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【摘要】目的:观察异位内膜体积及ER、PR的含量,探讨红金消结胶囊对子宫内膜异位症的影响。方法:雌性健康Wistar大鼠50只,随机选取10只大鼠作为正常对照组,其余制备子宫内膜异位症(EMT)模型,EMT术后饲养4周,随机分为4组,即模型对照组、达那唑组、红金消结胶囊大剂量组、红金消结胶囊小剂量组,每组均为10只。各组均于造模后第29天给药,其中红金消结胶囊大、小剂量组分别按300 mg/kg、150 mg/kg 给药,达那唑组以100 mg/kg 给药,正常对照组与模型对照组给生理盐水,灌胃,每日1 次,连续给药8周。观察比较四组异位内膜体积变化及E2、ER的含量变化。结果:给药后大鼠腹腔异位的子宫内膜体积变化,红金消结胶囊大、小剂量组异位内膜体积大于模型对照组,差异有显著性(P�0.05),而且大剂量组体积较小剂量组体积小(P�0.05);模型组大鼠血清E2和异位内膜ER水平显著高于正常对照组(P2和异位内膜ER水平,对子宫内膜异位症有确切疗效。
【关键词】红金消结胶囊;子宫内膜异位症
Influence of Hong-jin Xiao-jie Capsule to endometriosis in rats
Duan Yan-Jie(Second Affiliated Hospital of Chinese PLA General Hospital, Beijing, 100091)�
【Abstract】 Objective:To observe the influence of Hong-jin Xiao-jie Capsule to endometriosis.Methods:Ten female heathy Wistar rats were selected at random as control group. Forty endometriosis ratmodels were made.Twenty-nine days after operation,EMS model rats were randomly divided into 4 groups: a model group,a danazol group, a high-dose Hong-jin Xiao-jie Capsule group and a low- dose Hong-jin Xiao-jie Capsule group . All the rats were treatedfor eight weeks respectively, and then anaesthetised and killed. The ectopic endometrium’s volume , ER and serum E2 were measured and compared. Results:The ectopic endometrium’s volume in high-dose and low-dose larger than that in model group,significantly(P�0.05),and the volume in low-dose group was larger than that in high-dose group(P�0.05). The serum E2 and ER in ectopic endometriums in model group were higer than control group(P2 and ER in ectopic endometriums,and showed a significant therapeutic effects on EMSmodel rat.
【Keywords】Hong-jin Xiao-jie Capsule;Endometriosis
子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)是指具有生长功能的子宫内膜组织出现在子宫腔被覆黏膜以外的其它部位。主要引起不孕(50% 以上)、痛经(70%～80%)、慢性盆腔痛、月经失调。中医认为,“瘀血”是产生子宫内膜异位症症状和体征的关键,湿瘀是子宫内膜异位症的常见和重要致病因素。红金消结胶囊具有舒肝理气、软坚散结,活血化瘀,消肿止痛,本研究观察红金消结胶囊对Wistar大鼠异位子宫内膜的影响,旨在为其治疗子宫内膜异位症提供实验依据。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1实验动物雌性Wistar 大鼠50只,清洁级,体重180～220 g,北京大学实验动物中心提供。
1.1.2主要试剂总RNA提取试剂盒(上海华舜生物工程有限公司),逆转录试剂盒(美国Fermentas公司),PCR试剂盒(大连宝生物工程有限公司)。雌二醇(Estradiol,E2)放免检测试剂盒。
1.1.3主要仪器eppendorf centrifuge5415D高速冷冻离心机(德国),电泳及转膜装置(北京六一仪器厂),PCR仪(美国Pharmacia biotech公司),可见-紫外光凝胶扫描分析系统(美国B io-Rad公司) ,放射免疫γ计数器(美国WALLAC1275型) 。
