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摘要目的：建立一种黄芪颗粒剂中黄芪甲甙的含量测定。方法：黄芪颗粒剂经过甲醇水浴回流提取2h，水溶性成分经用水饱和的正丁醇萃取纯化，纯化物水溶液经过D101型大孔吸附树脂吸附，经过洗脱，最后收集70％乙醇洗脱液，水浴蒸干，用甲醇定容成样品供试液。样品供试液点样于硅胶G板上，以氯仿－甲醇－水[13:6:2][10℃以下放置24h后的下层液]为展开剂，上行展开。检测波长λs=530nm，扫描速度：20mm/s反射线性扫描。外标两点法线性回归计算黄芪甲甙斑点峰面积。结果：黄芪甲甙在1.06μg～5.20μg范围内，线性关系良好，回归方程Y=49.070+762.702X，r=0.9996，最低检出限为052μg，加样平均回收率为99.76％RSD=2.03％。结论：本方法可控，分离度较好，结果准确稳定，可作为黄芪颗粒剂的质量控制方法。
关键词 黄芪甲甙 黄芪颗粒剂 TLC
黄芪是常用药材，功效：补气升阳，益卫固表，托毒生肌，利水退肿。黄芪颗粒剂是本院配方制剂，由单味药材黄芪提取精制而成。为控制黄芪颗粒剂的质量，本文建立了用薄层扫描法测定黄芪颗粒剂中黄芪甲甙含量的方法。
1 仪器与试药
索氏提取器(长玻)，电热恒温水浴锅[GBll240-89型，北京]，薄层自动铺板器[PBQ-Ⅱ型，重庆]，薄层点样器[NANOMAT Ⅲ，CAMAG，瑞士]，微量点样毛细管[CA-MAG瑞士]，高效薄层色谱扫描仪[CAMAGⅡ+3.17薄层评价软件]，薄层摄像仪[ReprostarⅡ，CAMAG，瑞士]，硅胶G[青岛海洋化工厂]，黄芪甲甙对照品[中国药品生物制品检定所]，黄芪颗粒剂[本院制剂室提供，批号20030126]，所用试剂均为分析纯，D101型大孔吸附树脂[天津制胶厂]，水为注射用水。
2 方法与结果
2．1 对照品溶液的制备
精密称取黄芪甲甙对照品0.0052g，用甲醇溶解并定容至5ml，制成每1ml含1.04mg黄芪甲甙的对照品溶液。
2．2 样品供试液的制备
精密称取定量[1.50g]黄芪颗粒剂粉末，置索氏提取器中，加甲醇40ml冷浸过夜，再加甲醇适量，置水浴上加热回流提取2h，定量滤纸过滤，溶液回收甲醇并水浴浓缩至干，残渣加水10ml微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加水5ml使溶解制成水溶液，加于D101型大孔吸附树脂柱[内径15mm，长120mm]上，用水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至1ml摇匀，作为样品供试液。
2．3 薄层色谱操作方法
2．3．1 薄层板 用0.3％CMC-Na溶液制备的硅胶G板，厚度：500um，105℃活化1h，置干燥器内备用。
2．3．2 点样用定量微量毛细管分别吸取上述样品供试液各2μl，对照溶液二水平为2μl、4μl，用薄层点样器点样于同一硅胶G薄层板上。
2．3．3 展开剂氯仿－甲醇－水[13:6:2](10℃以下放置24h后的下层液)。
2．3．4 展开方式展开箱一侧槽中加入展开剂，另一侧槽中放入点样后的薄层板，共同预平衡15min，然后上行展开，展距13cm。
2．3．5 显色 薄层板从展开箱中取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇液，在100℃烘约5～7min，至斑点显色清晰，取出，日光下检视，置紫外灯[365nm]下检视，迅速在薄层板上覆盖同样大小干净透明的玻璃板，周围用透明胶布固定密封。
