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王红,季莉莉,刘辉,李宏峰（天津市中医药研究院附属医院,天津 300120）
亚胺培南是临床常用的对鲍曼不动杆菌具有抗菌活性的和高度化学稳定性的硫霉素类抗生素，但近年来亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌菌株呈渐升趋势，成为了临床治疗的挑战[1]。本研究通过检测分析亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌的耐药基因，以期为临床合理的抗感染治疗和控制医院内感染提供一些依据。
1.1菌株来源 选取2021年5月-2022年5月从我院患者中分离出来的已剔除从同一患者中分离出来重复株的25株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌作为试验对象，标本来源为痰、咽拭子、分泌物、尿、血液和胸腹水等。
1.2仪器与试剂 亚胺培南、美罗培南、哌拉西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、左氧氟沙星、阿米卡星、复方新诺明等药物购于赛默飞世尔科技中国有限公司；
细菌鉴定及药敏卡片和VITEK-2全自动生化鉴定系统购自法国梅里埃公司；
细菌恒温恒湿培养箱购自上海博讯实业有限公司；
低速离心机购自上海卢湘仪离心机仪器有限公司；
多聚酶链反应（PCR）基因扩增仪购自赛默飞世尔科技有限公司；
电泳仪和凝胶成像系统购自美国伯乐公司；
PCR试剂盒购自日本TAKARA BIO株式会社；
PCR引物委托上海英潍捷基公司合成。
1.3方法
1.3.1细菌鉴定及药敏试验 采用法国梅里埃GN67和XN04药敏卡对分离菌株进行鉴定和药敏试验，结果判断标准根据2021年美国临床实验室标准化委员会（CLSI）制定的药敏判断折点，耐药菌株判断标准为显示亚胺培南最低抑菌浓度（MIC）≥16ug/mL。质控菌株为大肠埃希菌ATCC 25922和铜绿假单胞菌ATCC 27853。
1.3.2耐药基因检测 细菌DNA提取方法为煮沸法，耐药基因检测方法为PCR法。耐药基因引物序列参照参考文献[2-3]设计，见表1。PCR扩增反应体系为20uL，反应条件为：预变性条件为94℃、5min，变性条件为94℃、1min，复性条件为55℃、35s，延伸条件为72℃、10min。PCR引物在进行1.5%琼脂糖凝胶电泳后的特异性扩增条带观察用凝胶成像仪，最终基因测序结果比对在Genbank上进行相对应序列比对。
表1 耐药基因引物设计序列
2.1抗菌药物敏感性试验结果 25株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌中，对亚胺培南、美罗培南、哌拉西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、头孢唑林、头孢曲松、左氧氟沙星和阿米卡星等药物均耐药，有20株（80.00%，20/25）对复方新诺明敏感，见表2。
表2 25株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌抗菌药物敏感性试验结果
2.2碳青霉烯酶耐药基因检测结果 25株（100.00%，25/25）亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌均检测出的碳青霉烯酶耐药基因为OXA-23和OXA-51，IMP-1、VIM-2、KPC、NDM-1、OXA-24、OXA-50和OXA-58基因均未检出。
2.3氨基糖苷类及耐消毒剂相关基因检测结果 24株（96.00%，24/25）亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌均检测出氨基糖苷类耐药基因ant(3"") -Ⅰ、aac(6") -Ⅰ和armA，有17株（68.00%，17/25）检测出耐消毒剂相关基因qacE△1。
鲍曼不动杆菌是一种易于生存、对营养要求不高和易在体内定植的革兰阴性短杆菌，是引发呼吸道感染、血源性感染和院内感染的重要机会致病菌，但其耐药率的增加成为了患者尤其是重症患者的棘手治疗问题[4-5]。本研究收集的25株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌除对复方新诺明较敏感外，对其他抗菌药物均耐药，表明鲍曼不动杆菌对碳青霉烯酶类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类等抗生素均具较高耐药率，而复方新诺明因其肝肾毒副作用较大而应用受限，故探讨亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌耐药机制对研发新的药物和控制感染具有重要意义。
本研究发现，25株（100.00%，25/25）亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌，碳青霉烯酶耐药基因OXA-23和OXA-51的检出率为100%，氨基糖苷类耐药基因ant(3"")-Ⅰ,aac (6")-Ⅰ和armA的检出率为96.00%，耐消毒剂相关基因qacE△1为68.00%，与既往孙启山[6]、姜梅杰[2]等人的研究结果相一致，表明当鲍曼不动杆菌发生亚胺培南耐药时，往往也在同时对大多数其他抗菌药物产生了广泛耐药，且消毒剂在临床的应用也成为了鲍曼不动杆菌发生耐药的原因之一，提示应当注重抗菌药物和消毒剂的合理使用及制定有效避免交叉感染的措施。
综上所述，本院分离自临床标本的亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌耐药机制与碳青霉烯酶耐药基因OXA-23、OXA-51和氨基糖苷类耐药基因ant(3"")-Ⅰ,aac (6")-Ⅰ、armA及耐消毒剂相关基因qacE△1有关，应当加强临床院内感染针对性措施的制定。
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