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[摘要] 目的：探讨刺五加注射液在骨筋膜室综合征手术中的辅助治疗效果。方法：将18只白兔分成3组，假手术组（A组）、模型组（B组）、实验组（C组）。其中模型组和实验组白兔的左小腿被小儿充气式血压计袖带间断性、重复性的压迫。实验组在手术前1 h注射刺五加注射液。手术结束1 min和2 h，3组均进行静脉穿刺抽血，检测血清CK、LDH、SOD、MDA 的变化，并切取左小腿腓肠肌固定后作HE染色，光镜观察和透射电镜观察。结果：在骨筋膜室综合征手术中，兔子肢体缺血再灌注损伤在给予刺五加注射液后180 min能明显降低血清中MDA、CK、LDH、SOD的含量，增加Bcl-2/Bax；使手术中的兔左小腿腓肠肌的病理改变明显减轻。结论：刺五加注射液可能通过减少自由基生成和提高自由基清除酶的活性，抑制骨骼肌细胞的凋亡，对发生骨筋膜室综合征的骨骼肌产生保护作用，为刺五加临床应用提供了进一步的实验室依据。
[关键词] 刺五加注射液；骨筋膜室综合征；超氧化物歧化酶；肌酸激酶；乳酸脱氢酶；超氧化物歧化酶；Bcl-2/Bax
[中图分类号] R-33 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2012）01（b）-007-03
Surgery of the application of the Acathopanax in compartment syndrome
CHANG Qingyu1, REN Longtao2*
1.Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China; 2.Taiyuan City Centre Hospital of Shanxi Province, Taiyuan 030009, China
[Abstract] Objective: To explore the effect of Acathopanax injection in adjunct therapy of compartment syndrome. Methods: Eighteen rabbits were divided into three groups：sham group (group A), model group (group B), experimental group (group C). The left-behind-limb of rabbits in sham group and model group were overpowered by inflatabl sphygmomanometer. Acathopanax injection was supplied into experimental group 1 hour before surgical operation. Venipuncture blood were acquired in one minute and two hours after surgical operation. CK, LDH, SOD, MDA in serum were detected. The left-leg gastrocnemius muscles were taken, fixed, HE-stained and observed by light and transmission electronic microscope. Results: In the compartment syndrome operation, the rabbit limb ischemia reperfusion injury to spurs in five and injection of 180 min could obviously reduce after serum MDA, CK, LDH, SOD content and increase Bcl-2/Bax; Make the rabbit left crus gastrocnemius surgery pathological changed of the apparent ease. Conclusion: Acathopanax injection has a protective effect on compartment syndrome by decrease the output of oxygen free radical, increase free radical scavenger and restrain the apoptotic of skeletal muscle cell. For Acathopanax′s clinical application to provide further laboratory basis.
