【www.zhangdahai.com--拓展训练体会】
【摘要】 干扰素-α是治疗病毒性肝炎的主要药物之一，但因半衰期短而限制了其临床应用。近年来开发出的长效干扰素，如聚乙二醇干扰素、白蛋白融合干扰素及干扰素脂质体等，因消除缓慢、使用方便、疗效稳定，有逐渐取代普通干扰素的趋势。
【关键词】 长效干扰素；病毒性肝炎
干扰素(Interferon，IFN)是人和动物细胞受到适宜的刺激时产生的一种微量的、具有高度生物学活性的蛋白，一般分为I型和Ⅱ型。I型干扰素主要有IFN-α、IFN．β、IFN．ω等。IFN-α是由单核细胞产生的相对分子量(NW)为18 000的多肽，通过在细胞内诱发抗病毒状态和调节免疫系统，达到中和病毒或清除受病毒感染细胞的目的。按氨基酸序列的不同，IFN-α可分为IFN-α．1b、IFN-α．2a、IFN-α．2b等。Ⅱ型又称免疫干扰素，即γ干扰素，主要是由T细胞产生的相对分子量21 000~24 000的单体糖蛋白，主要参与诱导组织相容性抗原(MHC)的表达和免疫调节效应，其抗病毒作用比I型干扰素弱。IFN-α广泛用于临床，如抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等，其中用于病毒性肝炎治疗的研究发展迅速。IFN-α治疗慢性乙肝或丙肝时一般采用3 MU皮下注射，每日1 次或每周3 次，疗程长达4~6 个月，患者很难坚持；同时，IFN-α的半衰期较短(只有4 h)，药物很快被代谢，在用药期间有一段时间处于有效血药浓度以下，体内的病毒又重新复制，不能持久地抑制病毒。为克服以上不足，人们又开发出了多种类型的长效IFN-α，如聚乙二醇干扰素、白蛋白融合干扰素及干扰素脂质体等。本文拟就长效IFN-α的抗病毒性肝炎的研究进展作一综述。
1 聚乙二醇干扰素
为了增加IFNα在体内的半衰期，现在广泛采用的是聚乙二醇(PEG)修饰法。PEG是一种无活性的水溶性多聚体，与蛋白质连接可增加其分子量，提高热稳定性和酸碱稳定性，同时改变药物的代谢动力学特性，减缓排泄速度，延长半衰期，还缩小了体内血药峰谷浓度差。目前已上市的有聚乙二醇干扰素α．2a(PEG．IFNα．2a)和聚乙二醇干扰素α．2b(PEG．IFNα．2b)，其半衰期分别为77~90 h和36~40 h[1]。单剂量给予1．0 μg/kg PEG．IFNα．2b，在血液循环中的有效量可维持7 d，因此可每周给药一次[2]。
1．1 聚乙二醇干扰素对乙型肝炎的治疗作用 多项临床研究表明，PEG．IFNα治疗乙型肝炎患者效果要优于IFNα和拉米夫定。例如：Cooksley[3]用PEG．IFNα．2a和IFNα．2a治疗慢性乙型肝炎194例，结果PEG．IFNα．2a在HBeAg转阴、HBV．DNA抑制和ALT复常率的效果均比IFNα．2a好；Lau G[4]、Janssen HLA[5]报道，PEG．IFNα．2a、PEG．IFNα．2b对慢性乙肝患者疗效优于拉米夫定，联合拉米夫定治疗并不能使疗效提高。Leemans WF报道[6]，用PEG．IFN治疗16名YMDD突变(对拉米夫定耐受)的HBeAg阳性HBV感染患者，疗程为52周，26周随访，结果其中2名患者(12．5%)HBeAg转阴，并且获得持久的病毒性反应(HBV．DN水平低于10log5 copies/ml)和生化学反应(血清ALT降至正常)， 所有患者的病毒载量和ALT水平均明显下降，但停药后又反弹。这说明PEG．IFNα对拉米夫定耐受的患者仍然有效，但疗效降低。
PEG．IFNα抗乙肝病毒作用机制与IFN-α相似。IFN-α与细胞膜上干扰素受体IFNAR结合，通过Jak．STAT信号通路诱导细胞转录并翻译出一系列翻译抑制蛋白，如2"，5"．寡腺苷酸合成酶(2"，5"．OAS)，双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)和抗黏液病毒A(MxA)蛋白[7]。然后通过这些抗病毒蛋白发挥抗乙肝病毒作用。2"，5"．OAS被激活后可催化合成2，5寡腺苷酸(2．5A)，激活RNase L，降解病毒mRNA而抑制蛋白质的合成；PKR使真核细胞翻译起始因子2a(elF2a)磷酸化而失活，抑制病毒蛋白翻译合成的启动；MxA蛋白可在逆转录后水平抑制HBV复制。用 IFN-α．2b处理HepG2．2．15细胞后，PKR和2"，5"．OAS mRNA水平均明显升高，并与HBV DNA水平具有一定相关性，这说明PKR和2"，5"．OAS mRNA均参与IFN-α．2b的抗HBV作用[8]。
