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[摘要] 目的 观察逍遥散对胆管结扎致肝纤维化大鼠肝功能及肝纤维化指标的影响。方法 采用胆管结扎法复制肝纤维化大鼠病理模型，各组大鼠分别以生理盐水、阳性对照药、低剂量逍遥散、高剂量逍遥散进行干预，测定各组大鼠血清ALT、AST、TBIL、HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C水平。结果 肝纤维化模型组大鼠血清ALT、AST、TBIL、HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C水平均显著高于假手术组（P＜0.05）；阳性对照药组、逍遥散高剂量组大鼠血清ALT、AST、TBIL、HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C水平均显著低于肝纤维化模型组（P＜0.05）。结论 逍遥散对胆管结扎致肝纤维化大鼠肝功能具有一定程度的保护作用，对肝纤维化具有一定的防治作用。
[关键词] 逍遥散；肝功能；肝纤维化
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2011）36-27-02
Study on Liver Protective Effect of Xiaoyao Powder in Hepatic Fibrosis Rats
WANG Youli1 LANG Dehai2
1.Shenzhen Health Center of Ninghai Coutry in Zhejiang Province，Ninghai 316514，China；2.Department of Surgeon，Second Hospital of Ningbo City in Zhejiang Province，Ningbo 315010，China
[Abstract] Objective To observe the effects of Xiaoyao Powder on the liver function and hepatic fibrosis indexes of the hepatic fibrosis rats induced by common bile duct ligation. Methods The rats models of hepatic fibrosis were made by common bile duct ligation. The rats were divided into five groups: control group，model group，positive drug control group，low dosage Xiaoyao Powder group and high dosage Xiaoyao Powder group，and all groups were treated separately with normol solution，positive drug，low dosage Xiaoyao Powder and high dosage Xiaoyao Powder respectively. Then the content of ATL，AST，TBIL，HA，PCⅢ，LN，Ⅳ-C in serums of rats were detected. Results Compared with control group，the content of ATL，AST，TBIL，HA，PCⅢ，LN，Ⅳ-C in serums of rats of model group all significantly were raised（P＜0.05）. Compared with model group，the content of ATL，AST，TBIL，HA，PCⅢ，LN，Ⅳ-C in serums of rats of positive drug control group and high dosage Xiaoyao Powder group significantly were reduced（P＜0.05）. Conclusion Xiaoyao Powder has some influences on the protection of liver and has the effect on anti-hepatic fibrosis.
