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基金项目：广东省河源市科技局2011年科技立项课题(项目编号：2011024) 松花粉(Pine pollen)，中药名松花、松黄，是松属植物的单性花，泛指马尾松、油松、赤松、黑松和云南松等松属植物的雄性配子体，是我国传统食药兼用的花粉品种［1］。最早记载始见于2400年前的汉•《神农本草》，将“松黄”列为上品［2］。唐•《新修本草》、宋•《本草衍义》、明•《本草纲目》、清•《本草从新》等中均有记载，归纳为：性味甘平，无毒。功能主治：润心肺，益气，除风止血，治心腹寒热邪气，治痢，利小便，消瘀血，治产后壮热、头痛、郏索、口干唇焦、多烦躁渴、昏闷不爽；外用善治诸痘疮伤损并湿烂不痂等；久服轻身益力气，延年［3］。而松花饼、松花糕、松花酒等一些传统美食，迄今仍以松花粉为主要原料。松花粉是祖国医学古籍中收载的仅有的两种花粉之一，中华人民共和国1985年版药典收录松花粉为传统药物，1997年卫生部确认松花粉为新资源品种，列为普通食品管理［4］。
1 松花粉的有效成分
现代研究发现，松花粉成分丰富，含有多种蛋白质、游离氨基酸(含18 种必需氨基酸)、视黄醇、单糖、多糖、维生素、磷脂、葡萄糖氧化酶、核酸、叶酸、脂肪酸、黄酮、生物活性酶、甾醇、微量元素等成分，总量达200多种［5-8］。其黄酮类化合物成分,主要为黄酮和黄酮醇类,其次是二氢黄酮醇类。另外还有少量黄烷醇类的花青素［9］。以红外光谱、扫描电镜和X射线能谱仪分析发现其含Mg，Se，Si，Sr，P，S，C1，K，Ca，Mn，Fe共11种无机元素，其中K元素含量最高。此外，破壁马尾松花粉的元素能谱强度显著高于天然马尾松［10］。近期研究在马尾松花粉中除β2谷甾醇外，还首次发现了单硬脂酸甘油酯、1-正十六烷酸甘油酯、对羟基苯甲醛、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸、3,3�,5,5�,7-五羟基二氢黄酮醇、双氢山柰素、对羟基苯甲酸、3,4-二羟基苯甲酸、山柰酚、丁二酸等10种化合物 ［11］。在苏格兰松的花粉中还发现睾酮、表睾酮和雄甾烯二酮［12］。
2 松花粉的功效
2.1 免疫调节及疫苗佐剂作用 喂服破壁松花粉可提高小鼠血清溶血素抗体水平、腹腔巨噬细胞吞噬能力、小鼠抗体生成和小鼠NK细胞活性及ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化［13］，使小鼠免疫器官的重量增加及网状内皮系统的吞噬能力增强［14］，一个以油松花粉进行的研究结果显示松花粉的种类有可能形成这一作用的细致差异［15］。此外，实验还观察到，破壁松花粉可减轻二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应的影响［13］。在弗氏完全佐剂(含分枝杆菌的水油乳佐剂)和牛Ⅱ型胶原纤维诱发的小鼠关节炎中，松花粉提取物可使炎性细胞因子的生成显著减少，表现出明显的抗炎症作用，这一作用与松花粉的免疫调节机制有关［12］。松花粉的免疫调节作用与剂量相关。而对破壁与不破壁松花粉的药理活性是否相同，尚有争议。但在对小鼠血清溶血素生成及对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响上，未发现破壁与不破壁松花粉对免疫功能作用的明显差别，不破壁松花粉可直接应用［16］。
从松花粉中提取的松花粉多糖，能提高正常小鼠和免疫抑制小鼠的抗体水平、血液淋巴细胞比率、脾脏淋巴细胞转化率以及小肠IgA含量，200 mg/kg)剂量的效果即非常显著，400 mg/kg)剂量能使环磷酰胺(CTX)诱导的免疫抑制完全恢复到正常水平［17］。
