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[摘要] 目的 比较发光免疫、酶联免疫这两种免疫学方法检测乙肝病毒标志物的特点和各自的应用价值。方法 用这两种不同的免疫学方法分别对182例乙肝患者的血清标本进行检测,然后计算结果、分析结果。结果 两种方法对乙肝病毒标志物前四项(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb)均敏感,灵敏度达到ng/mL,结果的相互符合率也达到96%以上。而对HbcAb而言,结果的相互符合率仅为89%,因为发光免疫法检测HbcAb时未稀释标本,所以发光免疫法的灵敏度要高于酶免法。结论 两种实验方法各有特点,操作时应根据实验的实际情况来选择。
[关键词] 酶联免疫法; 发光免疫法; 乙肝病毒标志物
[中图分类号] R512.62 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2010)09-65-02
现在实验室免疫学分析用的最广的方法是酶联免疫法和发光免疫法。这两种方法哪种的灵敏度高、它们又有什么样的不足之处,现就这两种方法对乙肝病毒表面标志物的检测作比较,结论如下。
1 材料与方法
1.1 材料
收集182例临床确诊乙肝的病人静脉血样离心,分离出的血清用未加抗凝剂的密闭试管中保存,放置于-20℃环境中备用。酶免法表面抗原质控品由北京市临检中心提供,浓度为2ng/mL。
1.2 试剂和仪器
酶联免疫法试剂采用上海科华生物工程有限公司生产的乙肝两对半诊断试剂盒(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb);试剂为同批号试剂,批号:20081106,校期:20091105。仪器有洗板机(BIORAD MODEL 1575),酶标比色仪(Rayto RT-6000)。化学发光法采用北京源德生物医学工程公司JETLIA-962化学发光免疫测定系统及配套使用的专用试剂盒,试剂批号:200902012290318A,校期:20090917。
1.3 方法
酶联免疫法的操作严格按照使用说明书进行,以表面抗原定值血清作为质控,设空白一空,阴阳对照各两孔。主要步骤是加样,加酶,孵育,洗板,加显色剂,显色,比色。其中核心抗体检测时用生理盐水作1∶30稀释。发光免疫测定与酶免法基本相同,但注意事项较多。变异系数(CV)用2ng/mL表面抗原质控品随样本做10个检测孔,以测得值(酶免为OD值,发光免疫为相对发光强度)计算批内差异,统计两个批次测定的结果计算批间差异。
1.4 结果判断
酶免法:表面抗原、表面抗体和e抗原以阴性对照平均OD与2.1相乘的结果作为临界值,即COV值,大于COV结果为阳性;e抗体与核心抗体以阴性对照平均OD值与0.5相乘的结果作为COV值,小于COV结果为阳性[1]。发光免疫法:表面抗原、表面抗体和e抗原血清样本的荧光强度与阴性对照荧光强度的平均值的比值≥2.1为阳性,0.3为阴性;核心抗体血清样本的荧光强度与阴性对照荧光强度的平均值的比值≤0.1为阳性,>0.1为阴性。以上数值为我室建立的Cut off值。
2 结果
2.1 两种方法检测乙肝表面抗原的灵敏度
见表1,两种方法均能检测到浓度为0.1ng/mL的表面抗原。但对核心抗体的检测发光免疫法的灵敏度要明显高于酶免法。
2.2 两种方法的变异系数
见表2。其中酶免法的批内、批间差异均比发光免疫法要大。
2.3 对182例标本乙肝五项检测的结果一致性
见表3。其中HBsAg、HBsAb、HBeAg、HbeAb的符合率在96%以上,而HbcAb的符合率仅为89%。
3 讨论
就灵敏度来说两种方法差别不大,对乙肝五项检测来说,除了核心抗体的差别较大外,前四项差别较小。但要注意空白对照与阴性对照吸光度过高时的问题。
由于试剂的原因,方法学的差异以及其他影响因素均会导致非特异性反应的发生。相对来说,对发光免疫法的影响较小。从两种试验结果的批内、批间的符合率来看,差异越小,结果的重复性越好。所以说酶免法不适合作定量检测。
发光免疫法可以通过不同浓度标准品来建立标准曲线,从而得到定量结果。酶免法时,cut-off值2～4倍以内的阳性结果均以弱阳性来报告。
酶免法的优点是操作简单方便,适合大量标本,成本低;但因灵敏度过高,反应孔间隔距离近,易相互污染,所以说对部分阳性标本应予复查,以减少错报。发光免疫法的优点是操作简便,结果稳定可靠,重复性好,可定量处理样本;但成本相对较高[2]。
从以上两种试验方法的比较可以看出,它们各有优缺点。从免疫学检验今后的发展来看,虽然酶免法一直处于主导地位,但将来是否有操作更方便,、试剂更廉价地方法取代它,这也需要我们检验界的共同努力,以使方法不断更新,更好地用于临床检验中去。
[参考文献]
[1] 陈慧英,张锦锋,岑小鹏,等. ELISA检测乙型肝炎HBsAg室内质控血清的试剂与使用[J]. 上海医学检验杂志,2000,15(4):203-205.
[2] 肖银龙,殷改芳. 化学发光免疫分析实验及其临床评价[J]. 苏州医学院学报,2000,20(6):536.
(收稿日期:2010-01-06)