[Key words] Acathopanax injection; Compartment syndrome; MDA; CK; LDH; SOD; Bcl-2/Bax
骨筋膜室综合征是临床骨科较常见的并发症之一，其发病机制被生理学家认为是重复性的骨骼肌内压增高，结果导致骨骼肌损害。在骨筋膜室综合征发生过程中，局部压迫使骨筋膜室容积减小而导致骨筋膜室内压力增高，从而使供应肌肉的小动脉关闭，形成缺血-水肿-缺血的恶性循环。在进行常规手术后，恢复血供，则发生血液的再灌注过程。整个缺血再灌注过程会对组织造成损伤。研究表明，这种损伤是由于过量的自由基攻击这部分重新获得血液供应的组织内的细胞造成的。
本实验通过制作家兔骨筋膜综合征模型，然后静脉注射刺五加注射液。使用ELASA试剂盒检测血清中丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）、血清肌酸激酶（CK）以及超氧化物歧化酶（SOD）和病理切片免疫组化检测Bcl-2、Bax的水平。探讨刺五加注射液对骨筋膜室综合征手术治疗的辅助作用。
1 材料与方法
1.1 动物准备
18只平均体重3.5 kg，20周龄的家兔，雌雄不限。购自山西医科大学华西实验动物中心。家兔被饲养在一个自由的环境中，在实验过程中可自由的摄取食物和水。笔者将18只家兔随机均分为3组，即：假手术组（A组）、模型对照组（B组）、刺五加注射液实验组（C组）。正常饲养。
1.2 制作模型与实验方法
仿照白跃宏等[1]的实验方法：A组动物小腿不压迫作为假手术组。B、C组中的所有白兔的左侧小腿使用小儿充气式血压计袖带每天压迫6 h，中间休息2次，每次休息20 min。两组的压力均为80mmHg。1周后，骨骼肌发生明显的变性、坏死，之后进行常规开张减压术。手术前1 h，A组和B组给0.9%氯化钠溶液20 ml/kg作为对照。C组静脉注射刺五加注射液20 ml/kg。
1.3 收集样本并检测
A、B、C组均在手术后1 min以及2 h末静脉穿刺提取血液，使用凝血管静置析出血清后，离心机离心1 500 r/min，离出血清-70℃备用。严格按照试剂盒上说明书步骤操作（各试剂盒均由上海索莱宝生物公司提供）测定CK、LDH、SOD、MDA 的值。并且在手术后2 h末从所有白兔左小腿正中切取一块约 1 cm3腓肠肌组织，用10%甲醛固定、切片。其中一部分进行组织常规HE染色，显微镜观察组织的病理变化。另一部分采用免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax的变化，检测骨骼肌细胞凋亡情况。
1.4 数据分析
所得数据用SPPS 15.0统计软件进行分析，数据结果均以均数±标准差（x±s）来表示，组内数据用配对t检验分析，组间数据用单因素方差分析，检验水准α2=0.05。
2 结果
2.1 白兔血清中SOD、MDA、CK、LDH的改变
详见表1～4。
2.2 骨骼肌组织Bcl-2 、Bax的变化
Bcl-2、Bax免疫组织化学染色阳性细胞主要为腓肠肌细胞，胞质或胞膜呈棕黄色颗粒或匀质状，对照组呈弱阳性表达。B组与A组比较，Bax的表达明显上调，Bcl-2 表达明显下调，Bcl-2/Bax 比值下降；C组与B组比较，Bax的表达明显下降，Bcl-2 表达明显上调，Bcl-2/ Bax比值升高。见表5。
2.3 HE染色观测结果
手术后A组光镜下观察切面上见肌纤维呈多边形样结构规则排列，肌纤维排列整齐规律，肌组织纤维之间细胞核正常,细胞间质结构规整。B、C组切面上光镜下可见肌细胞HE染色变淡，细胞膨胀肿大，轮廓模糊，核肿胀，肌细胞的结构变圆，细胞轮廓不清晰，细胞核可见轻度肿大。其中B组可见肌细胞明显水肿，间质中可见许多炎症细胞的浸润，细胞染色均不清楚，与C组相比差异明显。
3 讨论
在骨筋膜室综合征发病及手术过程中，常常伴随着肢体缺血再灌注过程。此过程会带来一定的损伤。进一步讲，肢体缺血再灌注损伤其发病机制目前的观点较多，如氧自由基损伤以及钙离子超载等。众多观点中，在肢体缺血再灌注损伤中的作用得到多数学者肯定的是氧自由基损伤[2]。
