【www.zhangdahai.com--承诺书】
（广州王老吉药业股份有限公司，广东 广州 510450）�� 摘 要：目的：控制冻疮消酊的质量，建立红花的薄层色谱鉴别和樟脑、冰片的气相色谱含量测定方法。方法：采用薄层色谱法，鉴别红花药材；用气相色谱法测定樟脑、冰片中的樟脑与龙脑含量。结果：樟脑在0.858~17.130g之间呈良好的线性关系，龙脑在0.915~12.052g之间呈良好的线性关系；樟脑的回收率为97.97%，龙脑的回收率为 97.66%。结论：本质量标准能有效地控制冻疮消酊的质量。�
关键词：冻疮消酊；薄层色谱法；气相色谱法�
中图分类号：R927.11文献标识码：A文章编号：1673-2197（2008）10-0019-02�
冻疮消酊是由红花、肉桂油、樟脑、冰片等组成的中药复方制剂，具有活血祛瘀、止痒止痛、消肿的作用。临床上主要用于冻疮、褥疮的治疗。本文采用薄层色谱法和气相色谱法对冻疮消酊进行更好的质量监控。�
1 仪器、试药与药品�
HP5890A型气相色谱仪；检测器FID；HW-2000型色谱工作站；不锈钢毛细管柱（内径0.25mm，长度30m，膜厚度0.25μm）HP-INNOWAX；METTLER AE240十万分之一型电子天秤；CMAG REPROSTARⅡ型号成像系统；硅胶G板（青岛海洋化工厂）；红花对照药材（中国药品生物制品检定所，批号：120907-200609）；水杨酸甲酯对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110707-200609）；龙脑对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110881-200504）；樟脑对照品（中国药品生物制品检定所，批号：747-200106），无水乙醇为分析纯，广州市化学试剂厂；冻疮消酊及阴性对照（广州王老吉药业股份有限公司提供，批号：071101、071201、071202）�
2 实验方法与结果�
2.1 红花薄层色谱鉴别�
（1）供试品溶液的制备：取精密量取本品5mL置分液漏斗中，加水5mL，用石油醚（60~90℃）振摇提取3次，每次15mL，合并石油醚液（备用），取下层液，蒸干，残渣加80%丙酮1mL溶解，作为供试品溶液。�
（2）对照品溶液的制备：取红花对照药材0.5g，加70%乙醇10mL，超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加80%丙酮1mL溶解，作为对照品溶液。�
（3）阴性溶液的制备：取缺红花的样品，同供试品溶液制法制成红花阴性溶液。�
（4）色谱条件：照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录VI B）试验，吸取上述溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-甲醇-水（5∶1∶6）的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同的黄绿色荧光斑点。阴性无干扰。结果见图1。�
图1 红花薄层色谱图�
1、2、3、冻疮消酊样品（批号：070901、070902、070903），4、红花对照药材，5、阴性对照溶液
2.2 樟脑和冰片的含量测定�
2.2.1 色谱条件�
色谱柱：不锈钢毛细管柱（内径0.25mm，长度30m，膜厚度0.25μm）HP-INNOWAX；柱温：150℃；FID检测器温度：190℃；进样口温度：190℃，氮气流量：80mL•min-1；氢气压力为160kPa；空气压力为260kPa。�
2.2.2 内标溶液的配制�
取水杨酸甲酯对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1mL含水杨酸甲酯5mg的溶液，作为内标溶液。�
2.2.3 对照品溶液的制备�
（1）樟脑对照品溶液的制备 取樟脑对照品60mg，精密称定，置10mL量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。�
（2）龙脑对照品溶液的制备 取龙脑对照品30mg，精密称定，置10mL量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。�
2.2.4 供试品溶液的制备�
取鉴别项下的石油醚液，挥干，残渣用内标溶液溶解定容至10mL，摇匀，作为供试品溶液。同法制得分别缺樟脑与冰片的阴性对照溶液。�
2.2.5 系统适用性试验�
在上述色谱条件下，分别取对照品溶液、供试品溶液及缺樟脑与冰片的阴性对照品溶液进样，理论板数按樟脑和龙脑峰计算应不低于1900。色谱图见图2。�
图2 冻疮消酊样品溶液（A），缺樟脑对照品溶液（B）�
缺龙脑对照品溶液（C）的GC图谱
2.2.6 线性关系考察�
精密称取樟脑对照品适量，加内标溶液配制成每1mL各含0.856mg、1.713mg、3.426mg、5.139mg、6.852mg、�13.704mg�、17.130mg的樟脑对照溶液；精密称取龙脑对照品适量，加内标溶液配制成每1mL各含0.915mg、�1.830mg�、2.745mg、4.821mg、7.319mg、9.038mg、�12.052mg�的龙脑对照溶液。分别吸取1μL注入气相色谱仪中，按上述色谱条件测定各峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，各对照品的浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程：�
樟脑：Y=5.7814×104X+3.978×104，r=0.9997�
龙脑：Y=8.9734×104X+4.2688×104，r=0.9997�
表明樟脑在0.858~17.130μg、龙脑在0.915~12.052μg与峰面积的线性关系良好。�
2.2.7 精密度试验�
取对照品溶液1μL，连续进样5次，测定峰面积值，计算得樟脑与龙脑的峰面积分值RSD为1.5%、1.9%。�
2.2.8 稳定性试验�
取同一供试品溶液，于0、2、4、6、8、12h测定供试品中樟脑、龙脑的峰面积，并计算其峰面积积分值得相对标准偏差为樟脑：RSD=1.93%、龙脑：RSD=1.65%。�
2.2.9 重复性试验�
精密称取同一批号样品，按供试品溶液制备方法平行制备5份，依法测定，计算，结果樟脑与龙脑质量分数的RSD为1.9%、1.5%。�
2.2.10 加样回收率试验�
加样回收率试验：精密量取已知含量的冻疮消酊（批号：071101）样品2.5mL，共5份，置具分液漏斗中，分别精密加入一定量的对照品溶液，按2.2.4项下操作，在上述色谱条件下进行GC分析，测定樟脑与龙脑含量，计算加样回收率，结果见下表1、表2。�
表1 樟脑加样回收率试验测定结果�
表2 龙脑加样回收率试验测定结果�
2.2.11 不同提取溶剂的考察�
精密称取同一批号样品，分别用乙醚和石油醚（30~60℃）提取，结果见表3。�
表3 不同提取溶剂的考察�
2.2.12 样品测定�
分别精密量取不同批号的冻疮消酊5mL，按2.2.4项下操作，在上述色谱条件下对3批冻疮消酊进行GC分析，结果见表4。�
表4 冻疮消酊中樟脑与龙脑的测定结果�
3 讨论�
考察了用乙醚、石油醚（60~90℃）二种试剂分别作为溶剂提取，结果乙醚提取不完全，而石油醚（60~90℃）提取完全，且方法简单易行，故选用石油醚（60~90℃）为提取液。�
参考文献：�
［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［ M］.北京：化学工业出版社，2005：98-99.�
［2］ 魏学冰.气相色谱法测定肤疡宁软膏中冰片的含量［J］.中成药，2004，26（1）：76.
（责任编辑：姜付平）