2．3．6 扫描条件钨灯，λs=530nm，扫描速度：20mm/s，SlAT=3×4nm，sens；130，SPAN:15，反射线性扫描，测定供试品与对照品的黄芪甲甙斑点峰面积，外标两点法回归计算。
2．4 标准曲线
精密吸取黄芪甲甙对照品溶液[1.04mg/ml]1.0，2.0，3.0，4.0，5.0μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，按上述薄层色谱操作方法进行展开，显色，显色后迅速在薄层板上覆盖同样大小干净透明的玻璃板，周围用透明胶布固定密封，上机扫描，以测定的黄氏甲甙斑点峰面积积分值为纵坐标，黄芪甲甙的点样量为横坐标，绘制标准曲线图，在1.04μg～5.20μg范围内，黄芪甲甙斑点积分面积与点样量(μg)呈良好的线性关系，回归方程为：Y=49.070+762.702X，r=0.9996(n=5)，按信噪比S/N>3，最低检出限为0.52μg。
2．5 稳定性试验
精密吸取样品供试液2μl，按上述薄层色谱操作方法，进行点样，展开，显色，显色后迅速在薄层板上覆盖同样大小干净透明的玻璃板，周围用透明胶布固定密封，上机扫描测定样品中黄芪甲甙斑点峰面积，每隔15min扫描测定1次，连续测定1.5h，结果表明测得斑点峰面积积分值稳定，RSD=2.0％，n=6。
2．6 回收率试验
精密称取定量黄芪颗粒剂，定量加入黄芪甲甙对照品，按样品供试液的制备方法制备，按上述薄层色谱操作方法进行点样，展开，显色，显色后迅速在薄层板上覆盖同样大小干净透明的玻璃板，周围用透明胶布固定密封，上机扫描测定黄芪甲甙斑点峰面积。
2．7 精密度试验
精密吸取同一样品供试液2μl，分别点于硅胶G同一薄层板和不同薄层板上，按上述薄层色谱操作方法进行展开、显色，显色后迅速在薄层板上覆盖同样大小干净透明的玻璃板，周围用透明胶布固定密封，上机扫描测定黄芪甲甙斑点峰面积积分值。结果如下：
同板的黄芪甲甙平均峰面积：x=1934.7，RSD=2.0％(n=8)。
异板的黄芪甲甙平均峰面积：X=1892.6，RSD=3.7％(n=16)。
2．8 样品的含量测定
精密称取不同批号的黄芪颗粒剂粉末[1.50g]，按样品供试液的制备方法回流提取，水饱和的正丁醇萃取纯化，树脂吸附洗脱制备，分别吸取样品供试液2μl(A)，对照品溶液二水平2μl[c]与4μl[S2]，按下列顺序点样：S1A A A AS2S1A AA A S2，按上述薄层色谱操作方法进行展开、显色，显色后迅速在薄层板上覆盖同样大小干净透明的玻璃板，周围用透明胶布固定密封，上机扫描测定黄芪甲甙斑点峰面积积分值，以外标两点法计算含量。
3 讨论
(1)黄芪甲甙的含量测定方法有高效液相色谱法、薄层扫描法等，本文采用甲醇水浴回流提取，水溶性成分经用水饱和的JET醇萃取纯化，氨试液碱化，水溶液通过大孔吸附树脂柱，用水洗脱糖类物质，采用40％乙醇洗脱杂质，进一步纯化精制，继用70％乙醇洗脱，结果黄芪甲甙斑点清晰，分离度好，无干扰。
(2)三个批号黄芪颗粒剂中，黄芪甲甙的含量有一定的差异，可能与黄芪药材的产地、采收季节、芪颗粒剂的配制工艺相关。
(3)由方法学考察结果可见，本方法线性关系、现性(同板)良好，收率满意，稳定性满足测定时间的要求，故认为本方法可控，测定结果准确稳定，可作为黄芪颗粒剂的质量控制方法。