[Key words] Xiaoyao Powder；Liver function；Hepatic fibrosis
肝纤维化（hepatic fibrosis，HF）是慢性肝病重要的病理特征，患者肝脏内纤维组织异常增生，是肝硬化的早期病理基础和必经中间环节[1]。本研究采用胆管结扎法复制大鼠肝纤维化病理模型，探讨逍遥散对肝纤维化大鼠肝功能的保护作用及对肝纤维化的对抗作用，以期为逍遥散临床用于肝纤维化疾病的治疗提供基础试验资料依据，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 Wistar大鼠，雄性，清洁级，体重（200±20）g，购自浙江大学医学动物试验中心提供，动物合格证号：SCXK（浙）2008-0112。
1.1.2 药物与试剂 逍遥散（处方组成：甘草15g，当归30g，柴胡30g，白术30g，白芍30g，茯苓30g），处方中的中药饮片购自宁海县药材公司，经浙江省中医药研究生所定，粉碎成粗粉，常规水煎煮两次，合并滤液，浓缩至含生药1g/mL的药液；利加隆（水飞蓟素胶囊，德国马博士大药厂生产，进口药品注册证号：H20090217）；丙氨酸氨基转氨酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转氨酶（AST）、血清总胆红素（TBIL）等肝功能指标试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、层粘蛋白（LN）、IV型胶原（Ⅳ-C）等肝纤维化指标试剂盒购自北京北方生物技术研究所。
1.2 方法
1.2.1 动物分组 取Wistar大鼠100只，适应性喂饲3d后随机分为5组，即假手术组、肝纤维化模型组，阳性药对照组，逍遥散低剂量组、逍遥散高剂量组，每组各20只。
1.2.2 动物模型建立[2，3] 各组大鼠均于造模前禁食不禁水12h，以2%戊巴比妥钠注射液腹腔注射进行麻醉，剂量为2.5mL/kg。麻醉成功后，常规消毒各鼠腹部皮肤，沿腹正中线做一切口，游离胆总管。肝纤维化模型组、阳性药对照组，逍遥散低剂量组、逍遥散高剂量组以丝线将游离胆总管双重结扎，并于造模后第2天起，分别灌胃生理盐水、利加隆（0.05g/kg）、逍遥散（8g/kg）、逍遥散（16g/kg），1次/d，给药体积均为15mL/kg；假手术组仅游离胆总管，不结扎，于造模后第2天起，灌胃生理盐水，1次/d，给药体积为15mL/kg，连续给药4周。
1.2.3 指标检测及方法 末次给药24h后，乙醚麻醉，腹主动脉抽血处死，留取血液5mL，分离血清，严格按试剂盒操作方法测定ALT、AST、TBIL等肝功能指标水平及HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C等肝纤维化指标水平。
1.3 统计学处理
采用SPSS17.0统计学软件进行数据处理，所有数据均以（χ±s）表示，组间比较采用方差分析，t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 一般情况
实验过程中共有9只大鼠死亡，其中肝纤维化模型组死亡4只，阳性药对照组死亡1只，逍遥散低剂量组死亡3只，逍遥散高剂量组死亡1只。对死亡的大鼠及时进行解剖尸检，结果显示，8只大鼠均于造模手术后次日死于急性肝功能衰竭，1只大鼠于造模手术后第6天死于腹部手术切口感染。
2.2 逍遥散对各组大鼠肝功能指标的影响
肝纤维化模型组大鼠血清AST、ALT、TBIL等肝功能指标水平显著升高，与假手术组比较，差异有统计学意义（t=5.06，P=0.027；t=6.26，P=0.021；t=5.78，P=0.032），提示胆管结扎后，大鼠肝功能明显下降。与纤维化模型组比较，阳性药对照组大鼠血清AST、ALT、TBIL等肝功能指标水平明显降低，差异有统计学意义（t=6.25，P=0.022；t=6.85，P=0.032；t=5.96，P=0.041），逍遥散高剂量组大鼠血清AST、ALT、TBIL等肝功能指标水平亦明显降低，差异有统计学意义（t=5.96，P=0.042；t=5.63，P=0.028；t=5.76，P=0.039），提示高剂量逍遥散对胆管结扎大鼠具有较好的保肝作用。见表1。
