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【摘要】:目的:研究迷迭香酸对次黄嘌呤为模型高尿酸血症小鼠的影响。方法:选用尿酸生成的前体物质次黄嘌呤(Hypoxanthine),i.p小鼠造成高尿酸血症动物模型,首先探讨造模剂的时效关系。应用低、中、高三个剂量(50,100,200mg・kg-1・d-1)迷迭香酸,i.g给药,连续3d。采用生化全自动分析仪测定小鼠血清尿酸水平。结果:选择次黄嘌呤i.p后45min血清尿酸水平的峰值造模,迷迭香酸(100,200mg・kg-1・d-1)均能显著减少小鼠高尿酸血症的血清尿酸水平,并有一定的量效关系,对正常小鼠的血清尿酸水平同样也有显著影响。结论:迷迭香酸对正常和高尿酸血症小鼠均具有降低血清尿酸水平的作用。
【关键词】:迷迭香酸;高尿酸血症模型;次黄嘌呤;尿酸
【中图分类号】R696+4【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)06-019-2
高尿酸血症(hyperuricemia)是指血液中尿酸的浓度不正常升高的�象,系体内核酸中嘌呤代谢紊乱或尿酸排泄减少所引起的一组疾病,是痛风、肾结石等病症的重要生化基础。高尿酸血症的临床特点为高尿酸血症及由此而引起的痛风性急性关节炎反复发作、痛风石沉积、痛风石性慢性关节炎和关节畸形,常累及肾脏引起慢性间质性肾炎和尿酸肾结石形成,有较高的危害性。可分原发性和继发性两大类,不论原发或继发性,除少数由于药物引起者可停用外,大多缺乏病因治疗,因此不能根治。
目前常用促进尿酸排泄的药物和尿酸合成抑制药物缓解高尿酸血症,控制病情发展。别嘌呤醇是唯一在临床上使用的黄嘌呤氧化酶和黄嘌呤脱氢酶抑制剂,可有效减少尿酸生成,但是,临床使用发现此药可诱发中毒性肝炎、胃肠道反应、血液系统白细胞及血小板减少、变态反应等多方面的不良反应[1]。
国内外在应用民间草药治疗这方面疾病均有着悠久的历史,从天然来源中寻找新型抗高尿酸血症药物依然是药学研究的一个热点[2-5]。迷迭香酸在植物中的分布较为广泛,是一种天然抗氧化剂,有抗炎,抗病毒,抗菌,护肝,抑制肾小球细膜细胞增生,免疫抑制等多方面的药理作用[6-7]。据尚雁君等[8]首次体外实验发现迷迭香酸对黄嘌呤氧化酶有较强的抑制作用,从而显著抑制尿酸生成。Masuka等[9]报道迷迭香酸对黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶系统的黄嘌呤氧化酶竞争性结合的抑制作用。因此,本次实验通过建立小鼠高尿酸血症模型,研究迷迭香酸在体内对高尿酸血症的影响。
1实验材料
1.1动物清洁级昆明种小鼠,雄性,体重(26±2)g,上海斯莱克实验动物中心提供。使用前在实验室适应性饲养1W。在整个实验过程中自由饮水和供给小鼠专用饲料。
1.2仪器和试剂贝克曼LX20全自动生化分析仪(美国);迷迭香酸(Rosmarinic acid)、次黄嘌呤(Hypoxanthine)为Sigma产品;别嘌呤醇为厦门迈克制药有限公司产品,批号:07072501。
2实验方法
2.10.8%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配制称取0.8克CMC-Na加少量蒸馏水湿润膨化调成糊状,再加蒸馏水至100mL,加热煮沸,边搅拌直至全部溶解。
2.2别嘌呤醇(Allopurinol)和次黄嘌呤混悬液的制备精密称取别嘌呤醇和次黄嘌呤,分别用0.8%CMC-Na配制混悬液,其浓度分别为0.5mg・mL-1和50mg・mL-1。
2.3迷迭香酸水溶液的制备精密称取迷迭香酸,用蒸馏水配制成浓度为10mg・mL-1,再取部分依次对倍稀释,配制浓度分别为5mg・mL-1和2.5mg・mL-1的溶液。
2.4次黄嘌呤i.p致小鼠高尿酸血症模型的建立及造模时效关系的探讨 [10-11]小鼠随机分为4组,每组10只,设正常对照组,其余3组i.p次黄嘌呤1000mg・kg-1造模,分别于造模后15、45、60min,摘除小鼠眼球从眼眶取血,血样分别置于1.5mL的离心管中,在室温下自然凝血1h,2500r・min-1离心5min,分离血清,采用贝克曼LX20全自动生化分析仪及其原装配套试剂测定血清尿酸浓度,结果见表1。
2.5迷迭香酸对小鼠高尿酸血症模型的影响实验分组和给药:正常小鼠实验随机分为5组,每组10只,即生理盐水组、迷迭香酸低、中、高剂量组及阳性对照药别嘌呤醇组。模型实验分为6组,即生理盐水组、高尿酸血症空白组、以及迷迭香酸低、中、高剂量组和别嘌呤醇组。开始时生理盐水组和高尿酸血症空白组每天均按20mL・kg-1剂量ig生理盐水,连续3d,高尿酸血症空白组在取血样前45min用次黄嘌呤按1000mg・kg-1剂量i.p小鼠。正常小鼠组实验和模型组实验中,迷迭香酸低、中、高剂量组和别嘌呤醇组每天i.g给药1次,连续3d,迷迭香酸低、中、高剂量分别为50,100,200mg・kg-1,别嘌呤醇剂量为10mg・kg-1,在最后1次给药前15min,模型组同上ip次黄嘌呤,30min后从小鼠眼眶后静脉丛进行采血,测定血清尿酸水平。