1.1.4组方红金消结胶囊(云南佑生药业有限责任公司),400 mg/粒,主要组方包括金荞麦、五香血藤、大红袍、柴胡、三七、香附、八角莲、鼠妇虫、黑?蚂蚁、鸡矢藤。具有舒肝理气、软坚散结,活血化瘀,消肿止痛。药物配成每毫升含生药20 mg 混悬液。均于4℃冰箱保存备用。
1.2方法
1.2.1子宫内膜异位症大鼠模型构建戊巴比妥钠麻醉,开腹找到左侧子宫,结扎子宫卵巢端及阴道端,剪取中间约1.5 cm 一段子宫体,置于PBS 液中,剪开,暴露内膜,剥去外膜,缝在右侧子宫直肠窝及肠系膜处,关闭腹腔 。造模后15 d,再次开腹后见异位移植物全部成活,显示造模成功。
1.2.2给药方法随机选取10 只作为正常对照组,其余制备EMT 模型,EMT 术后饲养4 周,随机分为4 组,即模型对照组、达那唑组、红金消结胶囊大剂量组、红金消结胶囊小剂量组,每组均为10只。各组均于造模后第29天给药,其中红金消结胶囊大、小剂量组分别按300 mg/kg、150 mg/kg 给药,达那唑组以100 mg/kg 给药,正常对照组与模型对照组给生理盐水,灌胃,每日1 次,连续给药8周。
1.2.3观察指标观察比较四组异位内膜体积变化及E2、ER的含量变化。
1.3检测雌激素( E2)、孕激素受体(ER)的含量大鼠腹主动脉取血,分离血清,用放免法测定ER 的水平。
RT-PCR检测ERmRNA表达情况,按试剂盒说明书提取异位子宫内膜总RNA,以5 μL RNA 作为模板进行逆转录,PCR 扩增。以β-actin为内参照。PR引物序列:上游5‘AGC CGG TCC GCG TCC AAG3’;下游5‘CCA CCC AGA GCC CGA GGG3。β-actin(内参基因)引物序列:上游:5‘GGC ATG GGT CAG AAG GAT TCC3’下游:5‘ATG TCA CGC CAC GAT TTC CCG C3’。取PCR产物8μL,置1.5%琼脂糖凝胶中电泳,以puc Mix Marker作为相对分子质量标准,电泳结果用凝胶扫描分析系统(GD2000)对目的基因及β-actin进行光密度扫描,以目的基因与β-actin基因光密度比值反映该基因mRNA的相对表达水平。
1.3统计学方法实验数据以x±s表示,数据由SPSS 13.0统计软件包进行单因素方差分析。检验水准α=0.05,P�0.05,差异有统计学意义。
2结果
2.1给药后大鼠腹腔异位的子宫内膜体积变化连续给药8周后,实验大鼠剖腹测量腹腔异位的子宫内膜体积。由表1可知,红金消结胶囊大、小剂量组异位内膜体积与模型对照组比较,差异有显著性(P�0.05),而且大剂量组体积较小剂量组体积小(P�0.05)。
2.2给药后大鼠血清E2和异位内膜ER含量变化模型组大鼠血清中E2和异位内膜ER的水平显著高于正常对照组(P[1]。该病是性激素依赖性疾病,异位内膜的生长和维持依赖于周期性卵巢激素的刺激,且需通过ER及PR发挥作用[2]。子宫内膜发生异位后能否形成内异症可能与遗传因素及免疫因素与炎症有关[3～5]。中医学无子宫内膜异位症病名,但类似此病的临床表现及体征,散见于“痛经”、“月经不调”、“不孕”等疾病范畴。中医认为,人体正常的月经是天癸、脏腑、气血、经络协调作用于胞宫的产物,是胞宫藏泻功能的生理表现,平时藏而不泻,经期泻而不藏,定时将经血排出体外。若七情内伤、劳伤气血、房事不洁、感受风邪、或手术创伤导致冲任损伤,胞宫藏泻功能失常,月经期经血虽有所泻,但仍有部分经血不循常道而逆行,以致离经之血蓄积体内而成瘀血。瘀血不去,新血不得归经,又加重了瘀血的形成,而为“瘕”。因此,瘀是产生子宫内膜异位症系列症状及体征的主要原因,瘀血留聚、脉络不通,发为痛经,影响胞脉、胞络,冲任失调而月经不调、不孕。所以,活血化瘀、散结止痛是治疗本病的基本法则。“瘀血”是产生子宫内膜异位症症状和体征的关键[6]。瘀由血液运行受阻所致,湿由水液运行障碍所生,血瘀则气滞水停,血瘀则津聚湿阻,水湿内聚又可困阻气机,影响气血运行,滞而成瘀,湿瘀二邪互为因果,则渐成积且反复难消。《内经》曰“汁沫与血相搏,则并合凝聚不得散而积成矣”;“凝血蕴里而不散,津液涩渗,著而不去,而积皆成矣”,即是指因瘀血阻滞而津聚湿阻所致瘀积的病理机转。湿瘀互结所致的久宿积,又可反果为因,阻滞气机,加重血瘀气滞水停湿阻的病理过程,如此因果交织、反复难解的病理机转,与子宫内膜异位症复杂的发病机理和难以治愈的临床症状相吻合。研究表明,该病患者血液呈浓、粘、聚等高凝状态,甲皱微循环、毛细血管襻顶有瘀血存在,均有力地支持瘀血这一理论[7]。分析红金消结胶囊方中药物,金荞麦清热解毒、祛风化湿;大红袍能调经活血、消炎、止痛;鼠妇虫破癖血、消包块、利水道、强效止痛;八角莲清热解毒、祛疲消肿;三七能通能补,有较强的活血化痕,消肿止痛的功效;香附行气解郁,调经止痛;黑蚂蚁具有扶正固本、养血安神等功效。综合分析,该药具活血化瘀止痛之效。本研究结果显示给药后大鼠腹腔异位的子宫内膜体积变化,红金消结胶囊大、小剂量组异位内膜体积大于模型对照组,差异有显著性(P�0.05),而且大剂量组体积较小剂量组体积小(P�0.05);模型组大鼠血清E2和异位内膜ER水平显著高于正常对照组(P2和异位内膜ER水平,对子宫内膜异位症有良好效果。
参考文献
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