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【摘要】 目的 探讨基质金属蛋白酶子（MMP3）与基质金属蛋白酶抑制因子（TIMP2）蛋白在宫颈癌组织中表达、相互关系及意义。方法 采用免疫组化学S-P法检测46例宫颈癌、20例宫颈上皮内瘤变（CIN）和10例宫颈良性病变上皮组织中MMP3及TIMP2的表达情况。结果 宫颈癌组织中MMP3表达水平高于CIN及宫颈良性病变上皮（P0．05)；TIMP2的阳性表达率与宫颈癌分化程度及淋巴结转移有关（P0．05)；结论 MMP3与TIMP2的表达程度与宫颈癌的发生发展密切相关，二者的比例失衡可能与宫颈癌的临床分期有关系。
【关键词】 宫颈癌；MMP3；TIMP2；免疫组织化学
Expression and significance of MMP3 and TIMP2 in cervical cancer DUAN Shu-feng,ZHUN Xin-qun,The Second Affiliated Hospital of Zhengzhou Univesity Zhengzhou 450014,China
【Abstract】 Objective To investigate the expression of MMP3 and TIMP2 in cervical cancer as well as their relationships with clinical characteristics. Methods The expression of MMP3 and TIMP2 were examined with immun- ohistochemical technique(S-P) in the specimens from 46cases of cervical cancer and 20 cases of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and 10 cases of cervical epithelium. Results The positive rate of MMP3 expression was higher in cervical cancer than that in the CIN and cervical epithelium (P0．05); The expression of TIMP2 was correlat- ed with the differentiation of tumor cells and lymph node metastasis (P0．05). Conclusions MMP3 and TIMP2 may involve in the carcinogenesis of cervical cancer，and their disequilibrium may correlate with clinic staging of cervical cancer.
【Key words】 Cervical cancer； MMP3； TIMP2； Immunohistochemistry
宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤[１]，它们是目前危害女性健康最严重的疾病之一，恶性肿瘤最重要的生物学特性之一就是侵袭和转移，同时也是恶性肿瘤治疗失败的最大原因。本文应用免疫组织化学方法对不同的宫颈组织进行MMP3蛋白和TIMP2蛋白检测，研究其与肿瘤分化，侵袭及转移的关系。
1 材料与方法
1．1 材料 试验组为2004年1月至2007年3月在郑州大学第二附属医院住院手术切除的宫颈癌标本46例，年龄28～75岁（平均55岁），术前均未经过放疗或化疗。按组织类型：鳞癌40例，腺癌6例。按细胞分化程度：高分化癌7例，中分化癌18例，低分化癌21例。按FIGO(2000年)标准分期：Ⅰ期21例，Ⅱa期25例。对照组为同期因宫颈上皮内瘤变(CIN)手术的CIN20例及因子宫肌瘤或子宫脱垂手术的宫颈良性病变10例。即用型MMP3抗体，TIMP2抗体及S-P试剂盒均购自北京中杉金桥生物有限公司。
1．2 方法 免疫组织化学染色的具体操作步骤按照试剂盒要求进行。MMP3及TIMP2阳性染色都主要位于胞浆或胞膜，胞核不染色，以细胞膜和细胞质出现黄色颗粒为阳性信号。采用双盲法根据光镜下随机观察切片五个视野，用半定量积分法判断结果，阳性细胞所占百分比为0～5％为0分，6～25％为1分，26～50％为2分，51～75％为3分，>75%为4分。显色强度黄色为1分，呈棕黄色为2分，呈棕褐色为3分。细胞染色强度(等于阳性细胞积分×显色强度积分):0分为阴性（－），1～4分为弱阳性（+），5～8分为中度阳性（＋＋），9～12分为强阳性（＋＋＋）。
