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【摘要】目的建立复方黄柏软胶囊中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法采用RP-HPLC法，乙睛-0.5‰磷酸水溶液（21：79）为流动相，在检测波长269 nm下测定盐酸小檗碱的含量。结果盐酸小檗碱在20.00～200.00 μg/ml范围内呈良好线性关系。 结论该法简便、重现性好，可用于复方黄柏软胶囊的质量控制。
【关键词】复方黄柏软胶囊；盐酸小檗碱；RP-HPLC法
复方黄柏软胶囊是由黄柏、赤芍、丹参等七味中药组成。为控制制剂质量，我们选择君药黄柏中有效成分盐酸小檗碱作为质量控制指标，采用RP-HPLC法检测其含量，并进行方法学考察。结果表明，本法准确、快捷，能达到控制制剂质量的目的。
1仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪；MWD紫外检测器；复方黄柏软胶囊；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：103574-200401）；乙腈（色谱纯），水（超纯水），其余试剂为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件的选择色谱柱： X-Terra C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），WATERS公司；流动相：乙腈-0.5‰磷酸水溶液（21：79）；测定波长：269 nm ；柱温：31℃；系统适应性：理论塔板数不得低于4200。
2.2对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1 ml含30 μg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备取本品内容物，研细，取约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，称定重量，超声（超声功率为250 W，频率为40 KHz）处理30 min，放冷，称重，加50%甲醇补足减失的重量，滤过,弃去初滤液,取续滤液作为供试品溶液。
2.4阴性供试品溶液的制备取阴性样品（无黄柏药材外，其他组成同复方黄柏软胶囊），按供试品溶液制备方法制备阴性供试品溶液。照上述色谱条件进行试验，在阴性供试品溶液色谱图中与盐酸小檗碱峰无干扰。
2.5空白试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，结果表明，阴性供试品对盐酸小檗碱峰无干扰，见图1。
2.7精密度试验精密吸取对照品溶液（30.05 μg/ml）10 μl，重复进样6次，测得峰面积，计算RSD=0.22%。见表2。
2.8 稳定性试验取本品（批号：060101）10粒，按正文含量测定项下黄柏的供试品溶液制备方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μl，分别第0、1、2、3、6、12 h进样一次，共进样6次，测定峰面积，计算RSD=0.33%。结果表明盐酸小檗碱峰面积在12 h内基本稳定。见表3。
2.8重复性试验取本品（批号：060101）内容物，按正文含量测定项下黄柏的供试品溶液制备方法制备，平行试验5份，测定，结果盐酸小檗碱平均含量为17.01 mg/g，RSD=0.34%。结果见表4。
2.９加样回收率试验取已知含量的样品（批号060101，含量：17.01 mg/g）5份，各0.05 g，精密称定，分别精密加入盐酸小檗碱对照品溶液（36.8 μg/ml，50%甲醇溶解）25 ml及50%甲醇25 ml，超声处理30 min，放冷，称重，50%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液，测定。结果见表5。
2.11 样品测定取3批样品，按正文含量测定项下黄柏的供试品溶液制备方法制备供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，结果见表6。
根据上述试验测定了3批样品6个数据，制定本制剂标准规定：盐酸小檗碱的含量不低于6.0 mg/粒。
3小结与讨论
通过查阅文献，确定以乙腈-0.5‰磷酸水溶液为流动相。经过大量试验，调节二者组成比例，当二者比例为21：79时供试品图谱中盐酸小檗碱峰形良好，与杂质峰分离度达到要求，阴性样品无干扰。因此选择乙腈-0.5‰磷酸水溶液（21：79）作为流动相。
同时对供试品提取溶剂、提取方法、提取时间进行了系统考察，最终确定本文中的供试品制备方法。本法简便，误差小，分析迅速、准确。
研究表明，应用RP-HPLC法测定复方黄柏软胶囊中盐酸小檗碱含量，具有良好的准确度和重复性。方法简便易行，可作为本制剂质量控制标准。
参考文献
1中国药典委员会编.中华人民共和国药典. 北京化学工业出版社，2005.
