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[摘要] 目的：对错配修复基因hMLH1 A655多态性和结直肠癌发病的相关性进行研究。方法：取270名健康人和230例结直肠癌患者的外周血DNA，PCR反应-变性高效液相色谱（PCR-DHPLC）技术和DNA序列分析联用方式对hMLH1 A655多态性进行检测。采用病例对照的方法，对hMLH1 A655多态性与结直肠癌发病的关系进行研究和分析。结果：正常人群和结直肠癌患者中hMLH1 A655G检出率分别为3.0％和11.3％，两组患者比较差异有统计学意义（P0.05）。结论：hMLH1 A655 A-G突变在结直肠癌的发病过程中很可能有很大影响，hMLH1 A655多态性可能成为结直肠癌患者康复指标评估的一项。
[关键词] DNA错配修复；结直肠肿瘤；hMLH1；多态性
[中图分类号] R735.3 [文献标识码]A[文章编号]1674-4721（2011）06（b）-007-02
错配修复（mismatch repair，MMR）系统作为一个高保真的DNA修复机制，主要是对DNA合成过程中产生的碱基错配进行修复，保证基因组的稳定性[1]。本文主要对hMLH1基因第8外显子A655位点在结直肠癌患者中的突变情况进行研究，并针对临床病理情况，对此位点多态性与结直肠癌发生的相关性进行研究，现汇报如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
研究对象为本院2010年1~12月诊断为结直肠癌的患者230例，其中，男性患者130例，女性患者100例，平均年龄49岁。对照组为本院270名健康体检者，且对照组直系亲属中没有明确癌症患者。研究组与对照组在性别、年龄上无显著差异。
1.2 方法
1.2.1提取DNA：患者手术当天，进行外周静脉取血，利用QIAampDNA提取试剂盒（德国QIAGEN公司生产）进行提取，依照说明书对全血DNA进行提取，-80℃保存。
1.2.2 PCR反应。
1.2.3变性高效液相色谱（DHPLC）分析。变性高效液相色谱分析仪（WAVE system）为美国Transgenomic公司生产。单次进样量8 μl，柱温57℃，流动相为0.1 mol/L N-三乙基乙酰胺（分析纯）和不同浓度的乙腈，流速为0.9 ml/min，检测条件：260 nm紫外。
1.2.4 DNA序列分析。变性高效液相色谱分析显示，能够检测到特定异常峰形的PCR产物，产物经过北京华大基因公司进行测序。
1.3 统计学方法
计算研究组和对照组hMLH1基因突变检出率差异的显著性检验及优势比（odds ratio，OR），采用Epi Info 6.1Mb软件进行χ2检验。
2 结果
2.1 变性高效液相色谱分析和DNA测序结果
57℃时，研究组有26份（11.3％）样品有2个洗脱峰出现，对照组有4份（3.0％）样品出现这一情况。测序结果显示，出现2个洗脱峰的样本655位点存在遗传性碱基转换（A→G）。两组hMLH1 A655G检出率差异有统计学意义（11.3％ vs 3.0％，χ2=6.791，P=0.009）。
2.2 hMLH1A655G／A多态性和临床病理资料的相关性
见表1。患者乳头状或管状腺癌中hMLH1 A655G检出率为8.2％，黏液腺癌中检出率为27.8％。两者比较差异有统计学意义（P