1．2 聚乙二醇化干扰素对丙型肝炎的治疗作用 Zeuzem等[9]报告，185例用PEG．IFNa．2a治疗(180 μg/周，共48周)，104例用IFNa．2a治疗(前12周：600万U，后36周：300万U，每周3次，共48周)，两组均随访24周。在48周时两组的HCV RNA阴转率分别为69%和28%，72周随访时为39%和19%，差别显著；48周时两组ALT复常率差别不显著，72周时分别为39%和19%，前者明显较好。Reddy等[10]用四种剂量PEG．IFNa．2a(即45、90、180、270 μg/周)以及普通IFN．a2a(300万U每周注射3次)治疗活动性丙型肝炎而无纤维化的患者，治疗48周并随访24周，结果180 μg和270 μg组的病毒学和生化学效果明显优于IFNa．2a。Linday等[11]报告一项随机、双盲、对照试验(患者总数超过1 200例)，比较不同剂量PEG．IFNa．2b与IFNa．2b治疗丙型肝炎的效果。当48周治疗完成时PEG．IFNa 2b 0．5、1．0和1．5 μg/kg体质量三组HCV RNA转阴率分别为33%、41%和49%，而300万U IFNa．2b组则为24%，PEG．IFNa．2b组均显著较好。72周随访结果，三种剂量PEG．IFNa．2b的效果均显著比IFNa．2b组为好，其中1．0 μg/kg和1．5 μg/kg组优于0．5 μg/kg组。周炳喜等[12]比较PEG．IFNa．2b与IFNa．2b分别联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎，治疗48周后，其持续病毒学应答率分别为85．00%和44．44%，不良事件发生率无明显差异，这说明PEG．IFNa．2b联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎的疗效优于IFNa．2b联合利巴韦林。Taylor MW等[13]用聚乙二醇IFN-α和病毒唑治疗HCV感染的非洲裔美国人(AA)和高加索裔美国人(CA)，发现1型基因型患者的反应应答率要比2和3型基因型患者低，CA患者较AA患者对聚乙二醇IFN-α的反应更弱，干扰素刺激基因(如OAS、MX1、IRF．7、TLR．7)的表达水平也更低一些。这说明聚乙二醇IFN-α的疗效受患者基因型和种族的影响。
1．3 PEG．IFN的不良反应 众所周知，PEG修饰在蛋白分子的赖氨酸残基上，IFNα有10~11 个赖氨酸,因此PEG修饰可以形成不同的异构体，这种众多异构体混合物造成不同的生理反应[14]，也可发生发热、流感样症状、精神抑郁[15]、中性粒细胞及血小板减少等不良反应，其发生率与干扰素相似[16，17]。
2 白蛋白融合干扰素
将干扰素与人血清白蛋白(Human serum albumin， HSA)融合是长效干扰素的另一个发展方向。HSA是分子量为66．5kD 的非糖基化蛋白，对维持体内渗透压和血浆体积起着至关重要的作用。其肾清除率非常低,体内半衰期为14~20 d。HSA是体内因子和药物转运的天然载体，可作为提高小分子蛋白在血液中的半衰期的载体。白蛋白融合干扰素(HSA．IFN)就是通过生物工程技术，构建编码HSA和IFN的融合基因并在载体中获得高效表达而成。
2．1 HSA．IFN的药动学研究 Osborn BL等通过克鲁维氏酵母表达的HSA．IFNα，在猕猴体内的半衰期(皮下注射)比IFNα延长了18 倍［18．19］。通过毕赤酵母也能高效表达HSA．IFNα．2b融合蛋白[20][21],静脉注射到猕猴体内后，药物血浆半衰期达101 h， 约为普通IFNα．2b 的20 倍，PEG化干扰素的1．5~2 倍。
