织切片，在柠檬酸缓冲液中抗原微波修复，3%H2O2室温孵育15 min，山羊血清封闭，滴加KIT鼠抗人单克隆抗体，37℃孵育2 h，滴加通用型IgG抗体（Fab段）-HRP多聚体，37℃孵育15 min，DAB显色，苏木精复染细胞核，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
1.2.2免疫组织化学结果判定选用经病理确诊的胃肠道间质肿瘤作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。KIT阳性表达呈棕黄色，颗粒状，定位于细胞膜和细胞浆，免疫组化的资料采用半定量的计分系统评价。染色强度采用以下的级别描述：0为阴性，1为低，2为中，3为强。染色细胞的百分比0为阴性，1为＜10%，2为10%~50%，3为51%~80%，4为>80%。按照这个计分，组织被分为低（0~2分）、中（3~6分）、高（7~12分）KIT表达。
1.3 统计学处理
应用SPSS 17.0软件，实验结果率的比较采用校正的χ2检验 ，P＜0.05 为差异具有统计学意义。
2结果
2.1 KIT基因在3种子宫肿瘤中的表达
KIT基因在普通子宫肌瘤和富于细胞子宫肌瘤中无表达，在30例子宫肉瘤中只有1例表达，差异无统计学意义（χ2=2.220，P=0.330），结果见表1。
2.2 C-KIT在不同的子宫肉瘤中的表达情况
按照肉瘤组织类型C-KIT免疫组化染色结果概括见表2。2例癌肉瘤、2例高度恶性子宫内膜间质肉瘤和10例低度恶性子宫内膜间质肉瘤均表达为阴性，16例子宫平滑肌肉瘤中只有1例阳性（1+/10%~50%），15例阴性。总而言之，30例子宫肉瘤中有29例表现阴性，只有1例表现出比较弱的阳性。在任何的子宫肉瘤中没有很强的染色表达。染色阳性定位于细胞质和细胞膜。表2是KIT在不同的子宫肉瘤中的表达，表3是半定量免疫组化染色结果，30例中有1例比较低的染色分数，其余29例均为阴性。图1为C-KIT阳性表达的切片。
3讨论
原癌基因KIT定位于人染色体4q11-12，编码分子量为145KD的跨膜糖蛋白，是Ⅲ型酪氨酸激酶受体[2]。KIT基因主要表达于肥大细胞、黑色素细胞、生殖细胞、胃肠间质细胞和造血干细胞，在这些细胞的发育过程起重要作用。
受分子靶向治疗的启发，Joensuu（2003）首先推荐用甲磺酸伊马替尼（Imatinib mesylate STI571）治疗晚期胃肠道间质肿瘤，最终使晚期患者获得缓解。甲磺酸伊马替尼为酪氨酸激酶选择性抑制剂，它的主要优点包括口服给药和令人喜欢的外形，在治疗剂量有较小的副作用。甲磺酸伊马替尼首先应用于慢性白血病，在白血病中由于染色体易位两个基因融合（bcr和abl）产生了一个新的基因，这个新的基因编码一种蛋白激酶，它的自发活性是造成白血病的原因。在GISTS病例，KIT基因的突变导致了活性蛋白激酶的产生和随后无控制的细胞生长和增殖。甲磺酸伊马替尼对KIT阳性的GISTS是起作用的，而对KIT阴性的GISTS没有表现出任何活性。自从2001年，超过2 000个GISTS患者参与甲磺酸伊马替尼治疗试验，有80%~90%获得临床受益，他们中原来生存期为1年的不到30%。基于GISTS和子宫肉瘤都是间质来源的肿瘤的事实，甲磺酸伊马替尼在子宫肉瘤的应用看起来是合理的治疗选择，KIT在子宫肉瘤的表达前面已经分析，但是由于这种病理组织比较罕见，这种肿瘤总的研究数量到目前为止是有限的，现在不允许下决定性的结论。笔者使用的抗体与其他抗体相比是最敏感的，检验的肿瘤只有1例子宫平滑肌肉瘤有比较弱的表达，其余的都是阴性，而没有表现出很强的KIT的表达。本研究结果与以前的研究是一致的，大多数发现在子宫肉瘤只有很少的KIT免疫组化表达。Winter发现在21例恶性中胚叶混合瘤中有9例KIT免疫组化阳性，17例子宫平滑肌肉瘤中有1例阳性，Klein WM等[3]发现24例中有1例表达，Nakayama等发现26例中有4例表达。下面的3篇论文只分析了KIT在子宫恶性中胚叶混合瘤中的表达，Sawada等发现KIT在间质成分过表达，16例中有6例阳性。Menczer在20例标本中发现没有任何肉瘤细胞的KIT染色，Raspollini MR等[4]发现24例恶性中胚叶混合瘤中只有1例表达。在另外两篇论文中只分析KIT在子宫平滑肌肉瘤中表达，Raspollini发现32例中有17例阳性，而Serrano在18例中没有发现任何的阳性肿瘤。与以上的研究相比，Rushing RS等[5]和Leath等分别发现25例和11例全部阳性。KIT表达在各种研究中的差异，决定于免疫组化，不同的抗体的使用，不同的染色方法，不同的患者群体。从上面的研究中粗略地全面地估计，总的检验子宫肉瘤的例数不超过200例，KIT表达的不超过36%，然而，这很可能是一个过高的估计。在以前显示的肥大细胞渗透到子宫肉瘤强烈染色导致错误的阳性结果，在目前的实验中非特异性染色通过仔细地组织学评估被排除。甲磺酸伊马替尼治疗肿瘤基于KIT受体信号阻断有效，这样看来子宫肉瘤患者不可能从甲磺酸伊马替尼的治疗中受益。另外分子分析表明即使是KIT阳性的子宫肉瘤患者可能对甲磺酸伊马替尼也没有反应。肿瘤对甲磺酸伊马替尼有反应常常是外显子11有突变，KIT需要磷酸化才能启动信号级联反应。下一步我们将要进行流式细胞计数试验和蛋白质印迹试验，通过采取不同的方法来验证我们的结论。
[参考文献]
[1]乐杰.妇产科学[M].7版.北京:人民卫生出版社,2008:276-277.
[2]Wang L,Felix JC,Lee JL,et al.The proto-oncogene c-Kit is expressioned in leiomyosarcomas of the uterus[J].Gynecol Oncol,2003,90(2):402-403.
[3]Klein WM,Kumsn RJ.Kack of expression of c-kit protein(CD117) in mesenchymal tumors of the uterus and ovary[J].Int J Gynecol Pathol,2003,22(2):181-184.
[4]Raspollini MR,Amunni G,Villanucci A,et al.c-Kit expression in patients with uterine leiomyosarcomas: a potential alternative therapeutic treatment[J].Clin cancer Res,2004,10(10):3500-3503.
[5]Rushing RS,Shajahan S,Chendil D,et al.Uterine sarcomas expression KIT protein but lack mutation(s) in exon 11 or 17 of c-KIT[J].Gynecol Oncol,2003,91:9-14.
（收稿日期：2011-03-21）
注：“本文中所涉及到的图表、公式、注解等请以PDF格式阅读”