1．3 统计学处理 采用SPSS10.0软件包进行分析，所得计数资料用χ2检验比较组间的差异，P0．05），低分化癌组织中MMP3的表达明显高于高分化癌（P0．05），在临床分期及淋巴结转移的表达差异有统计学意义(P
3 讨论
近年来人们对肿瘤细胞浸润转移的生物学机制进行了大量的研究[2]，基质金属蛋白酶(MMP3)及其抑制物(TIMP2)与肿瘤侵袭转移的关系日益受到人们的重视，已经成为肿瘤侵袭转移的研究热点[3，4]。基质金属酶组织抑制物是MMP的天然抑制剂。随着对肿瘤侵袭转移的研究，逐渐意识到肿瘤细胞发生转移的一个关键就是必须具备降解细胞外基质（ECM）的能力，因为ECM是肿瘤细胞移动所遇到的自然屏障。
MMP3是MMP家族中的基质水解酶类，其降解的底物主要为纤粘蛋白(FN),层粘连蛋白（LN），酪蛋白等多种蛋白多糖和糖蛋白[5]。同时MMP3可以将基质分子核心蛋白聚糖剪切，然后释放具有生物学活性的转化生长因子－β(TGF-β) [6],因为转化生长因子－β不仅调控细胞增殖而且对血管生成也有作用，所以释放此因子可对肿瘤的形成产生广泛的作用，本组研究结果发现宫颈癌中MMP3的表达在有淋巴转移者明显高于无淋巴转移者，两者间差异有统计学意义（P=0．008），在不同组织分化癌组织中MMP3的表达差异亦有统计学意义（P=0．017）。该结果说明MMP3与宫颈癌的发生发展分化程度及浸润转移密切相关。
TIMP2是TIMP家族中的一种，目前发现的TIMP家族共有4种，分别为TIMP1、 TIMP2、TIMP3、TIMP4 。其中TIMP2是相对分子量为21 kd的非糖基化蛋白，含有192个氨基酸，可中止MMP家族中几乎所有成员的水解活性[7]。能以1：1的比例与MMP3形成MMP-TIMP复合体，从而阻断MMP3与底物结合，抑制MMP3对ECM的降解，进而抑制肿瘤细胞的浸润与转移。本研究试验结果发现TIMP2在宫颈癌组织的表达与组织分化程度和淋巴转移密切相关（P=0．038,P=0．025）。此结果还可能预示着肿瘤的不断深入浸润过程不单单是MMP3的分泌增高和TIMP2合成的不断减少所致，而是MMP3的升高比例大大超过了TIMP2的升高比例，从而导致MMP-TIMP的比例失衡，近年来基因调控的实验进一步证实了MMP与TIMP比例失衡在肿瘤进展的重要作用。Khokha等通过反义TMP-2mRNA转染在小鼠3T3细胞内对TIMP2进行负调节，结果导致其成瘤性增强，在体外对人羊膜的浸润能力增加，并且在裸鼠形成转移瘤[8]。同时该实验结果也与Grignon等[9]的研究结论相一致。
宫颈癌的浸润和转移是个复杂的多步骤，多因素的病理过程，MMP3表达的增高和TIMP2表达的减少与其有着密切的关系，同时MMP3与TIMP2的比例失衡导致ECM的降解与宫颈癌的浸润转移也有着密切的关系，测定宫颈癌组织中MMP3和TIMP2的表达情况，对将来预测宫颈癌的发生发展浸润转移及判断复发危险等方面具有重要意义，并有望成为判断宫颈癌预后情况的生物学标志物。同时改变MMP3与TIMP2的平衡可能达到改变肿瘤的侵袭性，从而达到抗肿瘤转移的目的。
参考文献
1 丰有吉，沈铿.妇产科学.2005.人民卫生出版社.
2 ENGERS R, Gaeebrt H. Mechanisms of tum or metastasis cell biological aspects and clinical implications,Cancer Res Clin Oncol,2000.126.682-692.
3 Ylisimio S，Hoyhtya M，Turpeenniemi．Humen TJSemm matrix Metalloproteinases-2,-9 and tissue inhibitors of metalloproteinases-1，-2 in lung cancer-TIMP-1 as a prognostic maAer．Antieancex Res，2OO0，20(2B)：1311-1316．
4 ObeIgA，HoyhtyaM，Tavehn B，et ．Limited valueofpreoperative senllll analyses of matrix metaUoproteinases(MMP-2，iMP-9)and tissue inbitors of matrix metaUoproteinases(TIMP-1，TIMP一2)in colorectal callcerj．Anticancer Res，2000，20(2B)：1085-1091．
