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摘 要：目的：制定改剂型品种香果健消胶囊的质量控制标准。方法：采用薄层色谱法（TLC法）对处方中的蜘蛛香、木香进行定性鉴别；采用高效液相色谱法（HPLC法）对木香中的木香烃内酯进行含量测定。结果：在TLC图谱中可检出蜘蛛香、木香的特征斑点。木香烃内酯在0.1198～1.4382μg的范围内呈现出良好的线性关系（r=0.999998），平均回收率为98.50 %，RSD=1.47%。结论：该方法专属性强，重现性好，可用于香果健消胶囊的质量控制。
关键词：香果健消胶囊；蜘蛛香；木香；木香烃内酯；质量标准
中图分类号：R286 文献标识码：A
文章编号：1007-2349（2011）08-0071-04
香果健消胶囊是在《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第八册“香果健消片”的处方及提取工艺的基础上改变剂型后制成的胶囊剂，其处方用量、临床服用量与香果健消片一致。香果健消胶囊是由蜘蛛香（炒焦）、草果（去壳、炒焦）、木香（炒）、糯米4味药物组成，具有健胃消食。用于消化不良，气胀饱闷，食积腹痛，胸满腹胀。处方中蜘蛛香［1］味苦、辛，性温，具有理气止痛、消炎止泻等功效；草果［1］味辛性温，可燥湿和中，多用于寒湿内阻、脘腹胀痛；木香［1］味辛、苦，性温，有行气止痛、健脾消食等功效；糯米［1］味甘性温，可暧脾胃，止虚寒泄痢。
在原剂型香果健消片的质量标准［2］中，仅有一项加香草醛硫酸溶液的理化鉴别，指标较为单一。为了更好地控制香果健消胶囊的质量，保证疗效，笔者建立了蜘蛛香、木香的薄层色谱法（TLC法）鉴别，并采用高效液相色谱法（HPLC法）对木香主要成分木香烃内酯进行含量测定，方法专属性强，重现性好，结果较为满意。
1 仪器与试药
1.1 仪器 岛津LC-2010A型高效液相色谱仪，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱(250×4.6 mm S/N 8082148)。
1.2 试药 木香烃内酯对照品：中国药品生物制品检定所提供，编号为1524-200101，按92.2%折算，供含量测定用；蜘蛛香对照药材：由中国药品生物制品检定所提供，编号为1179-200001，供鉴别用；木香对照药材：由中国药品生物制品检定所提供，编号为120921-200405，供鉴别用；桉油精对照品：由中国药品生物制品检定所提供，编号为110788-9202，供鉴别用；流动相为色谱纯，其它试剂均为分析纯；香果健消胶囊由云南省玉溪望子隆生物制药有限公司生产。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别 蜘蛛香、草果、木香3味主要药材采用TLC法对其进行鉴别。
蜘蛛香：取本品内容物2 g，研细，加水20 mL，超声处理30 min，离心，取上清液置分液漏斗中，加乙醚20 mL振摇提取，分取乙醚液，挥干，残渣加无水乙醇1 mL溶解，作为供试品溶液。另取蜘蛛香对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液，照TLC法（中国药典2000年版一部附录VI B）试验，吸取上述2种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环己烷-甲乙酮（8∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外灯光下观察，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照溶液无干扰。香果健消胶囊中蜘蛛香的薄层色谱图见图1。
木香：取本品内容物1 g，研细，加氯仿30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液挥至1 mL作为供试品溶液。另取木香对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液，照TLC法（中国药典2000年版一部附录VI B）试验，吸取上述2种溶液各2 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿―环已烷（5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照溶液无干扰。见图2。
草果：无对照药材，因此参照中药材理化鉴定［3］草果的TLC法鉴别项下采用桉油精为对照品进行对照试验，结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照溶液出现干扰，说明此鉴别不具有一定的专属性，故未将其列入质量控制指标。
2.2 含量测定 通过查询，本处方中蜘蛛香、草果中均含挥发油，且成分复杂，分离纯化困难，选择含量测定成分难度较大且意义也不大，故参照《中国药典》2000年版一部木香［4］项下的含量测定法，采用HPLC法对木香有效成分木香烃内酯进行含量测定。
2.2.1 检测波长及色谱条件的选择 波长选择：以甲醇为溶剂配制的对照品溶液，测定紫外吸收，其最大吸收波长位置为206 nm，参照《中国药典》2000年版一部木香［含量测定］项下的木香烃内酯吸收波长为225 nm,因此，确定225 nm波长为木香烃内酯的检测波长。见图3。
