【www.zhangdahai.com--其他心得体会】
【摘要】 目的 建立测定和胃散中芍药苷含量的高效液相色谱法。方法 使用HYPERSIL-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙晴-0.1%磷酸溶液(14∶86)为流动相，流速为0.8 ml/min，检测波长为230 nm。 结果 该方法测定芍药苷在75～125 μg/ml范围内线性关系良好( r = 0.999 0)。平均回收率为99.5%，100.2%，99.7%；RSD为0.44%，0.42%，0.45%(n=3)。结论 该测定方法简单、精密度高、重现性好，是测定和胃散中芍药苷含量的可行方法。
【关键词】 和胃散；芍药苷；高效液相色谱法；含量测定
Determination of the content of paeoniflorin in Hewei powder by HPLC LIU Guang-bin，LIU Xiao-shuan，MAO He-ping，et al.Jiugang Hospital，Jiayuguan，Gansu 735100，China
【Abstract】 Objective To establish a method for determinating paeoniflorin in Hewei powder by HPLC.Methods HYPERSIL-C18column (150 mm×4.6 mm，5 μm) was used，and the mobile phase consisted of acetonitrile-0.1%H3PO4 solution (14∶86).The flow rate was 0.8 ml/min and the determination wavelength was at 230 nm.Results A good linearity was obtained within the range of 75~125 μg/ml of paeoniflorin ( r=0.9990).The average recoveries ware 99.5%，100.2% and 99.7%；RSD ware 0.44%，0.42% and 0.45%(n=3).Conclusion This method is simple，rapid and accurate which can be used to determine paeoniflorin contents in Hewei powder.
【Key words】 Hewei Powder；Paeoniflorin；HPLC；Content determination
和胃散是本院研制的治疗慢性胃肠炎、消化性溃疡的中药制剂，由肉桂、白芍、香附、当归、陈皮等10 味中药组成，经多年临床观察，疗效显著。芍药苷是和胃散中白芍的主要成分。笔者采用高效液相色谱法测定和胃散中芍药苷的含量，现报告如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器 岛津LC-10AD高效液相色谱仪：LC-10AD溶剂泵、SPD-10A紫外检测器、岛津CR-6A数据处理机。
1.2 试药 和胃散(酒钢医院制剂室自制，批号：20060728，20060812，20060925)；对照品芍药苷，中国药品生物制品检定所提供。乙晴为色谱纯；磷酸，正丁醇为分析醇。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：HYPERSIL-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为：乙晴-0.1%磷酸溶液(14∶86)，检测波长：230 nm，灵敏度：0.0050AUFS，纸速：1 cm/min，流速：0.8 ml/min，柱温为室温。理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000，分离度(R)应>1.5。
2.2 试验溶液的制备
2.2.1 样品溶液的配制 精密称取本品约3.0 g，置碘量瓶中，加正丁醇25 ml，超声处理(功率240 W，频率45 KHz)30 min，放冷，滤过，分别用5 ml正丁醇冲洗碘量瓶及滤器3~4次，冲洗液并入滤液中，水浴加热浓缩至约15 ml，定量转移到25 ml量瓶中，加正丁醇至刻度，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。
