【www.zhangdahai.com--其他范文】
齐孝安，卢金喜，袁 林
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染是世界重要的公共卫生问题之一。慢性乙型肝炎(CHB)患者病情迁延反复，10%～30%患者将发展为肝硬化，部分患者进一步发展为肝细胞癌(HCC)[1]。HBV持续复制是CHB患者病情进展的主要原因，抑制病毒复制，降低体内病毒载量可达到改善患者预后的目的[2]。α-干扰素(α-IFN)是目前治疗CHB患者的主要药物之一，具有抗病毒和免疫调节作用，与核苷(酸)类似物相比，应用疗程短，不易产生耐药性，停药后药物持续应答时间长[3]。临床上，应用α-干扰素治疗CHB患者获得应答后患者病情进展将得到有效的控制。然而，在治疗过程中也有相当部分患者不能获得应答，究其原因，除HBV本身生物学特征和宿主对HBV免疫状态外，宿主相关基因单核苷酸多态性也是影响治疗应答的重要因素[4]。降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide, CGRP)存在于感觉神经末梢，是一种神经肽，对机体多个脏器和系统功能均产生重要的调节作用，通过抑制肝星状细胞活化发挥肝脏保护作用，促进肝再生[5]。α-干扰素-λ4(α-interferon-lambda4, IFNL4)能特异性地结合于异二聚体Ⅱ类细胞因子受体，具有免疫调节和抗病毒功效[6]。本研究探讨了CHB患者CGRP和IFNL4基因多态性对α-IFN治疗疗效的影响，旨在为临床治疗提供参考，现报道如下。
1.1 一般资料 2018年9月～2021年2月我院诊治的CHB患者92例，男51例，女41例；
年龄为31～61岁，平均年龄为(39.4±8.9)岁；
体质指数为18～27 kg/m2，平均为(23.3±1.3)kg/m2。符合《慢性乙型肝炎防治指南》[7]的诊断标准，血清HBsAg阳性超过6个月以上，血清HBV DNA大于或等于1×105copies /mL，血清天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase，AST)和丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)水平分别≥60 U/L，纳入初治患者。排除标准：合并肝癌及其他严重器质性疾病、合并自身免疫性或血液系统疾病、合并获得性免疫缺陷综合征、对本研究治疗药物过敏、重叠其他肝炎病毒感染、入院治疗前3个月内进行过其他免疫或抗病毒治疗、妊娠或哺乳期妇女。入组对象签署知情同意书，本研究获得我院医学伦理委员会批准。
1.2 治疗方法 给予入组患者注射用重组α-干扰素α-2b(北京远策药业有限责任公司，国药准字S20010074)3～5 MU皮下注射，1次/d，连续15 d 诱导治疗后，隔日注射1次，持续治疗1年。
1.3 疗效判定 参照《慢性乙型肝炎防治指南》的疗效判定标准[7]，应答为治疗后血清HBV DNA检测不到或下降值>2 lg copies/mL，肝功能指标正常。
1.4 血清CGRP和IFNL4基因多态性检测 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)法检测CGRP基因rs155209位点及IFNL4基因rs368234815和rs12979860位点多态性。抽取静脉血4 mL，与EDTA混合。实验贝克曼AMPurea XPDNA血液基因组提取试剂盒提取基因组DNA，双蒸水溶解，经纯度检测合格后，-80℃保存。引物合成由成都合成生物科技有限公司进行。CGRP-rs155209：F：5′-GATGCGGCCGAGTGTCT-3′，R：5′-CTCCAGCGAGCGGTAGTG-3′；
IFNL4-rs368234815：F：5′-TTCTGTGATTGACCCTGAGCC-3′，R：5′-CTCCGAGCATTGCCTTCC-3′；
