【www.zhangdahai.com--警示教育心得体会】
【摘要】目的 对爱心Ⅳ号丸剂的制备工艺及质量标准进行了初步研究。方法 将药方制备成半浓缩丸,对黄芪及白芍进行了薄层色谱鉴别;用高效液相色谱法测定黄芪甲苷的含量。结果 黄芪甲苷对照品进样量在0.5～5μg范围内线性关系良好,平均回收率98.3%,RSD=0.58%。
结论 制备方法简便,质量控制方法适用于爱心Ⅳ号丸剂的质量检验。
【关键词】爱心Ⅳ号;制备;质量控制
Love ⅣPreparation and Quality Control.LI Hen-fu, CHENG Ai-ming, MA Xiao-bin,ZHOU Zhong-han.(Suizhou Chinese Medicine Hospital, Suizhou 441300,China)
【Abstract】Objective The preparation process and quality standards of love Ⅳ pills were conducted a preliminary study. Methods The prescriptions were made into semi-pills, astragalus and TGP were carried out TLC; the high performance liquid chromatography were used to determine the content of astragaloside.Results The sample volume of astragaloside reference substance was good linear relationship in the range of 0.5～5μg ,with an average recovery of 98.3%, RSD=0.58%. Conclusion Preparation was simple, quality control method was suitable for the quality inspection of love Ⅳ pills.
【Key words】love Ⅳ; preparation; Quality Control
【中图分类号】R512.91
【文献标识码】A
【文章编号】1814-8824(2009)-11-0001-03
爱心Ⅳ号是我院在HIV携带者进行关怀治疗中摸索出的复方中药验方的基础上研制的,该制剂能有效增加病毒携带者的CD4细胞的含量,改善免疫力,提高患者的生存质量,延长患者生存时间。为了HIV病毒携带者方便服用,我院制剂中心将该方制备成丸剂,并完善了质量标准,初步研究如下。
1 设备、仪器及试药
仪器、试药:LNW多功能提取机组(武汉医疗器械厂)
DIONEX高效液相色谱仪(配有P680泵、PDA-100检测器、TCC-100柱温箱,ASI-100自动进样器,CHROMELEon色谱工作站),瑞士METTLERA-240电子天平,KQ3200型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。
黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号110756-200110)。甲醇为色谱纯;水为超纯水,其余试剂均为分析纯。
爱心Ⅳ号(60g/瓶)批号为20080401,20080512,20080709,20080904,20081109,20081214由我院制剂中心提供。
硅胶G(分析纯青岛海洋化工厂),其他试剂均为分析纯。
2 处方组成
党参、 炒白术、云苓、甘草、当归、生地、赤芍、川芎、丹参、柴胡、黄芩、地丁、黄芪、二花半边莲、板蓝根、灵芝。
3 制备
取党参、云苓、丹参、黄芪、板蓝根抢水清洗后干燥,粉碎过80目筛备用。其余药品置多功能提取机组中加水煎煮3次,第1次1.5小时,第2次1小时,第3次1小时,合并3次煎煮液减压浓缩至相对密度1.2左右,加蜜10kg与上述药粉混合制软材,用制丸机制丸,干燥,包装60g/瓶即得。
4 质量控制
4.1 性状 本品为黄褐色的小蜜丸;味微甜,略酸。
4.2 鉴别
4.2.1 黄芪的鉴别 取本品10g,切碎,加等量硅藻土,研匀。加石油醚(30～60℃)20mL,浸渍2小时,时时振摇,滤过,弃去石油醚液,药渣挥尽溶剂,取本品粉末3g,加甲醇20mL,加热回流1小时,滤过,滤液加于中性氧化铝柱(100～120目,5g,内径10～15mm)上,用40%甲醇100mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加水30mL使溶解,用水饱和的正丁醇提取2次,每次20mL,合并正丁醇液;用水洗
涤2次,每次20mL;弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇0.5mL使溶解,作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各2μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇-水(13:7:2)的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,日光下显相同的棕褐色斑点,紫外光灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点。(图1及图2)
图1 图2图3
1~6为样品1~6为样品1~6为样品
7为黄芪甲苷对照品7为黄芪甲苷对照品7为黄芪甲苷对照品
4.2.2 白芍的鉴别 取本品15g,硅藻土10g,研匀,加乙醇50mL,超声20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水20mL,乙醚10mL振摇提取,弃去乙醚液,水液用正丁醇振摇提取2次,每次20mL,合并正丁醇液,用水洗涤2次,每次10mL,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL,作为供试品溶液;另取芍药苷对照品加乙醇制成每1mL含1mg溶液,作为对照溶液,照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述两种溶液各5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。(图3)