破壁松花粉作为饲料添加剂，能够增强雏鸡的体液免疫和细胞免疫水平，而达到抵抗新城疫病毒的目的。破壁松花粉作为新城疫疫苗佐剂接种易感兔，与普通组织灭活苗接种后的情况比较：组织灭活苗免疫后第10天效价为2.75 log2，20 d抗体水平达到6.25 log2，30 d为5.25 log2，已开始有所下降；而松花粉佐剂疫苗免疫后作用快，第10天效价为3.05 log2，20 d抗体水平已达7 log2，30 d抗体水平高达6.75 log2。由此可见，松花粉佐剂疫苗吸收快、产生效价高且作用持久，明显优于普通组织灭活苗［18］。
2.2 调节血脂血糖及铜锌代谢 研究观察到喂服添加3.5%松花粉饲料后不仅非常显著地增加了家猪粪便中甘油三酯、胆固醇及脂肪酸的排泄量,同时也促进了胆酸的排泄。在大鼠的实验中还发现饲料中添加松花粉后可以使大鼠体重得到生理性的控制［19］。在弗氏完全佐剂和牛Ⅱ型胶原纤维诱发的小鼠关节炎中，100 mg/kg)剂量的松花粉提取物治疗显示出明显的降低低密度脂蛋白-胆固醇、蛋白羰基(protein carbonyl)、后期糖化终产物(advanced glycation endproducts)、脱氢丙二酰(malondialdehyde) 和升高高密度脂蛋白-胆固醇的效果［12］。四氧嘧啶致糖尿病的小鼠灌服30 d破壁松花粉后观测到，较高剂量(1.5 g/kg)的破壁松花粉能明显降低四氧嘧啶致糖尿病小鼠的2 h时相血糖含量及血糖曲线下面积，提示高剂量破壁松花粉具有增强四氧嘧啶致糖尿病小鼠的糖耐量作用，破壁松花粉有降低血糖的功能。这与历代本草记载松花粉可治疗口干唇焦、多烦躁渴等消渴症状相吻合［20］。
此外，在正常生长雄性鼠、缺锌幼鼠和前列腺增生大鼠中，还发现松花粉对铜、锌代谢及其分布有调节作用［14，21-24］。
2.3 抑制前列腺增生 有研究通过对前列腺指数和病理学观测以及对血清生化学、抗氧化指标、铜锌含量、激素水平等的检测发现，松花粉能够明显改善丙酸睾酮所致大鼠前列腺的病理损伤, 对实验性前列腺增生具有明显抑制作用，机制可能是松花粉不仅能够通过降低雌激素和雄激素,调节微量元素的代谢和过氧化物歧化酶 (SOD)活性而抑制前列腺增生，而且还能通过非激素途径在细胞水平发挥选择性的抑制作用［14，23-24］。
2.4 抗衰老、抗氧化、抗疲劳、抗炎症 抗衰老一直是人类渴望攻克的难题。衰老研究成为西方科学研究的热点始于上世纪末，迄今己形成了关于衰老机制的各种假说，如端粒假说、DNA氧化损伤假说、自由基假说等，为抗衰老的相关研究提供了理论依据和研究方法［25］。
鲍善芬等用四个体外摸拟人类疾病过程如缺血再灌注、体内炎性反应等中的生化反应系统对马尾松花粉的抗炎和抗氧化性能进行评价。结果发现，松花粉对这些反应系统所产生的过氧化氢、超氧自由基、羟自由基和次氯酸等活性氧系具有较好的清除作用，以浓度依赖关系抑制反应的发生并发挥抗氧化作用，对涉及炎症反应的髓过氧化学物酶(MPO) 活性较好的抑制作用［25］。在后期的一个研究中，他们用铜诱导的LDL氧化反应模型和Rose Bengal反应模型分别对松花粉和松针提取物在亲脂性体外模型中的抗氧化能力及其机制进行研究。结果表明，松花粉乙醇提取液具有较好的自由基链式反应阻断剂的作用，能有效地推迟人血浆中低密度脂蛋白(LDL)氧化生成共轭二烯。松针乙醇提取液对LDL的保护作用优于松花粉。在Rose Bengal系统中,松花粉以清除自由基和螯合铜的两种机制抑制脂质过氧化反应的发生,而松针主要作为自由基清除剂发挥抗氧化作用。即松花粉和松针在两个亲脂性体外模型中均发挥很好的抗氧化能力,而抗氧化机制不尽相同［26］。