IFNL4-rs12979860：F：5′-GCGCGGAGTGCAATTCAAC-3′，R：5′-TGTACTGAACCAGGGAGCTC-3′。应用Sequenom MassAR-RAY 技术分型。(1)目的基因扩增：取适量的基因组DNA，加入96孔板。取DNA 5 ng、引物2.5 pmol、Taq聚合酶0.1 U、10 mmol/L dNTP 0.5μL。PCR扩增：93℃(15 min)，95℃(30 s)，55℃(30 s)，74℃(45 s)，循环40次，74℃(5 min)；
(2)SAP反应：加碱性磷酸酶0.3 U，去除剩余的dNTP，35℃(40 min)，84℃(5 min)；
(3)单碱基延伸：取5.4 pmol延伸引物、50μmol ldNTP和ddNTP混合物、加Thermosequenase DNA聚合酶0.5 U，94℃(2 min)，94℃(5 s)，55℃(5 s)，74℃(5 s)，循环35次，72℃(3 min)；
(4)用树脂脱盐15 min，转移至SpectroCHIP芯片，进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测。
1.5 血生化和病毒学指标检测 使用罗氏Light Cycler 480 实时荧光定量PCR系统检测血清HBV DNA水平；
使用日本OLYMPUS公司AU400全自动生化分析仪检测血生化指标。
1.6 统计学方法应用 SPSS 20.0统计学软件分析，计数资料以%表示，组间采用卡方检验；
应用Logistic回归分析基因多态性与α-干扰素治疗应答的关系，P<0.05代表差异有统计学意义。
2.1 应答组与非应答组CGRP和IFNL4基因型和基因频率分布比较 在治疗1年末，应答67例(72.8%)，未获得完全应答25例(27.2%)；
经拟合优度卡方检验，两组人群CGRP基因rs155209位点及IFNL4基因rs368234815he rs12979860位点基因型分布符合Hardy-Weinburg平衡定律(P>0.05)；
非应答组CGRP-rs155209位点CC基因型和C基因频率显著高于应答组，而IFNL4-rs368234815位点TT/TT 基因型和T基因频率显著低于应答组(P<0.05，表1、表2)。
2.2 CGRP和IFNL4基因型与α-干扰素治疗应答关联分析 应用非条件Logistic回归模型计算校正性别和年龄，结果显示CGRP-rs155209位点CC基因型是影响α-干扰素治疗无应答的危险基因型，OR值为1.489(95%CI：1.103～2.009)，而IFNL4-rs368234815位点TT/TT 基因型是α-干扰素治疗应答的保护基因型，OR值为0.652(95%CI：0.477～0.893，表3)。
表3 CGRP和IFNL4基因型与α-干扰素治疗应答关联分析
治疗CHB的主要目的在于阻止疾病进一步发展为肝硬化，甚至肝癌，其中抑制HBV复制是延缓肝损伤和控制疾病进展的关键环节之一[8]。α-干扰素治疗以有限疗程、确切疗效、停药后复发率低等优势得到临床医生和患者的认可[9]。然而，在接受α-干扰素治疗的患者中，仅有部分患者对治疗表现出较好的完全应答，实现生化学和病毒学应答，另外一部分患者应答效果差[10]。临床研究发现抗病毒疗效可能与多种免疫学应答基因存在关联。
CGRP基因位于11号染色体短臂，包括6个外显子和5个内含子[11]。CGRP是神经细胞分泌的免疫活性物质，于中枢和外周神经系统中广泛分布，各种组织中均呈现多样生理效应，参与炎症过程，控制免疫应答，在炎症发生发展过程中具有重要的作用。通过肝脏血管扩张改善肝脏血液循环，降低肝脏脂质过氧化物，预防缺血再灌注导致的肝脏损伤[12]。相关研究表明[13，14]，CGRP可减轻CHB患者肝纤维化。CGRP及其受体是治疗CHB的有效靶点。本研究对CGRP基因rs155209位点基因多态性与接受α-干扰素治疗的CHB患者应答进行了研究。本研究应答组rs155209位点TT和CT基因型占比显著高于非应答组，提示CC基因型是α-干扰素治疗的CHB患者无应答的危险基因型，其治疗无应答风险达到TT/CT基因型患者的1.332倍。分析可能的原因，我们认为rs155209位点T→C转换影响了CGRP的正常合成，从而影响CHB患者免疫应答修复，不利于机体清除病毒[14，15]。