2.2.2 对照品溶液的配制 照线形关系考察项下方法，配制100 μg/ml芍药苷对照品溶液，用0.45 μm微孔滤膜滤过即得。
2.3 方法学考察
2.3.1 检测波长的选择 精密量取对照品溶液0.5 ml，置于10 ml 容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。在200～400 nm波长范围内扫描，得到芍药苷在230 nm处有最大吸收。在高效液相色谱仪上进样，在230 nm波长处出峰较好。
2.3.2 线形关系考察 精密称取芍药苷对照品约6.3 mg，置50 ml容量瓶中，加正丁醇40 ml，振摇使溶解，加正丁醇至刻度。精密量取上述溶液10、9、8、7、6 ml，分别移置10 ml容量瓶中，加正丁醇至刻度，再分别用0.45 μm微孔滤膜滤过，在上述色谱条件下，各进样20 μl，每个浓度重复进样3次，以芍药苷峰面积平均值对其浓度C(μg/ml)计算回归方程，结果为：
A=-4.11×104C+6.98×106 r=0.999 0
结果表明，芍药苷浓度在75~125 μg/ml的范围内与其峰面积呈量好的线形关系(图谱见图1)。
图1 HPLC色谱图
A.空白 B.样品 C.对照品
2.3.3 精密度考察 精密量取100 mg/ml对照品溶液连续重复进样5次，其峰面积RSD=0.30%。
2.3.4 稳定性试验 取同一批号(批号：20060925)的样品溶液，配制后立即测定1次(0 h)，再于室温中放置2、4、6、8 h后再进样，测得芍药苷峰面积的RSD=0.50%(n=5)；再于室温中放置0.5、1、2、3、4 d后再进样，测得芍药苷峰面积的RSD=0.97%(n=5)。表明该方法的稳定性好，符合高效液相色谱法测定的需要。
2.3.5 重复性试验 取同一批号(批号：20060925)的样品5份，按样品溶液的配制项方法配制样品溶液，按上述方法测定，结果芍药苷峰面积的RSD=0.45%(n=5)。表明该方法的重复性好。
2.3.6 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品细粉9份，每份约3.0 g，均分为3组。每组分别精密加入对照品芍药苷约2.70、2.25、2.0 mg。同样品测定项法制备溶液并测定芍药苷的含量，芍药苷的平均回收率分别为99.5%、100.2%、99.7%，RSD分别为0.44%、0.42%、0.45%。结果表明，该方法回收率良好。
2.4 样品含量的测定 对照品溶液和样品溶液各进样20 μl，按上法测定，用外标法以峰面积计算含量。本品每1 g含白芍以芍药苷(C23H28O11)计不得少于0.60 mg，见表1。
3 讨论
芍药苷的含量测定方法有分光光度法、薄层扫描法、高效毛细管电泳法和高效液相色谱法等[1-3]。根据适用性原则，采用高效液相色谱法完全能满足芍药苷测定的准确度、灵敏度及重现性的要求，设备要求条件适合广泛应用。笔者在本实验中获得了较佳的效果。
目前，对于用高效液相色谱法测定制剂中芍药苷含量研究主要采用不同比例的乙腈-水(磷酸、乙酸或者甲醇)、甲醇-异丙醇-冰乙酸-水和甲醇-水等3大类系统作流动相[1]。笔者曾对流动相的选择进行摸索，调整原流动相乙腈-水的比例，但分离度几无改进，甲醇-水虽有改进，但仍达不到基线分离，甲醇-乙腈-磷酸分离度很好，但保留时间过长，故最终选择能达到基线分离且保留时间适中的乙晴-0.1%磷酸溶液(14∶86)作流动相，取得了满意的分离效果。实验过程中采取回流提取和超声波提取，经比较发现超声波提取法时间短、提取物中杂质少，直接测定可以达到完全分离。笔者也对超声时间进行了考察，发现超声15 min不能提取完全，而30 min则提取较完全。
通过方法学的考察，确定笔者在本实验中采用的测定方法具有精密、准确和稳定的特性，回收率也符合有关要求。因此，此法可以用于和胃散中芍药苷的含量测定。
参 考 文 献
[1] 方世平，刘萍，杨瑜，等.芍药苷的含量测定方法概述.医药导报，2004，23 (增刊)：1-4.
[2] 贾金萍，秦雪梅，王光丽，等.高效液相色谱法测定鞭芍胶囊中芍药苷的含量.中国医院药学杂志，2005，25 (2) ：136-137.
[3] 杨丽.HPLC法测定千金止带丸中芍药苷的含量.中国药事，2007，21(6)：422-423.