2．2 HSA．IFN的药效学研究 HSA．IFN的药效学研究主要集中在抗HCV作用：通过体外生物学鉴定法比较猴血清的抗病毒活性，皮下注射HSA．IFNα后的猴血清抗EMCV活性和持续时间要明显强于注射IFN-α后的猴血清[18]。Liu C等[22]通过体外细胞模型Huh7研究发现，Alb．IFNα．2b在肝细胞和肝外细胞均可明显抑制HCV的复制，其抗病毒作用甚至比PEG．IFNα．2a更强；临床试验表明[23．24]，HSA．IFN半衰期达140 h以上，给药间隔时间为2~4周；对HCV．RNA的抑制率达69%,并且表现为剂量依赖性。在欧美国家，白蛋白融合干扰素已经入Ⅱ/Ⅲ期临床实验，Zeuzem S等[23]实验发现每两周给一次Alb．IFN，每次1 200 μg，其抗HCV作用最好，给药四周后HCV RNA就降低到限制量(LOQ)以下。其抗HCV机制与IFN相似，主要是通过诱导干扰素特异基因的表达，如MxA、OAS1、 IFI27、 IFI44表达增加，与IFN-α一致[18，24，25]。HSA．IFN是否以同样具有抗HBV作用，还有待近一步研究。
HSA．IFN有望代替常规干扰素用于丙型、乙型肝炎等的治疗。其注射频率可以从常规干扰素的每天1次或每周2次减少到每2周1次。对于疗程长达6~12 个月的病毒性肝炎等的治疗，这种注射频率的大幅度减少，将极大地方便患者。同时长效干扰素所提供的较为稳定的血药浓度也将提高疗效，减少不良反应。HSA．IFN不良反应较轻，常见有头疼、乏力、注射部位红斑、关节痛及发热等[26]，患者一般能够忍受。
3 干扰素脂质体
近年来用脂质体(Liposome,LP)包裹IFN形成干扰素脂质体(IFN．LP)也受到重视。脂质体是天然磷脂分子层膜结构微球体，本身无毒无免疫活性，应用相应的化学工艺用脂质体包封药物后，能延长药物作用时间、减少药物用量、增加药物稳定性等，并且还具有一定的靶向功能，可减少药物毒性。目前已有两性霉素B、阿霉素、柔红霉素B等化学药物脂质体产品已用于临床，蛋白类药物脂质体也进入临床试验阶段，如干扰素脂质体(IFN．LP)乳膏。
脂质体包封IFN后可使药物80%左右分布于肝、脾、淋巴结等网状内皮系统，从而提高肝内药物浓度[27]；脂质体包封药物后，可使药物免受体液中抗体的中和及核酸酶的降解，从而增加药物稳定性，延缓药物代谢，延长药物半衰期，提高血药浓度。动物实验表明，IFNa．2b脂质体的半衰期较IFNa．2b提高2~4倍,靶向性也明显增加[28]。然而，单纯的脂质体易被网状内皮系统摄取，特异性靶向性低；近几年发展起来的受体介导的脂质体技术解决了这一难题。杜施霖等[29]通过构建针对大鼠肝星状细胞受体介导的靶向脂质体，观察发现包裹IFN-α1b的长循环脂质体可保护IFN 不被血清酶降解，能有效地延长给药时间(1周)。虽然如此，IFN．LP仍然有一些缺陷有待解决，如包封率低、泄漏率高、粒径稳定性差、生物活性易丧失，这样也使得其工业化生产难成规模。只有当这些问题得到妥善解决后IFN．LP才可能走向临床。
4 结论和展望
IFN-α对病毒性肝炎的疗效肯定，可明显提高患者的生存质量，并降低患者经济负担[30]，仍不失为治疗乙肝的首选药物之一。但其半衰期短等缺点也严重束缚了其临床应用。随着长效干扰素的不断开发和应用，其优越性得到越来越多的体现，有逐渐取代普通干扰素的趋势。开发出长效、高效的干扰素也越来越成为病毒性肝炎治疗的重要发展方向。
参考文献
1 Zhang FK.Pegylated interferons in the treatment of chronic hepatitis C.Chinese Medical Journal，2003，116∶495．498.
2 Glue P，Fang JW，Rouzier．Panis R，et al.Pegylated interfeton．alpha 2b:pharmacokineyics pharmacodynalics，safety，and preliminary efficacy data，Hepatitis C Intervention Therapy Group.Clin Pharmacol Ther，2000，68(5):556．567.