IFNL4基因位于19号染色体，包括4个内含子和5个外显子，其编码的干扰素λ4蛋白通过激活JAK-STAT通路产生抗病毒活性[16，17]。本研究分析IFNL4基因rs368234815和rs12979860位点基因多态性与CHB患者接受α-干扰素治疗应答的关系。rs368234815的二核苷酸突变体，即rs368234815(TT/△G)位于19号染色体q13.13内的IFNL3基因上游[18]。本研究应答组与未应答组rs368234815 TT/TT 型所占比例分别为92.5%和76.0%，两组各仅有1例ΔG/ΔG型患者。本研究发现IFNL4 rs368234815位点 TT/TT 型是CHB患者接受α-干扰素治疗应答的保护基因型，未应答组ΔG/ΔG和TT/ΔG基因型比例显著高于TT/TT 型，推测携带IFNL4 ΔG基因者细胞分泌IFN-λ4蛋白，但分泌能力并不强，病毒感染触发肝组织IFN-λ4蛋白弱表达，无法有效抑制病毒感染[19，20]。有研究发现，IFNL4-rs368234815位点TT/TT 型患者在接受α-干扰素治疗后血清HBV DNA水平显著低于TT/CT基因型患者，血清ALT和AST水平显著低于TT/ΔG和ΔG/ΔG型患者，治疗后生化学和病毒学应答率较高。本研究应答组与非应答组rs12979860位点基因分布无显著性差异，rs12979860位点基因多态性不影响α-干扰素治疗后的应答。IFNL4对CHB患者接受α-干扰素治疗后应答的影响机制较为复杂。众多基因参与了α-干扰素治疗应答反应，而单独基因的作用可能较小。本研究的不足之处在于未比较不同病毒载量的CHB患者CGRP和IFNL4基因型的差异，它们是否对α-干扰素治疗应答产生影响，也需要进一步研究。
综上所述，CGRP基因rs155209位点CC基因型是CHB患者接受α-干扰素治疗无应答的危险基因型，而IFNL4基因rs368234815 位点TT/TT 基因型是α-干扰素治疗应答的保护基因型，影响着CHB患者在α-干扰素治疗后生化学和病毒学应答反应。临床上，可针对性地筛选出可能获得更高抗病毒治疗效果的人群给予个体化的抗病毒治疗，是否能提高治疗效果，需要认真研究。
猜你喜欢 干扰素抗病毒多态性 Ⅰ型干扰素抗HIV作用的研究进展▲广西医学(2022年22期)2023-01-30单核苷酸多态性与中医证候相关性研究进展世界科学技术-中医药现代化(2022年3期)2022-08-22慢性乙型肝炎抗病毒治疗是关键肝博士(2022年3期)2022-06-30抗流感 抗病毒 抓住黄金48小时今日农业(2021年21期)2021-11-26乙肝病毒携带者需要抗病毒治疗吗？中老年保健(2021年12期)2021-08-24CLOCK基因rs4580704多态性位点与2型糖尿病和睡眠质量的相关性昆明医科大学学报(2021年3期)2021-07-22α-干扰素联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎中国继续医学教育(2015年6期)2016-01-07干扰素α-1b治疗成人麻疹疗效初步观察中国医疗美容(2015年2期)2015-07-19肝靶向干扰素对小鼠免疫毒性的初步研究中国生化药物杂志(2015年4期)2015-07-07蒙古斑在维吾尔族新生儿中分布的多态性中央民族大学学报（自然科学版）(2015年1期)2015-06-11本文来源：http://www.zhangdahai.com/shiyongfanwen/qitafanwen/2023/0904/649568.html
