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[摘要] 目的 建立HPLC法测定克霉唑乳膏含量的不确定度分析方法。方法 通过建立HPLC含量测定法的数学模型，找出影响不确定度的因素并对各个不确定度分量进行评定。结果 计算各分量的相对标准不确定度，由此计算合成不确定度和扩展不确定度，从结果可看出对照品带来的不确定性较大。结论 测量不确定度可用于对克霉唑乳膏含量测定结果的评定。
[关键词] 克霉唑乳膏；含量；HPLC法；测量不确定度
[中图分类号] R927 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2011）36-78-02
Uncertainty Analysis on Assay for Clotrimazole Cream by HPLC
WANG Zhengyu
Suzhou Institute for Drug Control in Anhui Province，Suzhou 234000，China
[Abstract] Objective To establish an uncertainty analysis method for Clotrimazole cream by HPLC. Methods The mathematic model was established by HPLC identified the influence factors impact uncertainty and each component of uncertainty was also evaluated. Results Each component of uncertainty was calculated by analyzing the various variable parameters in the procedure，the combined uncertainty and expanded uncertainty were finally obtained. The results showed the control brought greater uncertainty. Conclusion The mathematic model of uncertainty is establish for applicable to evaluate the accuracy of assay of Clotrimazole cream.
[Key words] Clotrimazole cream；Content；HPLC；Uncertainty of measurement
克霉唑属吡咯类抗真菌药，对白念珠菌则可抑制其自芽孢转变为侵袭性菌丝的过程；其含量大小直接影响到药品的治疗效果，而在含量的测定过程中存在着许多不确定因素，由于测量误差的客观存在，我们对被测量值的不能肯定的程度称为不确定度。本文依据药品质量标准对其进行含量测定，并按照测量不确定度评定与表示方法[1]的方法对实验进行不确定度进行分析和评价，现报道如下。
1 实验仪器与方法
1.1 仪器与试药
Waters2695-2489型高效液相色谱仪（美国沃特斯公司）；梅特勒XP205型电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）（d=0.01mg/0.1mg）；经标定的A级100mL、50mL单标容量瓶。哌拉西林对照品（中国生物制品检定所提供，批号：100037-200306，含量100%，干燥后使用）；克霉唑乳膏（芜湖三益制药有限公司，批号：100204，标示量为10g/支，含量0.1g）；甲醇为色谱纯；其余试剂为分析纯；水为重蒸馏水。
1.2 色谱条件
色谱柱：日本岛津ODS C18（250mm×4.6mm，5μm）；填充剂：用十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：磷酸盐溶液-甲醇（25：75）流速1.0mL/min；进样量：10μL；检测波长：254nm。
1.3 测定法
对照品溶液的制备：取对照品适量（对照品1：11.80mg；对照品2：11.52mg），置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1mL中约含克霉唑0.5mg的溶液。供试品溶液的制备：取本品5支内容物混匀，精密称取适量（供试品1：1.3351g；供试品2：1.3325g），置25mL量瓶中，加甲醇15mL，置50℃水浴中振摇使克霉唑溶解，放冷至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，置冰浴中放置2h，立即滤过，取续滤液放置室温，即得。按照质量标准测定，结果计算出克霉唑的含量为90.3%。
2 结果
2.1 数学模型[2]
本品哌拉西林峰面积按外标法计算，克霉唑含量计算公式如下：
式中：Y-克霉唑乳膏百分含量，W0-对照品取样量，Wx-供试品取样量，AO-对照品中克霉唑的峰面积，S-对照品纯度100%，Ax-供试品中克霉唑的峰面积，-克霉唑乳膏的平均装量，f0-对照品稀释倍数，fx-供试品稀释倍数。可以得出方差：