2.6统计与处理结果以±s表示,采用spss11.5软件包进行方差检验。
3结果
3.1次黄嘌呤腹腔注射致小鼠高尿酸血症的造模时效关系结果见表1。
表1 次黄嘌呤造模的时效关系(±s,n=10)
组别 N/只剂量/mg・kg-1 血清尿酸水平/μmol・L-1
生理盐水
30min
45min
60 min 10
10 1000
10 1000
10 1000 113.9±23.7
193.1±70.81)
377.7±122.72)3)
237.5±56.14)
注:与生理盐水组比较1)P0.05
表1显示,腹腔注射次黄嘌呤后,30min后小鼠血清尿酸水平已明显升高,45min小鼠血清尿酸水平最高,60min后又明显下降。
3.2迷迭香酸对正常小鼠血清尿酸水平的影响结果见表2。
与生理盐水组比较,迷迭香酸低剂量对正常小鼠血清尿酸水平无影响(P>0.05),而高、中剂量组可降低正常小鼠血清尿酸水平(P0.05)。
表2 迷迭香酸对正常小鼠血清尿酸水平的影响
(±s,n=10)
组别N/只 剂量/mg・kg-1 血清尿酸水平/μmol・L-1
生理盐水 10
迷迭香酸 10
10
10
别嘌呤醇 10
50
100
200
10 113.9±23.7
104.5±12.71)
62.0±15.32)3)
40.7±10.82)4)5)
30.8±8. 62)
注:与生理盐水组比较1)P�0.05;2)P0.05。
3.3迷迭香酸对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响结果见表3。
在此实验条件下,高尿酸血症模型空白组与生理盐水组比较,血清尿酸水平具有非常显著性差异(P0.05)。说明迷迭香酸降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平,并具有一定的量效关系。别嘌呤醇非常显著地降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平。迷迭香酸高剂量组与别嘌呤醇组有无显著差异(P>0.05)。
表3 迷迭香酸对高尿酸血症小鼠尿酸水平的影响
(±s,n=10)
组别 N/只 剂量/mg・kg-1 血清尿酸水平/μmol・L-1
生理盐水组 10
模型空白组 10
迷迭香酸 10
10
10
别嘌呤醇 10
50
100
200
10 106.4±30.61)
382.3±73.1
352.8±65.22)
242.2±49.31)3)
150.6±46.81)4)
99.9±14.71)5)
注:与模型空白组比较1)P0.05;迷迭香酸中剂量与低剂量组比较3)P0.05。
4讨论
近年来,由于人民生活水平的提高、饮食结构与食物来源的变化,痛风的发病率呈上升趋势,因此,加强对高尿酸血症(痛风)疾病防治药物的研究尤其是药效学方面的研究日益重要。
高尿酸血症的发生机制为尿酸生成增多或肾脏尿酸排泄减少。直接注射生成尿酸的前体物质可以较简便地成功复制高尿酸血症的动物模型,可应用此模型,对受试药物进行实验研究。本实验采用直接给小鼠腹腔注射生成尿酸的前体物质次黄嘌呤为模型药建立高尿酸血症模型,并观察其时效关系,其结果与文献报道基本一致,本实验表明45min峰值较高。小鼠i.p次黄嘌呤,造模时间短,可较简便地复制较稳定的高尿酸血症动物模型,应用此模型,将有助于筛选、评价受试药物迷迭香酸抗高尿酸血症的作用及药效。
基于此模型的特点,本次实验在建立小鼠的高尿酸血症模型后,又分别用迷迭香酸低剂量、中剂量、大剂量和别嘌呤醇i.g,测定各给药组的血清尿酸水平,结果迷迭香酸能非常显著地降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平,并具有一定的量效关系,且迷迭香酸高剂量组与阳性对照药别嘌呤醇组有无显著差异,对正常小鼠实验也得到同样的结果。
黄嘌呤氧化酶是人体内产生尿酸过程中的关键酶,因此也是治疗痛风、肾结石时药物的作用靶点。已知别嘌呤醇是黄嘌呤氧化酶和黄嘌呤脱氢酶抑制剂,为治疗高尿酸血症(痛风)的重要药品,本实验证明迷迭香酸与别嘌呤醇有相同的药效。又据尚雁君等[8]首次体外实验发现迷迭香酸对黄嘌呤氧化酶有较强的抑制作用,从而显著抑制尿酸生成。本文从建立高尿酸血症动物模型的在体实验表明迷迭香酸在体内也能抑制黄嘌呤氧化酶,从而降低血清尿酸水平。可见,迷迭香酸可能成为治疗高尿酸血症和痛风的的黄嘌呤氧化酶抑制药物。
迷迭香酸是一种天然抗氧化剂,有多方面的药理作用,而且毒性低[12],备受人们的关注,近年来有关迷迭香酸的药理作用及其机理的研究不断展开。我省民间常用肾茶Clerodendranthus spicatus[Thunb.]C.Y.Wu,系唇形科植物又称猫须草,防治尿路结石、血尿等多种疾病[12-14],迷迭香酸是肾茶的主要成分之一。迷迭香酸有抗氧化、抗炎、抗菌、抗过敏、护肝及改善肾功能等作用,这方面是别嘌呤醇常见不良反应及用药注意事项。因此,迷迭香酸如能作为防治高尿酸血症,痛风及尿路结石的药物较为有利,本实验为进一步研究提供依据。
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