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摘 要：目的：筛选兔耳草发挥保肝、镇痛、抗炎作用的有效部位。方法：用系统溶剂分离法将兔耳草分离成极性不同的组分，通过兔耳草不同组分对D－半乳糖胺致肝损伤小鼠的保护作用对热板法引起小鼠疼痛的影响以及对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响，筛选兔耳草发挥保肝、镇痛以及抗炎作用的有效部位。结果：兔耳草氯仿提取物和正丁醇提取物为兔耳草发挥保肝作用的物质基础，同时氯仿提取物为兔耳草发挥镇痛抗炎作用的有效部位。
关键词：兔耳草；有效部位；药理学研究；保肝；镇痛；抗炎
中图分类号：R282.4 文献标识码：A
文章编号：1007-2349（2011）08-0061-02
兔耳草为玄参科植物短管兔耳草（Lagotis brevituba Maxim）的干燥全草，为多年生草木植物，分布于云南西北部、西藏、四川西北部等海拨5300 m的高山草地。该植物味苦性寒，清热解毒，行血调经，平逆降压，用于治疗肝胆病、高热、烦渴、肠痧、炭疽、疮毒、伤筋等症。目前，藏医用云南兔耳草主治各种类型的肝炎，有较好的疗效［1］。因此推测它有保肝、镇痛、抗炎的作用。目前对于兔耳草药理作用研究很少，笔者按照提取溶剂的不同，将兔耳草乙醇提取物分离成兔耳草亲脂性部位、兔耳草乙醚提取物、兔耳草氯仿提取物、兔耳草正丁醇提取物、兔耳草水提物，选择小鼠保肝、镇痛、抗炎实验，比较各组成分的效果，筛选出兔耳草发挥保肝、镇痛以及抗炎作用的有效部位。
1 实验材料
1.1 实验动物 ICR雄性小白鼠，18~22 g，由西安交通大学实验动物中心提供。合格证书：医动字第08－004号。
1.2 实验药物与仪器 将兔耳草亲脂性部位、兔耳草乙醚提取物、兔耳草氯仿提取物、兔耳草正丁醇提取物、兔耳草水提物均用蒸馏水配成0.5 g（生药）/mL。D－半乳糖胺：由中国医药集团上海化学试剂公司生产，批号：20011211；AST、ALT试剂盒：由中生北控生物科技股份有限公司生产，批号030211；甲醛试剂：西安化学试剂厂生产，批号：030410；联苯双酯，由浙江万邦药业有限公司生产，生产批号030402；阿司匹林，由西安制药厂生产，批号：030618；二甲苯：西安化学试剂厂生产，批号：20030106；GB－204电子分析天平，瑞士梅特勒－托利多公司生产；XD811型生化分析仪，上海迅达医疗仪器中心生产；LD4－2型低速离心机，北京医用离心机厂生产；CS－3G型电子计价称，抚顺宇辰衡有限公司生产；微量移液器、温度计、恒温水浴锅。
2 实验方法与结果［2］
2.1 兔耳草不同组分对D－半乳糖胺致肝损伤的保护作用
取体重18~22 g，ICR种小鼠80只，雌雄各半，随机分为8组。分别为模型组，空白对照组，兔耳草的5个不同极性组分，阳性对照组。模型组和空白对照组每天生理盐水灌胃0.2 mL/10 g，其余各组药物每天按表1显示剂量灌胃。每天给药1次，连续给药7 d，末次给药1 h后，除空白组外，其余各组动物腹腔注射D－半乳糖胺60 mg/kg造模。禁食18 h，眼眶取血，分离血清，用连续检测法测谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST），结果见表1。摘取肝脏，10%甲醛液固定，常规石蜡包埋，切片，HE染色，显微镜下观察病理变化。见表1。
由表1可知空白对照组的AST 、ALT水平相对模型组有显著性差异 ,表明D－半乳糖胺肝损伤模型建造成功。兔耳草正丁醇组及氯仿组可使血清ALT和AST显著降低，提示兔耳草正丁醇部位和氯仿位部位可能为其保肝作用的有效部位。
2.2 兔耳草不同组分对热板法引起小鼠疼痛的影响 选用18~22 g，雌性ICR种小鼠进行实验, 采用热板法,热板温度为(55±0.5)℃,给药前先测定各鼠的正常痛反应作为基础痛阈(放入热板至小鼠舔后足时间,若小于5 s或超出30 s,则弃之) ,共筛得合格小鼠70只,将其随机分成7组,每组10只,分别为空白对照组、兔耳草的五个极性组分、阿司匹林组。空白对照组每天生理盐水灌胃0.2 mL/10 g，其余各组药物每天按表2显示剂量灌胃。每天给药1次，连续给药7 d。分别在末次给药后30, 60, 90 min时间段用热板仪测定小鼠出现舔足的时间,超过60 s不舔足者按60 s计。计算给药后痛阈平均值，并与空白对照组比较，观察各组的镇痛作用。结果见表2。
结果显示，兔耳草氯仿提取物可显著性提高小鼠的痛阈。表明兔耳草氯仿提取物可能为兔耳草产生镇痛作用的有效部位。
2.3 兔耳草抗炎作用有效部位的药理学筛选 取体重18~22 g，ICR种小鼠70只，雌雄各半，随机分为7组。分别为空白对照组、兔耳草的五个极性组分、阳性对照组。空白对照组每天生理盐水灌胃0.2 mL/10 g，其余各组药物每天按表3显示剂量灌胃。各组每日给药一次,连续给药7天,末次给药后1 h后,每只小鼠右耳廓正反两面用50 uL微量移液器涂0.05 mL二甲苯致炎,左耳做对照,15 min后脱颈处死小鼠,沿耳廓基部剪下两耳, 用6 mm打孔器分别在同一部位打下圆耳片，以电子天平称重，两耳重量之差为肿胀度。观察各组药物对二甲苯引起小鼠耳廓肿胀的抑制作用。实验结果见表3。
小鼠右耳用二甲苯致炎后明显肿胀，以肿胀度作为指标，结果显示，兔耳草氯仿对小鼠耳廓肿胀有明显抑制作用，选用耳肿胀度为指标，初步筛选出兔耳草抗炎作用的有效部位为氯仿提取物。
3 讨论
对于兔耳草药理作用研究目前很少，笔者根据民间用药经验，确定研究指标，将对兔耳草化学成分的研究和药理作用的研究相结合，以药理学研究手段筛选兔耳草的有效部位。通过实验证实，兔耳草氯仿层为兔耳草发挥保肝、镇痛、抗炎作用的有效部位。其有效成分应从氯仿中进一步分离。至于有效成分的确定有待进一步研究。
参考文献：
［1］封士兰，潘宣.兔耳草的化学成分研究兰［J］，中草药，2000，31（7）：500~501.
［2］陈奇.中药药理实验［M］.贵阳：贵州人民出版社，1988：1194.
（收稿日期：2011-04-15）