2.2 各分量的相对标准不确定度
2.2.1 对照品纯度的相对准确不确定度 克霉唑对照品纯度为100%，对照品纯度所引入的不确定度u（S）属于B类不确定度。参照相关文献[3]，按均匀分布换算：u（S）=0.25%/■=0.14%（暂假定其分散区间的半宽度a=0.25％），故：urel（S）=■=1.4×10-4。
2.2.2 对照品的称量过程中引起的相对标准不确定度 （1）天平示值所引起的不确定度：本实验用天平经过专业机构鉴定合格，电子天平的鉴定证书给出的最大允差为±0.03mg，按矩形分布计算：u（W01）=0.03/■=1.732×10-2mg。（2）称量重复性所引起的不确定度：鉴定证书给出的重复性误差为0mg，故u（W02）=0mg对照品采取的是减重法称量，本实验共称取两份对照品，每份共称量了两次（WO1=11.80mg，WO2=11.25mg），故每份对照品称量的不确定度分别为：■，
所以对照品称量相对准确不确定度为
2.2.3 玻璃仪器引起的相对标准不确定度 ①温度：容量瓶的校准是在室温为20℃下进行，本次实验温度也保持在20℃，所以由温度引起的标准不确定度可以忽略不计。②校准：实验过程中用到一个A级25mL容量瓶，其容量允差为±0.03mL，按均匀分布计算，由容量允差所引起的标准不确定度为：u（25）a=0.03/■=1.732×10-2mL。
2.2.4 供试品和对照品稀释相对标准不确定度 供试品溶液稀释和对照品溶液稀释过程中都用到25mL容量瓶1个，故由稀释所引起的相对标准不确定度为：urel（f0）=u（25）a/25=1.732×10-2/25=6.928 ×10-4，urel（fx）=6.928×10-4。
2.2.5 供试品称量引起的相对标准不确定度 （1）天平示值引起的不确定度：u（Wx2）=0.03/■=1.732×10-2mg。（2）天平称量重复性引起的不确定度：u（Wx1）=0/■=0mg。
平行称量供试品两份，取样量分别为：样品1：1.3351g，样品2：1.3325g。供试品1的urel（Wx-01）=■=2.599×10-4，供试品2的urel（Wx-02）=■=2.604×10-4。
所以，供试品称量的相对标准不确定度为
2.2.6 对照品峰面积引起的相对不确定度 （1）实验过程中，第一份对照品共进样5次，峰面积分别为1016497.85、1014151.81、1012991.14、1014735.03、1015554.85，平均峰面积AO2=1014486.14。可以得出相对偏差SD=1309.317，urel（AO1）=1.290×10-3。（2）第二份对照品共进样3次，峰面积分别为：1016454.56、1018113.57、1017112.7，平均峰面积AO2=1017226.94。同理可得urel（AO2）=8.21×10-4。对照品溶液色谱峰面积的相对不确定度：urel（AO）= ■=1.327×10-4。
2.2.7 样品峰面积的相对不准确度 样品1峰面积：1048989.68、1059992.96、1048835.30；样品2峰面积：044787.33、1049553.47、1048858.12，可以得出相对偏差SDX1=6397.778，urel（AX1）=6.078×10-3SDX2=2574585，urel（AX2）=2.457×10-3。所以供试品峰面积的合成相对不确定度：urel（AX）=■=5.691×10-4。
2.3 不确定分量
各因素引起的不确定量进行汇总。见表1。
3 讨论
笔者通过对HPLC法测定克霉唑乳膏含量中不确定度的逐一分析和量化，评定出测量结果的合成标准不确定度和扩展不确定度。从结果可以看出不确定度主要来自对照品的称量，本实验对照品取样量相对供试品较小，容易引起误差也是必然，为了减少误差，称量过程中要多注意环境的影响，实验前应校正天平，在试验过程中要遵循SOP严格操作，尽量排除偶然误差，减小系统误差，把实验做好做准。由于本品为乳膏剂，故在取样时应特别注意，应准确称量，避免因称量不准所引起的含量值不准。
不确定度的分析，有助于我们发现试验过程中出现的偏差，发现问题、解决问题，最终能提高试验的准确性，提高实验者的试验技能[5]。因此，日常检验工作中，不确定度的评估工作应定期开展。
[参考文献]
[1] 国家质量技术监督局. 测量不确定度评定与表示[M]. JJF1059-1999，北京：中国计量出版社，1999：19-24.
[2] 沈圆，郭亚东. 浅谈测量不确定度评定中“数学模型的建立”[J]. 中国卫生检验杂志，2005，15（12）：1534.
[3] 黄诺嘉，杨文红，黄奕滨，等. HPLC法测定芦荟胶囊中芦荟苷含量的不确定度评定[J]. 中国药业，2009，12（9）：1318-1320.
[4] 李金海. 误差理论与测量不确定度评定[M]. 北京：中国计量出版社，2003：148.
[5] 储黎娟. 冷原子吸收光谱法测定食品中汞不确定度评定[J]. 中外医学研究，2011，9（13）：153-154.
（收稿日期：2011-11-04）
