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[摘要]目的：探讨黑木耳多糖（Auricularia auricular polysaccharide,AAP）对ICR小鼠皮肤光老化的保护作用。方法：选取健康雌性ICR小鼠共50只，随机分成5组各10只：正常组(A)、模型对照组(B)、模型+AAP低剂量（50 mg/kg.d）灌胃组(C)、模型+AAP中剂量（100 mg/kg.d）灌胃组(D)、模型+AAP高剂量（200 mg/kg.d）灌胃组(E)。长波紫外线（ultraviolet A, UVA）联合中波紫外线（ultraviolet B,UVB）照射小鼠制备皮肤光老化模型。每周一、三、五照射，第1周每次照射时间1h，以后每周依次增加1h，自第5周起为5h，直至第14周照光结束。每次照光前各治疗组小鼠给予不同浓度的AAP灌胃。实验结束后取小鼠背部皮肤用测试盒测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-PX）活力、丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量；组织切片HE染色观察皮肤结构改变。结果：与正常组比较,模型对照组皮肤组织中SOD、GSH-PX活力显著降低（P
皮肤光老化是皮肤外源性老化的一个重要组成，是由自然光或人工紫外线（ultraviolet ,UV）光源反复照射引起的皮肤损伤[1]。日光中的长波紫外线（UVA）及中波紫外线（UVB）与光老化的发生密切相关。其发生机制之一是紫外线引起皮肤组织产生大量活性氧簇（reactive oxygen species，ROS），包括超氧阴离子自由基、羟自由基、过氧化氢和单线态氧[2]， 使机体发生氧化应激，造成细胞和组织的损伤。SOD、GSH-PX是机体重要的抗氧化酶，MDA是机体细胞膜受自由基攻击后产生的脂质过氧化产物，三者的测定相互配合能间接反映机体细胞受氧化损伤的程度。研究发现黑木耳多糖具有调节机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗凝血、抗突变、防辐射等生物活性[3]，有清除超氧阴离子、抗氧化及保护线粒体的功能[4]。本研究采用UVA联合UVB照射ICR小鼠建立光老化模型，探讨黑木耳多糖灌胃治疗对小鼠皮肤光老化是否具有保护作用。
1 材料和方法
1.1 材料：雌性断乳ICR小鼠,体重18～22g,由西安交通大学实验动物中心提供；40W紫外线灯管UVB4支、UVA2支，购于合肥赛帆试验设备有限公司； SOD、GSH-PX、MDA测试盒、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所；黑木耳多糖（纯度60%）购于西安斯诺特生物技术有限公司，常温干燥保存；可见光分光光度计、离心机、恒温水浴箱等。
1.2 造模:40W紫外灯管（UVB4支，UVA2支）并列装于木箱制成灯箱[5],将除正常组以外的各组小鼠分笼放入灯箱中照射，小鼠背部距灯源30cm。每次照射前灯管预热15分钟。首次照光前一天用电推剪和市售脱毛膏给小鼠背部脱毛,脱毛面积约9cm2，以后每周脱毛1～2次。每周照射3次（周一、三、五），第1周每次照射1h，以后每周每次增加1h，自第5周起每次5h，直至第14周照光结束。
1.3 动物分组及处理:ICR小鼠50只随机平均分成5组：正常组(A)、模型对照组(B)、模型+AAP低剂量（50mg/kg・d）灌胃组(C)、模型+AAP中剂量（100mg/kg.d）灌胃组(D)、模型+AAP高剂量（200mg/kg.d）灌胃组(E)。将黑木耳多糖溶解在生理盐水中配制成灌胃液。正常组及模型对照组灌胃相应体积的生理盐水。各组均在每次照光前称体重、灌胃。
1.4 取材：最后一次照光结束24h后用6%硫化钠溶液给小鼠背部脱毛。脱毛24h后腹腔注射水合氯醛处死小鼠，立即取下背部脱毛处全层皮肤。一部分放入10%福尔马林溶液中固定过夜，制作病理组织切片，HE染色。一部分皮肤去除皮下脂肪，在冰冻的生理盐水中漂洗，冷冻于-70℃冰箱以制备组织匀浆。
