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【摘要】目的：研究双黄连糖浆抗菌、镇咳作用，从药理学角度验证双黄连糖浆的功效。方法观察双黄连糖浆体内体外的抑菌作用；对氨水所致咳嗽模型小鼠的镇咳作用，再通过测定小鼠气管酚红分泌量观察其祛痰作用。结果双黄连糖浆具有明显的体内体外抑菌作用，小鼠咳嗽次数减少及咳嗽潜伏期延长，明显增加小鼠气管酚红分泌量。结论双黄连糖浆具有明显的抗菌作用，具有良好的镇咳、祛痰作用。
【关键词】双黄连糖浆；抗菌试验；镇咳试验
双黄连[1] 糖浆是我院精心筛选双花、黄芩、连翘等制成的糖浆剂。有效成分浸出率高，保持了中药汤剂的特色和疗效。在临床用于治疗上呼吸道感染引起的发热、头痛、口干咽痛、等症状。为从药理学角度验证其功效，为临床合理用药提供科学依据，我们对其进行了抗菌、镇咳药理实验研究。
1材料
1.1实验药物
双黄连糖浆，武警黑龙江省总队医院制剂室自制（武制字（2006）B08017），批号：081217。按生药计含量为0.4g／m1，用法与用量：口服一次10～20ml，一日二～三次。(本次试验按一次20ml，一日三次计算)。成人(60kg)日治疗量为1.0ml/kg=(20ml×3次)／60kg。给药剂量：按成年动物每公斤体重给双黄连糖浆计算。阳性对照药：双黄连口服液(20ml／支，哈尔滨三精制药厂，批号：0807214)。口服一次1～2支，一日三次。(本次试验按一次2支，一日三次计算)。成人(60kg)日治疗量为1.0ml/kg=(20ml／次×3次)／60kg。按成年动物每公斤体重给双黄连口服液计算。
1.2菌种：标准菌株：金黄色葡萄球菌26003，大肠杆菌44102，由中国药品生物制品检定所分发，黑龙江省药品检验所提供。临床分离株：金黄色葡萄球菌，白色葡萄球菌，大肠杆菌，肺炎克雷伯氏杆菌，肺炎双球菌，乙型溶血性链球菌由哈尔滨医科大学微生物教研室鉴定及提供。
1.3动物：昆明种小鼠，由黑龙江省药品检验所动物室提供。实验动物生产许可证号：SCXK（黑）2006―005。
1.4试剂、仪器：胃膜素：由哈尔滨生化制药一厂提供。营养肉汤培养基，黑龙江省药品检验所提供。千分之一电子天平，日本岛津。紫外可见分光光度计，UV-265日本岛津。
1.5统计学处理：资料数据以ｘ±ｓ表示，计量资料数据用“t”检验。
2方法与结果
2.1体外抑菌作用[2、3]
2.1.1培养基制备：取营养肉汤30g，加蒸馏水1500ml溶解，每试管分装lOml，置高压灭菌锅中0.11Mpa，灭菌20min，即为液体营养肉汤培养基，置冰箱4℃保存备用。
2.1.2受试药制备：取双黄连糖浆lOml；双黄连口服液lOml。两药调PH至7.4，置高压灭菌锅中0.11Mpa，灭菌20min备用。
2.1.3液体培养基菌种制备：以接种环沾取菌种，移于液体培养基内，于37℃恒温培养箱内培养18h，细菌生长良好，用标准细菌浊度计定量测定细菌密度为109个/ml。试验当日，用生理盐水对各种菌作10-3稀释备用。
2.1.4试验步骤：取144支无菌小试管分16组，每组9管，各管放入无菌培养基1ml，在无菌条件下吸待测药液1ml，放入第1管中，混匀，吸出1ml放入第2管中……，如此稀释至第8管，从第8管吸取1ml弃去，以第9管作为空白对照管。除第8管外，各管加0.1ml、10-3待测菌液，混匀，于37℃恒温培养箱内培养18h。以浊度为指标，检查试管中有无细菌生长，以不显示混浊的最高药物稀释度―细菌未生长的那一管药液稀释度，作为该药的最低抑菌浓度(MIC)。结果见表1、2、3。
表1双黄连糖浆抑菌试验结果