几个研究以D-半乳糖连续腹腔注射制作亚急性衰老大鼠模型，采用生物化学方法检测了相关指标。结果显示，D-半乳糖所致亚急性衰老大鼠模型组超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase, SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GSH-PX)活力和总抗氧化能力(T-AOC)均明显下降，丙二醛(Maleic Dialdehyde, MDA)含量明显上升。经松花粉给药后，衰老小鼠脑组织、血清MDA 含量及脑、肝组织脂褐质 (Lf) 含量明显降低， SOD、过氧化氢酶(CAT)、GSH-PX活性及T-AOC均有显著提高；松花粉中、低剂量给药可明显增加衰老大鼠体重，并改善大鼠毛色及活动；松花粉还可提高D-半乳糖所致亚急性衰老大鼠精子的数量、活动度和存活率。上述作用，松花粉的效果好于维生素E。故认为松花粉可显著提高亚急性衰老大鼠抗氧自由基的能力，提高精子的数量、活动度和存活率，具有延缓衰老的作用［27-30］。此外，松花粉也可能通过明显改善D-半乳糖衰老模型小鼠T细胞亚群的变化, 显著增高网状内皮系统的吞噬指数和吞噬活性，增强衰老鼠的免疫功能而延长老龄鼠的生存时间［28］。
钟馨等以在国际上普遍认可的自然衰老小鼠和自然衰老人胚肺二倍体细胞作为动物和细胞衰老的研究模型，从器官、组织、细胞、分子和基因等多个水平着手，选取形态学、自由基、端粒酶、线粒体为衰老研究指标，系统地研究了松花粉的抗衰老效果及其分子机制。已完成的实验，证实松花粉具有促进细胞增殖、抑制自由基表达、提高端粒酶活性和降低线粒体mtDNr977突变率等作用，从抑制衰老诱发因素的负效应、促进细胞增殖等方面验证了松花粉的抗衰老效果。后期又从松花粉对两条衰老相关的内在基因调控途径，即p53-p21-pRb和p16-pRb途径中p16及p21基因表达的影响进行研究，发现：①松花粉具有促DNA增殖，改善G1期阻滞(Glcycleaxrest)的作用。②在年轻细胞中p16INK4A与P2lcIP-1的mRNA均维持较低的表达。而在衰老细胞中， p16INK4^mRNA表达量出现显著上升，并在松花粉处理后出现显著的下降，且下降程度与剂量具有相关性。P2lcIP-1mRNA表达量在衰老细胞中也出现显著上升，但松花粉处理组与衰老模型组中其表达无显著性差异。说明松花粉对P2lcIP-1mRNA表达无影响，但显著抑制了p16INK4mRNA的表达，并通过p16-cyclinD-cDK4/6-RB通路延缓了细胞衰老的启动和衰老进程，这可能是松花粉抗细胞复制性衰老的主要分子［31］。
相关研究显示，松花粉能显著延长小鼠负重游泳时间，降低运动后小鼠血乳酸含量和血清尿素氮含量，且运动后肝糖原含量高于对照组，证实松花粉具有抗疲劳作用［32］。
松花粉及其提取物还有明显的抗炎症作用和减低痛敏感性，该作用与松花粉及其提取物抵制前炎性介质的产生有关，尤其是那些与脂氧化酶和环氧合酶通路相关者［12，33-34］。
2.5 抗肿瘤 Lipovova等用从黑松花粉提取的核酸酶与牛精液核糖核酸酶比较研究体内外抗肿瘤活性。体外实验结果显示，黑松花粉核酸酶在体外的抗肿瘤作用与牛精液核糖核酸酶相比下是微不足道的。然而，体内实验的结果则大为相异，在这种核酸酶和动物核糖核酸酶及脱氧核糖核酸酶1治疗的小鼠中，观察到人黑素瘤的体积显著缩小。然而，在使用10次更高剂量后，用松花粉核酸酶给予荷瘤裸鼠，其肿瘤体积缩小46%，而用牛精液核糖核酸酶治疗的肿瘤生长仅稍有缩小。而且，与牛精液核糖核酸酶相比，黑松花粉核酸酶的免疫源性明显地更弱，抗黑松核酸酶抗体在体内不引起生物学效应。表明黑松核酸酶与动物牛精液核糖核酸酶相比，在体内对裸鼠生长中的人黑素瘤有更高抗肿瘤活性［35］。
