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在预防控制甲肝传播中发现感染者直接的手段之一,是用实验室ELISA方法进行HAV-IgM抗体测定。笔者用不同试剂对随机抽取临床疑似甲肝血清样品测定的结果进行比较分析,以确保稳定准确的结果,为疾病预防控制提供科学依据。
1 材料来源
临床疑似甲肝HAV-IgM抗体测定血清,数量:38份。
2 试剂
北京万泰HAV-IgM抗体诊断定试剂(酶联免疫法)盒,效期至20091107。英科新创速显HAV-IgM抗体诊断试剂盒(酶联免疫法),效期至20091206。
3 仪器
全自动酶标仪:美国宝特ELX800,洗板机:美国宝特ELX50。海尔集团产AⅡ型生物安全柜,微量加样器,量程50～250μl,37℃恒温水浴箱。
4 方法
2种不同试剂均采用ELISA进行,步骤按试剂盒说明书。北京万泰,①配稀释液,阴性对照3孔,阳性对照2孔,空白对照1孔,相应孔中加入待测样品血清及阴性阳性对照各50 μl,封板,37℃孵育20 min;②清洗5次,每孔加酶标试剂100μl(空白除外),混匀封板,置37℃孵育40 min;③清洗5遍扣干,每孔加显色剂A、B各50μl,混匀,置37℃避光显色15 min;④每孔加终止液50μl,混匀;⑤波长450 nm处用空白调零,然后测各孔OD值 (10 min内测定结果);⑥计算参考值:吸光值CO=阴性对照均值×2.1,当阴性值低于0.05时,按0.05计算。
英科新创:①配稀释液,阴、阳性对照各2孔,空白对照1孔,相应孔中加入待测样品血清及阴性、阳性对照各50μl,置37℃孵育15 min,室温平衡2 min;②清洗5次,每孔加抗原、酶标记抗体各50μl,混匀,置37℃孵育30 min;③清洗5次,扣干,每孔加底物A、B各50μl,混匀,置室温暗置15 min;④每孔加终止液50μl,混匀;⑤波长450 nm处用空白调零,然后测各孔OD值 (30 min内测完);⑥计算参考值:吸光值CO=阴性对照均值×2.1,当阴性值低于0.05时,按0.05计算,当样品OD值S/C.O�1时为HAV-IgM为阳性。
5 结果
在所有的阴性对照中,吸光值都低于0.05,阳性结果判断标准为样品吸光值大于0.105者判定为阳性。
注:查表得t0.10/2.37=1.687,P>0.10,结果无显著差异,两种试剂所测得样品吸光值经处理是无差别的
表中用北京万泰试剂所所得结果中阳性率7/38,为18.42%,英科新创所得结果中阳性率8/38,为21.05%,具体统计结果如表2。
经统计学处理:自由度v=1,n=76,χ2=0.083,查表χ20.75, 1=0.10,P>0.75,在α=0.05水平上,两种试剂所得阳性率没有区别。综合分析两种试剂结果无论吸光度还是阳性率上都无差别。
6 结论
北京万泰和英科新创生产的HAV-IgM检测试剂盒相比较,两者没什么差别,无论用何种试剂对结果均无影响。
7 讨论
7.1 操作步骤 从反应时间看北京万泰75 min,英科新创60 min,相差15 min。
7.2 北京万泰阴性设置三个孔,而英科新创只有两个孔,增加了成本,
7.3 试剂配置中,北京万泰没有HAV-Ag,只有酶标记抗体,而英科则有抗原,增加反应步骤,可操作性不强。
7.4 改进工艺,节约试剂,降低成本,结果更加准确。
参 考 文 献
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