稀释度 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:12 阴对 阳对
浓度(mg／ml) 250 125 62.5 31.2 15.6 7.81 3.9 1.95 -
金葡菌 26003
大肠杆菌 44102
金黄色葡萄球菌
大肠杆菌
白色葡萄球菌
肺炎克雷{白氏杆菌
肺炎双球菌
乙型溶血型链球菌 -
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注：“+”为有细菌生长；“-”为无细菌生长。
表2双黄连口服液抑菌试验结果
稀释度 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:12 阴对 阳对
浓度(mg／m1) 250 125 62.5 31.2 15.6 7.81 3.9 1.95 -
金葡菌 26003
大肠杆菌 44102
金黄色葡萄球菌
大肠杆菌
白色葡萄球菌
肺炎克雷伯氏杆菌
肺炎双球菌
乙型溶血型链球菌 -
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注：“+”为有细菌生长；“-”为无细菌生长。
表3双黄连糖浆与双黄连口服液抑菌结果比较
细菌名称 双黄连糖浆 双黄连口服液
稀释度 MIC(mg/m1) 稀释度 MIC(mg/m1)
金黄色葡萄球菌 26003
大肠杆菌 44102
金黄色葡萄球菌
大肠杆菌
白色葡萄球菌
肺炎克雷伯氏杆菌
肺炎双球菌
乙型溶血型链球菌 1:16
1:4
1:16
1:2
1:16
1:4
1:4
1:8 31.25
125
31.25
250
31.25
125
125
62.5
1:16
1:4
1:16
1:2
1:8
1:4
1:4
1:4 31.25
125
31.25
250
62.5
125
125
125
表1、2、3结果显示双黄连糖浆对白色葡萄球菌及乙型溶血性链球菌的抑菌作用强于双黄连口服液，对其它各菌的抑菌作用与双黄连口服液一致。
2.2体内抑菌作用[3、4]
2.2.15％胃膜素制备：取胃膜素10g，置乳钵中，边加生理盐水边研磨，一直研细并加生理盐水置200ml，置高压灭菌锅中0.11Mpa，灭菌20min备用。
2.2.2菌液制备：于正式试验前一天，以接种环沾取菌种，接种于10ml液体培养基内，置于37℃恒温培养箱内培养18h，细菌生长良好，用标准细菌浊度计定量测定，细菌密度为109个/m1。试验当日，用5％胃膜素把金黄色葡萄球菌作10-2稀释，肺炎克雷伯氏杆菌作10-3稀释。
2.2.3试验步骤：取昆明种小鼠160只，体重为18～22g，雌雄各半，按性别体重随机分为8组，每组20只。前4组经腹腔注射（ip）10-1稀释的新鲜金黄色葡萄球菌，后4组经腹腔注射（ip）10-3稀释的新鲜肺炎克雷伯氏杆菌，菌液均用5％胃膜素稀释，每只小白鼠腹腔注射0.5ml/20g。4组分别包括空白对照组给蒸馏水、双黄连糖浆高剂量组10g(生药)/kg 、双黄连糖浆低剂量组5g(生药)/kg 、阳性对照药组为双黄连口服液25ml／kg ，给小鼠灌胃给药，容积为0.5ml/20g。于腹腔感染前2天给药，连续给药5天。观察感染细菌后7天的动物死亡数及延长小鼠生存时间并计算生命延长率[(给药组生存时间一空白组生存时间)／空白组生存时间]。结果见表4、5、6、7。
表4双黄连糖浆对感染金黄色葡萄球菌
小鼠死亡率的影响 (n=20)
组别 生存数(只) 死亡数(只) 死亡率(％)
空白对照组 阳性对照组
低剂量组
高剂量组 5
13
13
15 15
7
7
5 75
35*
35*
25**
注：与空白对照组比较 * P