1.5 10%皮肤组织匀浆的制备：将皮肤用滤纸拭干，称重放入小烧杯中，加人冷生理盐水(生理盐水的总量是皮肤组织块重量的9倍)，尽快剪碎后移入玻璃匀浆器制成匀浆[6]用于测定GSH-PX、SOD活力及MDA含量。
1.6 指标测定：SOD活力的测定采用黄嘌呤氧化酶法；GSH-PX是一种重要的催化过氧化氢分解的酶，它特异的催化还原型谷胱甘肽（GSH）对过氧化氢的还原反应，其活力以催化GSH的反应速度来表示； MDA含量的测定采用硫代巴比妥酸法（TBA法）。各项指标的具体测定步骤按测试盒说明书。组织蛋白含量用考马斯亮兰蛋白测定试剂盒测定。每项指标的吸光度用可见分光光度计测定。
1.7 统计学处理：所有数据均用SPSS13.0统计分析软件处理，数据用 表示，各组均数间的差异用方差分析进行检验，并用LSD-t检验作两两比较。
2 实验结果
2.1 SOD、GSH-PX活力及MDA含量：与正常组比较,模型对照组皮肤组织中SOD、GSH-PX活力显著降低（P
[参考文献]
[1]Rijken F, Bruijnzeel-Koomen CAFM. Photoaged Skin: The Role of Neutrophils, Preventive Measures, and Potential Pharmacological Targets[J].Clin Pharmacol Therap,2011, 89(1):120-124.
[2]Scharffetter-Kochanek K,Brenneisen P,Wenk J,et al.Photoaging of the skin from phenotype to mechanisms[J].Exp Gerontol,2000,35:307-316.
[3]于颖，徐桂花.黑木耳多糖生物活性研究进展[J].中国食物与营养,2009,(2):55-57.
[4]李兴泰，高明波.黑木耳多糖清除活性氧及保护线粒体[J].食品科学,2004,25(1):171-173.
[5]金晓哲，吴景东,闫海慧.针刺足三里对小鼠皮肤光老化的影响[J].中国美容医学,2010,19(l):104-106.
[6]李响,梁杰.枸杞多糖与维生素E延缓小鼠皮肤衰老的实验研究[J].现代中西医结合杂志,2009,18(13):1465-1466.
[7]廖勇,廖万清.皮肤光老化的分子机制[J].中国美容医学,2010,19(3):444- 447.
[8]Hou Hu, Li Bafang, Zhao Xue, et al. The effect of pacificcod (Gadus macrocephalus) skin gelatin polypeptides on UV radiation-induced skin photoaging in ICR mice[J].Food Chem,2009,115(3):945-950.
[9]Wlaschek M,Tantcheva-Poo?r I,Naderi L,et al. Solar UV irradiation and dermal photoaging[J].J Photochem Photobiol B: Biol,2001,63:41-51.
[10]Zhang Hua,Wang Zhen-Yu,Zhang Zhi, et al. Purified Auricularia auricular-judae polysaccharide (AAP I-a) prevents oxidative stress in an ageing mouse model[J].Carb Polym,2011,84:638-648.
[11]卢舜飞,孙丽娜,沈佳,等.黑木耳多糖对抗大鼠慢性缺血性脑损伤[J],中国病理生理杂志, 2010,26(4):721-724.
[12]田志杰,沈楠,吕士杰,等. 黑木耳多糖对高强度微波辐射大鼠血清超氧化物歧化酶和肝脏脂质过氧化的影响[J].时珍国医国药,2009,20(12):3011-3013.
[收稿日期]2011-12-13 [修回日期]2012-03-12
编辑/张惠娟