3 Cooksley WG，Piratvisuth T，Lee SD,et al.Peginterferon alpha．2a(40 kDa):an advance in the treatment of hepatitis B eantigen．positive chronic hepatitisB.J Viral Hepat，2003,10:298．230.
4 Lau G， Priatvisuth T， Kang XL， et al.Peginterferon alfa．2a(40KD)(pegasys)monotherapy and incombination with lamivudine is more effective than lamivudine monotherapy in HBeAg．positive chronic hepatitis B:result s from a large，multinational study.Hepatology,2004，40(Suppl 1):171.
5 Janssen HLA， Senturk H， Zeuzem S， et al.Peginterferon alfa．2b and lamivudine combination therapy compared with peginterferon alfa．2b for chronic HBeAg positive hepatitis B:a randomized trial in 307 patients.Hepatology，2003，38:246.
6 Leemans WF，Flink HJ，Janssen HL，et al.The effect of pegylated interferon．alpha on the treatment of lamivudine resistant chronic HBeAg positive hepatitis B virus infection.J Hepatol，2006,44:507．511.
7 Samuel CE.Antiviral actions of interferons.Clin Microbiol Rev，2001,14(4)：778．809.
8 张权,魏来,王燕.ISGF3：IFN．a抗乙肝病毒信号转导机制的重要因子.中华实验和临床病毒学杂志,2005,19(2)：110．13.
9 Zeuzem S，Feinman SV，Rasenack J，et al.Peginterferon alfa．2a i n patients with chronic hepatitis C.N Eng J Med，2000，343:1666．1672.
10 Reddy KR，Wright TL，Pockros PT，et al.Efficacy and safety of pegylated(40．kd)interferon a．2a compared with interferon a2a in noncirrhotic patients with chronic hepatitis C.Hepatology，2001，33:433．438.
11 Linday KL，Trepo C，Heintges T，et al.A randomized，doubleb．lind trial comparing pegylated interferon alfa．2b to interferon alfa．2b as initial treatment for chronic hepatitis C.Hepatology，2001，34:395．403.
12 周炳喜,唐芙爱,杨玉秀.聚乙二醇干扰素a．2b联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎的研究.实用诊断与治疗杂志，2006,20(9):628．629.