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。甲醇-水（65∶35）为流动相，检测波长为225 nm，理论板数按木香烃内酯峰计算应不低于3000。
2.2.2 供试品溶液的制备条件选择 取本品粉末1.0 g，共取6份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加三氯甲烷50 mL，密塞，摇匀，称定重量，放置过夜，分别超声处理10、20、30、 40、50、60 min取出，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液3 mL，置蒸发皿中，挥发，残渣加甲醇2 mL，微热使溶解，转移至10 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。继续用含量测定方法分别测定，结果见表1，试验结果表明超声提取30 min即可使测定结果稳定，故将此条件列入质量控制指标。
2.2.3 对照品溶液的制备 精密称取木香烃内酯对照品适量，加甲醇制成每1 mL含木香烃内酯20 μg的溶液，即得。
2.2.4 供试品溶液的制备 取本品粉末1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加三氯甲烷50 mL，密塞，摇匀，称定重量，放置2 h，超声处理30 min，取出，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液3 mL，置蒸发皿中，挥发，残渣加甲醇2 mL，微热使溶解，转移至10 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各20 μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
2.2.5 阴性样品溶液的制备 按处方剂量及制法和工艺要求制备不含木香的空白样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性溶液，同法进行测定。
2.2.6 专属性试验 制备好的阴性样品溶液，同法进行测定，结果在与对照品木香烃内酯相同的保留时间位置，无其它干扰峰出现，表明除木香外其它药材对木香烃内酯的测定无干扰。见图4~图6。
2.2.7 线性关系考察 精密称取木香烃内酯对照品6.5 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（23.97 μg/mL）。精密吸取对照品溶液5、10、20、30、40、50、60 μL，按含量测定方法进行测定以峰面积积分值对进样浓度进行回归处理，回归方程为y=0.000555022x-0.296123，r=0.999998（n=7），表明木香烃内酯在0.1198～1.4382 μg的范围内呈现出良好的线性关系。测定结果见表2、线性关系考察见图7 。
2.2.8 精密度试验 取同一木香烃内酯对照品溶液，按含量测定方法测定7次，结果见表3。
2.2.9 稳定性试验 取同一供试品溶液，按含量测定方法测定7次，每次间隔时间为2 h，结果见表4。试验结果表明供试品溶液在12 h内稳定。
2.2.10 重现性试验 取同一批号的样品，按含量测定方法重复进行6次试验，结果见表5，证明此方法重现性良好。
2.2.11 加样回收试验 取重现性相同的同一批号样品约0.5g，共6份，精密称定，置具塞锥形瓶中，各精密加入对照品溶液（0.5255 mg/mL）0.8，0.8，1.0，1.0，1.2，1.2 mL，按含量测定方法分别测定，计算回收率，平均回收率为98.50 %，RSD=1.47%(n=6 )，结果符合规定。见表6。
2.2.12 样品含量测定 以上实验结果表明，拟定的含量测定方法切实可行。按含量测定方法，对10批小试、3批中试样品进行了含量测定，结果见表7。
3 讨论
香果健消胶囊是本公司在香果健消片的基础上改变剂型而制成的新药品种，已于2005年7月获得了国家食品药品监督管理局药品注册批件，并组织生产投放市场。原香果健消片的质量标准中仅有一项加香草醛硫酸溶液的理化鉴别，指标较为单一。为了更好地控制香果健消胶囊的质量，保证其疗效，公司建立了蜘蛛香及木香的TLC法鉴别，并采用HPLC法对木香主要成分木香烃内酯进行了含量测定。以上方法学考察结果证明该方法稳定性良好，精密度、重现性及回收率变异系数均符合“中药新药质量标准研究的技术要求”，方法专属性强，重现性好；多批样品含量测定结果显示：测定所得的数据可靠。该实验研究结果为制定香果健消胶囊质量标准控制提供了科学依据。
参考文献：
［1］江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海：上海科技出版社,2002：7.
［2］卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准，中药成方制剂卷八册（WS3-B-1585-93）120.北京：中国科技出版社，1993.
［3］孙长荣,崔同淑.中药材理化鉴定［M］.石家庄：河北科学技术出版社,1999：307.
［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.一部.北京：化学工业出版社,1999：12~46.
(收稿日期：2011-06-22）