另一研究以马尾松花粉多糖和硫酸酯化的马尾松花粉多糖处理人肝癌细胞株HepG2。经马尾松花粉多糖硫酸酯处理后, HepG2细胞的增殖受到抑制，细胞形态趋于正常。与对照组相比, 马尾松花粉多糖硫酸酯组G0/G1期细胞数增加，S期细胞数减少, G2/M细胞数减少; ［Ca2+］I降低; 甲胎蛋白表达降低, 白蛋白分泌量上升, γ-谷氨酰转肽酶与碱性磷酸酶活力降低，胎盘型碱性磷酸酶的比例降低。而马尾松花粉多糖处理组细胞没有明显变化。因此认为，硫酸酯化赋予了马尾松花粉多糖抑制HepG2细胞的活性, 其作用机理可能是降低细胞内钙离子浓度, 阻滞细胞周期于G0/G1期, 诱导HepG2细胞分化逆转其恶性［36］。
2.6 护肝、调节慢性应激性肠道微生态紊乱、对抗砷中毒等 在酒精及四氯化碳引起的肝损伤模型鼠中，观察到服用一定量松花粉或松花粉总黄酮能降低肝损伤小鼠肝组织丙二醛(MDA)、甘油三脂(TG) 含量，提高肝组织还原型谷光甘肽(GSH)含量和SOD的活性，抑制肝损伤所致的ALT和AST的升高,减轻肝组织脂肪变性和坏死程度。表明松花粉和松花粉总黄酮能对抗酒精及四氯化碳引起的肝损伤，具有有效的护肝作用，抗氧化是其主要机制之一［2，37，38］。
在大鼠饲料中添加功能性低聚糖水苏糖可以改善模拟失重大鼠肠道菌群失调状态，白树民等在大鼠慢性应激动物模型的研究中进一步发现，进食含5%松花粉饲料能够有效地防护慢性应激导致的肠道微生态失调，且其作用优于功能单一的低聚糖［39］。
此外，松花粉还能降低砷中毒大鼠血砷含量，提高血清GSH-PX活性, 降低砷中毒后小鼠肝肾的损伤程度,抵抗砷中毒死亡，且具有一定防治皮肤溃烂等病损的作用［40-41］和提高砷中毒鼠的T淋巴细胞rDNA转录活性而提高机体免疫力［42］。更早期的研究还发现松花粉对血小板激活因子的有显著抑制作用［33］。
3 松花粉的毒副作用研究
经毒理研究，破壁松花粉可通过急性毒性、微核试验、精子畸形试验和30 d喂养试验的毒理学安全性评价［43］，安全无毒，与古医籍记载相吻合。而其可能的过敏反应在松树开花季节只发生在过敏人群的3.5%［44］。
4 松花粉的临床应用
松花粉被用作抗疲劳、延缓衰老、调节胃肠功能、护肝、益心肺等的滋养药物已2000余年，也用于治疗前列腺疾病和贫血、糖尿病、高血压、气喘、鼻炎等多种疾病［34］。但目前松花粉的临床应用研究报道尚不多见，仅见于高血脂［45］、高血压［46］、前列腺疾病［47-49］及外用于水痘、压疮等皮损［50-52］治疗的研究中。在这些研究中，松花粉呈现出极有潜力的治疗效果，尤其是在无毒副作用及综合治疗效应上更具得天独厚的优异性。
我国松属植物资源丰富,其中数量较多的有产于东北长白山和小兴安岭的红松,主产于华北的油松,产于西南的云南松,分布在长江流域以南且数量最多的马尾松,以及产于陕西、河南、甘肃、四川等地的华山松,此外,还有从国外引进的黑松等［53］。与类似具有广泛作用的冬虫夏草［54-55］相比，确有成本低廉、周而复生、取之不尽的优势。但不同种类的松花粉，其成分及含量也有区别，有必要对不同种属松花粉进行成分及含量的进一步比较研究，以利于在开发应用松花粉时,能根据松花粉的品种量材施用。
关于松花粉药理药效的前期报道多为动物实验或体外实验中的作用研究，在临床治疗、保健及至预防的应用研究目前尚不多见，有待在各相关领域广泛开拓。此外，松花粉还含有多种酶和多种脂类, 这方面的研究也尚待深入。
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