13 Taylor MW，Tsukahara T，Brodsky L，et al.Changes in gene expression during pegylated interferon and ribavirin therapy of chronic hepatitis C virus distinguish responders from nonresponders to antiviral therapy.J Virol，2007,81:3391．401.
14 Monkarsh SP， Ma Y，Aglione A et al.Positional isomers of monopegylated interferon alpha．2a:isolation， characterization， and biological activity.Anal Biochem， 1997， 247(2):434．440.
15 Lotrich FE，Rabinovitz M，Gironda P，et al.Depression following pegylated interferon．alpha:characteristics and vulnerability.J Psychosom Res，2007,63:131．5.
16 崔建军,范平,蒋小玲,等.聚乙二醇干扰素α．2a治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的疗效和安全性.中华实验和临床病毒学杂志,2006，20(4):331．333.
17 赵鸿,斯崇文,魏来，等.聚乙二醇化干扰素a．2b与干扰素a．2b治疗e抗原阳性慢性乙型肝炎的疗效和安全性的随机对照多中心研究.中华肝脏病杂志,2006，14(5):323．326.
18 Osborn BL， Olsen HS， Nardelli B et al.Pharmacokinetic and pharmacodynamic studies of a human serum albumin．interferon．alpha fusion protein in cynomolgus monkeys.J Pharmacol Exp Ther， 2002， 303(2):540．548.
19 Sung C， Nardelli B， LaFleur DW et al.An IFN．beta．albumin fusion protein that displays improved pharmacokinetic and pharmacodynamic properties in nonhuman primates.J Interferon Cytokine Res， 2003， 23(1):25．36.
20 张伍魁,范清林,邹文艺,等.白蛋白融合α．2b干扰素在毕赤酵母中的表达.中国生物工程杂志,2005,25(12)：45．49.
21 Yan．Shan Huang， Zhi Chen， Zhi．Yu Yang，et al.Preparation and characterization of a potent，long．lasting recombinant human serum albumin．interferon．a2b fusion protein expressed in Pichia pastoris,2007.
22 Liu C，Zhu H，Subramanian GM，et al.Anti．HCV activity of albinterferon α．2b in cell culture.Hepatol.Res，2007,37:941．947.
23 Zeuzem S，et al.Antiviral response at week 12 following completion of treatment with albinterferon α．2b plus ribavirin in genotype 1，IFN．naive，chronic hepatitis C patients.J.Hepatol,2007，46，S293，779.
24 Balan V，Nelson DR，Sulkowski MS，et al.A Phase I/II study evaluating escalating doses of recombinant human albumin．interferon．alpha fusion protein in chronic hepatitis C patients who have failed previous interferon．alpha．based therapy.Antivir Ther，2006;11(1):35．45.
25 Balan V，Nelson DR，Sulkowski MS,et al.Modulation of interferon．specific gene expression by albumin．interferon．alpha in interferon．alpha．experienced patients with chronic hepatitis C.Antivir Ther,2006;11(7):901．908.
26 Bain VG，Kaita KD，Yoshida EM,et al.A phase 2 study to evaluate the antiviral activity，safety，and pharmacokinetics of recombinant human albumin．interferon alfa fusion protein in genotype 1 chronic hepatitis C patients.J Hepatol,2006,44(4):671．678.
27 黄继芳,章廉,胡俊,等.脂质体干扰素的体外抗乙型肝炎病毒效应..临床肝胆病杂志,1997,13(1):235.
28 吕厚峰,孙迎基,邹文艺,等.基因重组干扰素a．2b脂质体的药代动力学研究.药物生物技术,2005,12(3):186．189.
29 杜施霖,王吉耀,潘弘,等.含有RGD序列环肽介导的干扰素脂质体对大鼠肝纤维化的治疗作用.中华医学杂志,2005,85(15):1015．1020.
30 干扰素治疗慢性乙型肝炎病毒感染的经济效益.中国药房,2006，17(16):1223．1225.
