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【摘要】 目的 观察中药提取物SYZG体内和体外抗肿瘤作用。方法 体内试验采用4种小鼠移植性肿瘤［S-180、HepA、U14和EAC］腋部皮下接种，于接种后次日开始给药，10日内每天给药1次，计算各给药组瘤肿抑制率。体外试验采用4种肿瘤细胞株［MCF、L929、A375-S2、HeLa］，分别与不同浓度的药物共同培养，染色后计算其抑瘤率。结果 ①两种给药途径(ig、ip)下，SYZG对S-180、HepA、U14小鼠移植肿瘤具有抑制作用，抑制率在30%~50%，而对EAC没有抑制作用；②体外SYZG对L929、HeLa、MCF肿瘤细胞株具有抑制瘤作用，IC50分别为1.2、18.2和19．8μg/ml ，而对A375-S2细胞则效果不明显。结论 SYZG对S180、HepA、U14等小鼠移植肿瘤和L929、HeLa、MCF肿瘤细胞株具有明显抑制作用。
【关键词】 中药；肿瘤；瘤株
中药提取物SYZG是从我国特有的薯蓣科植物穿龙薯蓣(Dioscorea nipponica Makino)中分离得到的甾体皂苷元，俗称薯蓣皂素。该化合物具有溶血、降血脂、抗菌、消炎等作用。近些年来，国内外已有许多学者报告薯蓣皂苷有抗肿瘤作用[1-3]。我们观察了SYZG对4种小鼠移植性肿瘤［肉瘤-180(S-180)、肝癌腹水型(HepA)、小鼠宫颈癌-14(U14)和艾氏腹水癌(EAC)］的体内抗肿瘤作用。并观察了在离体条件下，SYZG对4种肿瘤细胞株［人乳腺癌细胞(MCF)、小鼠肺上皮癌细胞(L929)、黑色素瘤细胞(A375-S2)、人宫颈癌细胞(HeLa)］的细胞毒作用。
1 材料和方法
1．1 动物 4种肿瘤腹水传代小鼠，均购自吉林省肿瘤研究所。昆明种小鼠，18~22 g，雌雄兼用，购自中国人民解放军农牧大学实验动物中心(动物合格证号：10-5112)。
1．2 试剂与药品 薯蓣皂苷元粉，纯度>90%,由吉林天然药物研究所提供。注射用环磷酰胺,规格:200 mg/支,批号:980101,上海华联制药有限公司产品。DMSO(Gibco)，MTT(Sigma),5-氟脲嘧啶(5-FU)，批号：010114，上海旭东海普药业有限公司产品；
1．3 细胞株 MCF、A375-S2购自美国ATCC(American Type Culture Collection),L929、HeLa由日本横滨市立大学医学部�惠赠�。
1．4 细胞培养 RPMI-1640培养液，加入10%的胎牛血清，1%的抗菌素(10，000 U/ml青霉素和1，000μg /ml)，2 mmoL/L谷氨酰胺，置于5%的CO2培养箱中培养。
1．5 仪器 CO2培养箱(RCO3000TVBA,Revco)；光学倒置显微镜(37XA8，01ympus)；酶标仪(M450，BIORAD)。
1．6 方法
1．6．1 体内抗肿瘤实验方法[4]实验小鼠按常规接种肿瘤，次日给药，随机分为对照(ig蒸馏水20 mL/kg)、环磷酰胺(ip 20 mg/kg)、SYZG(ig 200 mg/kg、100 mg/kg和50 mg/kg)、和SYZG(ip 100 mg/kg、50 mg/kg和25 mg/kg)8组(每组10只)，每日给药1次，连续10 d。给药结束次日，将动物称重后脱臼处死，剥离出皮下肿块称重，比较各组肿瘤生长情况。
1．6．2 体外细胞毒性实验方法[5]MCF、L929、A375-S2、HeLa肿瘤细胞，按常规方法培养，细胞贴壁后，吸出培养液，将细胞分为5-FU阳性对照组、各不同浓度SYZG药物组，每组设3个平行孔，每孔加入含药物的培养液100 μL，同时设不加药物的阴性对照组、不含细胞的空白组。继续培养，弃上清，每孔加入100 μL新鲜配制的含0．2 mg/ml， MTT无血清培养液，继续培养，弃上清，DMSO溶解，超声波混匀，用酶标仪在570 nm测吸收度(A)，计算肿瘤细胞生长抑制率。
肿瘤细胞生长抑制率(%)=A阴性对照组-A药物组A阴性对照组-A空白组×100%
1．6．3 统计处理 实验数据采用t检验，以x±s表示。
2 结果
2．1 SYZG对4种实验性肿瘤的抗肿瘤作用ig给药后结果见表1-4。
表1-4的结果表明，SYZG经ig给药后，对S-180、HepA、U14小鼠移植肿瘤具有抑制作用，而对EAC小鼠没有明显的抑制作用；并且经ip给药的结果也可得出相同的结论(数据未列出)
2．2 SYZG的体外细胞毒活性 SYZG在0．1-100μg/ml的药物浓度范围内，对3种肿瘤细胞株(L929、HeLA、MCF)具有明显的抑瘤效果，且呈现较好的量效依赖关系，而对A375-S2的作用则不明显。经量效曲线作图可求得L929、HeLa、MCF三种细胞的IC50分别为：1．2、18．2和19．8 μg/ml，均小于20 μg/ml，且药物浓度在100 μg/ml时，对三种细胞的抑瘤率均大于80%，分别为85．4%、98．7%和83．2%。(见表5)。
3 讨论
SYZG在200、100和50 mg/kg ig或SYZG 100、50和25 mg/kgip对3种小鼠移植肿瘤S180、HepA和U14均具有明显的抑制作用，其抑瘤率均在30%~50%。但无论是ig，还是ip，对EAC的抑瘤率均小于30%，都没有抑制作用(P>0．05)。而在离体条件下，SYZG浓度在0．1~100 μg/ml时，其对L929、HeLa、MCF三种肿瘤细胞具有明显的抑制作用。IC50分别为1．2、18．2、1 9 ．8 μg /ml,均在20%以上，在浓度为100 μg/ml时，肿瘤生长抑制率分别达到85．4%、98．7%和83．2%，而对A375-S2细胞则没有明显的抑制作用。这可能是由于不同细胞株对药物的敏感程度不同所造成的，而它们的抗肿瘤机制还有待于进一步研究。我们的药物肠内菌代谢研究证明，各种薯蓣皂苷口服给药时，其在肠道内都要被肠内菌代谢，其主要吸收入血的为代谢产物SYZG。所以可以推测各种薯蓣皂苷口服给药时的抗肿瘤作用，其真正的抗肿瘤疗效成分可能为SYZG。
参考文献
［1］ Ke Hu,et al．Antineoplastic agents；I．Three spirostanol glycosides from rhizomes of Dioscorea collettii var、hypoglauca,Planta Med．1996,62；573-575.
［2］ MimakiK,Nakamura0,SashidaY,Satomi Y, Nishino A,Nishino H,Steroidal saponins from the Bulbs of Lilium longiflorum and Their Antitumor-Promoter Activity．Phytochmistry,1994,37:227-232．
［3］ MeiDong , et al．Two novel furostanol saponins from the rhizomes of Doscorea panthaica Prain et Burkill and their cytotoxic activity．Tetrahedro,2001,57:501-506．
［4］ 李仪奎，中药药理实验方法学.科学技术出版社，1991.512
［5］ 司徒镇强.细胞培养.世界图书出版公司，1996.186.