正常体内有一套内源性清除自由基的系统，这些包含超氧化物歧化酶、过氧化物酶及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）、过氧化氢酶（CAT）的系统可以清除体内产生的自由基[3]。组织的损伤主要是由于自由基夺取了生物膜中不饱和脂肪酸中的氢原子，引发自由基的链锁增殖反应，使生物膜的结构和功能紊乱，产生脂质自由基及其降解产物MDA，膜脂质发生过氧化反应。SOD 的活力测定可在一定程度上反映组织内自由基水平以及脂质过氧化的程度。作为脂质过氧化作用的终极产物的丙二醛（MDA）可使生物大分子破坏，此种变化在某些疾病的发生发展过程中起一定的作用[4]。因此丙二醛（MDA）的含量可以反映机体脂质过氧化的程度，其含量的变化可间接反映肢体缺血再灌注损伤程度。同时检测SOD与MDA，则可很好地反映体内氧自由基产生和清除。生物膜如果被破坏掉，细胞内的一些酶类，如LDH、CK等就会漏出细胞外，所以，检测这些酶的活性和含量，可以判断生物膜损伤程度。CK也可以作为骨骼肌损伤的参考标准。
刺五加注射液主要包括刺五加苷A、B、B1、C、D、E、F、G和刺五加多糖等多种活性成分。中国医学传统理论认为[5]，刺五加味辛、微苦、性温、无毒，归脾、肾、心经。具有扶正固本，益气健脾，平肝补肾，益智安神，益精壮骨，活血化瘀，通经活络的作用。现代药理学研究证明，刺五加所含的皂苷、多糖和黄酮化合物，能够扩张活体内脏血管并且降低血管的阻力，同时增加动脉血流量，使血流速度明显加快，维持正常的血液层流[6]。
本实验结果显示刺五加注射液对骨筋膜室综合征及其手术过程中发生的肢体缺血再灌注的损伤具有改善作用，使血清SOD 值明显升高，血清MDA 值降低，减少细胞损伤，使血清CK、LDH 值明显降低。减轻骨骼肌细胞的损伤程度。刺五加对损伤改善作用机制可能与下列原因有关：①通过减少组织耗氧量，调节机体新陈代谢并降低组织代谢；②活血化瘀，改善活体微循环，降低血小板聚集程度，血液黏稠度得以降低；③清除氧自由基，减少脂质细胞膜过氧化，从而使终产物MDA 生成减少；④增强机体对有害刺激的非特异性抵抗力及耐受性。
Bcl-2是重要的抑凋亡基因，Bax具有促进凋亡的作用，Bcl-2/Bax的比值是决定转归的重要因素[7]，两者比值下降，细胞趋于凋亡。本实验结果证实刺五加注射液使凋亡基因Bcl-2 表达增强，Bcl-2/Bax 的比值增大，骨骼肌细胞凋亡减少。提示降低骨骼肌细胞凋亡是刺五加注射液的保护作用之一。
综上所述，刺五加注射液可能通过抑制自由基生成和提高自由基清除酶的活性，抑制凋亡相关基因的表达，减少骨骼肌细胞凋亡，从而对骨骼肌产生保护作用。为骨筋膜室综合征手术中的肢体缺血再灌注损伤的改善提供较为科学的理论依据。
[参考文献]
[1] 白跃宏，张龙海，史桂秋，等.慢性骨筋膜室综合征动物模型的建立及骨骼肌病理变化的实验研究[J].中国临床康复.2002，6（8）：1122-1132.
[2] 王卫国，邓展生，龚家林，等.缺血预处理对肢体缺血再灌注损伤的保护作用[J].湖南医科大学学报，2000，25（4）：353.
[3] Mccord JM.Oxygen-derived f ree fadicals in posit is-chemic tissue injury[J].N Engl J Med，1985，312（3）：159.
[4] 刘时中，林壮基，黄谷送.血清脂质过氧化产物-丙二醛测定及其意义[J].广东医药学院学报，1985，1（1）：18-22。
[5] 王瑞国，秦震，孟芹.刺五加注射液对肢体缺血再灌注损伤的保护作用[J].中国煤炭工业医学，2011，14（9）：1277-1279.
[6] 林娟.刺五加、复方丹参注射液治疗高黏滞血症40例临床观察[J].社区中医药，2011，13（284）：151.
[7] 张震宇，杨卫良，王立峰.断肢再植肌组织缺血再灌注损伤的细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达[J].哈尔滨医科大学学报，2006，40（5）：371-374.
（收稿日期：2011-10-31）