4.3 检查应符合丸剂项下有关的的各项规定(附录I A)
4.4 含量测定
4.4.1 色谱条件 色谱柱:AgicentTc-C18(4.6× 250mm,5μm);流动相:甲醇-乙腈-水(5:35:60),流速1.0mL/min,柱温25℃,检测波长203nm,灵敏度:0.02AUFS;柱温30℃;进样量10μL;外标法测定。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。
4.4.2 供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品细粉15g,精密称定,置索氏提取器中,加甲醇40mL,冷浸过夜,再加甲醇适量,回流4小时,提取液回收甲醇并浓缩至干,残渣加水10mL,微热使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次20mL,合并正醇提取液,用氨试液提取2次,每次20mL,弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣加水3～5mL使溶解,放冷,通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm,长12cm),以水50ml洗脱,弃去水液,再用40%乙醇30ml洗脱,弃去40%乙醇洗脱液,继用70%乙醇50mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,用甲醇溶解并转移至2mL量瓶内,加甲醇至刻度,摇匀,作为供试品溶液。
4.4.3 线性关系考察 分别精密称取P205干燥器中真空干燥的黄芪甲苷对照品适量,加甲醇制成每mL含1mg的贮备液,备用。分别精密量取黄芪甲苷对照品贮备液0.5、1.0 、2.0 、3.0 、5.0mL,分别置于10mL量瓶中加甲醇稀释至刻度,摇匀;即得黄芪甲苷系列对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液各10μL,在色谱条件下测定峰面积,以峰面积为纵坐标(Y,mAu,sec),对照品进样量(X,μg)
为横坐标,绘制标准曲线,并计算回归方程。黄芪甲苷Y=76.256X-0.9158,相关系数r=0.9989,说明黄芪甲苷对照品进样量在0.5～5μg范围内线性关系良好。对照品色谱图见图4。
图4 黄芪甲苷对照品
图5 阴性样品
图6 供试品
4.4.4 精密度试验 取黄芪甲苷对照品贮备液2.0mL,加甲醇至10mL量瓶中,摇匀,按上述色谱条件重复进样5次,每次10μL,测定吸收峰面积。结果黄芪甲苷RSD为0.73%。结果表明精密度良好。
4.4.5 稳定性试验 取同一供试品溶液,按上述色谱条件测定6次,每次间隔2h,进样量10μL,测定黄芪甲苷峰面积值,结果RSD为0.68%(n=6)。可见供试品溶液在12h内稳定。
4.4.6 重复性试验 精密量取同一批号样6份,照供试品溶液制备方法操作,进样,测定峰面积,计算黄芪甲苷含量。结果黄芪甲苷含量的RSD为1.11%(n=6)。
4.4.7 空白试验 按处方比例配制缺黄芪的空白阴性样品,同供试品溶液的制备方法制备阴性空白样品供试液,按上述色谱条件测定,结果表明阴性样品不干扰黄芪甲苷含量的测定,阴性样品色谱图见图5。
4.4.8 加样回收率试验 精密量取已知含量的爱心Ⅳ号,平行制备共6份,分别精密加入黄芪甲苷对照品适量,按供试品溶液项下操作,重复操作6份,按色谱条件测定黄芪甲苷含量,计算回收率,结果见表1。
4.4.9 样品含量测定 按上述方法测定6批爱心Ⅳ号样品,结果所测定样品中黄芪甲苷含量均高于0.01mg/g,因此规定该处方中含黄芪以黄芪甲苷计,每g不得少于0.01mg。供试品色谱图见图6,测定结果见表2。
表1 黄芪甲苷回收率试验结果
试验号取样量(mL)样品中含量(mg)对照品加入量(mg)测得值(mg)回收率(%) 平均回收率(%)RSD(%)
115g0.225 0.20 0.41898.4
215g0.2250.20 0.41597.6
315g0.2500.20 0.44699.2 98.30.58
415g0.2500.20 0.44498.7
515g0.2690.20 0.45997.9
615g0.2690.20 0.46098.2
表2 样品测定结果
批号 2008040120080512 20080709200809042008110920081214
黄芪甲含量(mg/mL) 0.0150.0170.018 0.024 0.017 0.021
5 讨论
5.1 爱心Ⅳ在长期临床应用中表明能有效增加病毒携带者的CD4细胞的含量,改善免疫力,提高患者的生存质量,延长患者生存时间。
5.2 爱心Ⅳ在工艺上采用部分药材直接粉碎,部分药材煎煮,最终制备成浓缩丸,没有进行正交设计研究,今后会进行相关探讨。
5.3 本文在定性鉴别中只选择了黄芪及白芍进行薄层色谱的相关实验,未对处方中其他成分及煎煮时间、压力、温度作相关研究论证。
5.4 在黄芪甲苷提取分离条件试验中,曾采用其他办法进行提取,但杂质的去除效果都不理想,后改用D101大孔树脂去处杂质,分离较好,重现性也较好。
5.5 流动相的选择比较了乙腈-水(35:65)和甲醇-乙腈-水(5:35:60)作为黄芪甲苷测定的流动相,根据上述二种流动相的试验结果,认为甲醇-乙腈-水(5:35:60)流动相较理想,出峰时间早,分离度好。
5.6 由液相图谱表明,按处方比例制备缺黄芪的阴性对照样品,在黄芪甲苷保留时间的相应位置上无黄芪甲苷峰出现,阴性对照无干扰,此方法专属性强,且分离效果好,方法准确可靠,可用于爱心Ⅳ的质量控制。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].北京:化学工业出版社,2005:212.
[2] 韩建伟,高华宏,乔明.HPLC ELSD法测定通脉活血丸中黄芪甲苷的含量研究[J].湖北中医学院学报,2007,9(1):55-56.
[3] 杨克迪,李宏,等.固相萃取高效液相色谱法测定黄芪中黄芪甲苷的含量[J].时珍国医国药,2007,18(1):41-42.