2.3 逍遥散对各组大鼠肝纤维化指标的影响
肝纤维化模型组大鼠血清HA、PCIII、LN、IV-C等肝纤维化指标水平显著升高，与假手术组比较，差异有统计学意义（t=4.32，P=0.040；t=4.95，P=0.034；t=4.66，P=0.026；t=3.19，P=0.019），提示胆管结扎致大鼠肝纤维化模型方法可靠，造摸成功。与纤维化模型组比较，阳性药对照组大鼠血清HA、PCIII、LN、IV-C等肝纤维化指标水平明显降低，差异有统计学意义（t=3.78，P=0.017；t=5.12，P=0.042；t=3.76，P=0.038；t=3.10，P=0.014），逍遥散高剂量组大鼠血清HA、PCIII、LN、IV-C等肝纤维化指标水平明显降低，差异亦有统计学意义（t=3.44，P=0.019；t=5.06，P=0.022；t=3.99，P=0.027；t=4.51，P=0.025），提示高剂量逍遥散对胆管结扎大鼠具有较好的抗纤维化作用。见表2。
3 讨论
肝纤维化属祖国医学中的“胁痛”、“积聚”、“臌胀、“黄疸”等病证范畴，其基本病因病机为湿热、疫毒之邪稽留血分，致使气虚血瘀、瘀血阻络，清热利湿、活血化瘀、健脾益气是本病的主要治则[4]。逍遥散原方出自《太平惠民和剂局方》，由甘草、当归、茯苓、白芍、白术、柴胡等药味组成，主治肝郁血虚脾弱证。方中柴胡疏肝解郁，可使肝气条达，为君药；当归养血和血，白芍养血敛阴、柔肝止痛，共为臣药，柴胡配合君药补肝体而助肝用，使血和则肝和，血充则肝柔；白术、茯苓、甘草三药健脾益气，使营血生化有源，共为佐药；甘草调和诸药，兼为使药；以上诸药相合，共奏疏肝解郁、养血健脾之功效，可使肝郁得疏、血虚得养、脾弱得复[5-6]。
胆管结扎后，胆道梗阻，胆管内胆汁淤积，肝窦间胆汁反流，组织体液中TBIL水平异常升高，肝脏实质细胞及肝脏免疫功能等受到损害，引起肝脏间质纤维化，肝细胞坏死或凋亡，肝细胞膜通透性增高，其内部富含的AST、ALT等多种酶大量释放入血，从而使血中AST、ALT活性水平升高[7]。故根据血中TBIL、AST、ALT等指标活性水平升高的程度，可反映出肝损伤的严重程度。而肝纤维化形成过程中，肝内弥漫性细胞外基质过度沉淀，能够反映细胞外间质成分的HA、PCIII、LN及Ⅳ-C生成量会随之增多，或其降解量会随之减少[8]。
本研究结果表明，利用胆管结扎法致大鼠肝纤维化模型的方法简便易行，模型组大鼠血清AST、ALT、TBIL等肝功能指标水平及HA、PCIII、LN、IV-C等肝纤维化指标水平均显著升高，说明肝纤维化模型成功，结合造模术后大鼠一般情况分析，可说明该造模方法成功率较高。高剂量的逍遥散可显著降低因胆管结扎而致肝纤维化大鼠血清AST、ALT、TBIL等肝功能指标水平，并显著降低其血清HA、PCIII、LN、IV-C等肝纤维化指标水平，表明中药复方逍遥散对胆管结扎致肝纤维化大鼠肝功能及肝纤维化病情就有明显的保护和治疗作用，且其效果与阳性对照药利加隆相当，但有关其保肝及抗肝纤维化的作用机制尚有待于进一步深入研究。
[参考文献]
[1] 邝满元，贾蕾罗，明英. 二氢杨梅素对肝纤维化大鼠肝功能及肝纤维化指标的影响[J]. 中国民族民间医药，2009，20（8）：6-7.
[2] 阴宏，马红，刘乃慧，等. 大鼠胆管阻塞性肝纤维化模型的建立[J]. 实验动物科学与管理，2002，19（2）：1-4.
[3] 赵永忠，漆志平，徐庆，等. 荔枝核总黄酮抗胆管结扎大鼠肝纤维化的作用及机制[J]. 世界华人消化杂志，2010，18（20）：2084-2089.
[4] 杨寿辉，刘飞. 化纤方对肝纤维化大鼠肝功能及肝纤维化指标的影响[J]. 中西医结合肝病杂志，2008，18（5）：294-296.
[5] 邓中甲. 方剂学[M]. 北京：中国中医药出版社，2002：85.
[6] 张宁，夏珂，王业秋. 逍遥散在肝损伤模型大鼠体内的药效学和药动学研究[J]. 中草药，2011，42（8）：1576-1579.
[7] 戚忠玺，耿兰书，耿束华. 消臌软坚丸对肝硬化大鼠肝功能、肝纤维化指标及肝脏病理学的影响[J]. 中医研究，2008，21（8）：11-15.
[8] 卢雯雯，陈玖，吴国琳，等. 葛根素对酒精性肝损伤大鼠血清转氨酶及肝纤维化指标的影响[J]. 浙江中医杂志，2008，43（1）：7-9.
（收稿日期：2011-09-27）
