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摘要；目的：建立高效液相色谱法测定新止咳合剂中甘草苷的含量。方法：采用Dikma钻石C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙睛-0.5％冰醋酸溶液(20：80)；检测波长为276nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。结果：甘草苷进样量在0.02～1.0μg(r=O.99990)范围内与峰面积线性关系良好，平均加样回收率为99.27％，RSD=0.67％(n=9)。结论：本法简便、快速、专属性强、重现性好；可作为新止咳合剂的质量控制方法。
关键词：甘草苷；高效液相色谱法；新止咳合剂；含量测定
中图分类号：R927.2
文献标识码：A
文章编号：1007-2349(2008)02-0035-02
新止咳合剂由桔梗、陈皮、儿茶、甘草、法半夏等药制成，具有止咳、祛痰的功效。为本院的医疗机构制剂。质量标准中没有规定含量测定方法。本文参考《中国药典》2005年版，采用HPLC法测定甘草的主要成分――甘草苷的含量，作为质量控制指标，获得满意的结果，现报道如下。
1、仪器与药品
高效液相色谱仪(美国Agilent 1100系列仪)，包括自动进样装置、VWD可变紫外检测器、柱温箱等；METTLERAE240型电子分析天平。除高效液相色谱检测所用试剂为色谱纯外，其他试剂均为分析纯。甘草苷对照品(批号为111610-200604，供含量测定用，中国药品生物制品检定所)；新止咳合剂(由本院制剂室配制，批号：20070206、20070403、20070428)。
2、方法与结果
2、1色谱条件
色谱柱：Dikma钻石C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙睛-0.5％冰醋酸(20：80)；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：276nm；进样量：10μl。理论板数按甘草苷峰计算为7000。
2、2溶液的制备
精密称取甘草苷对照品(置五氧化二磷为干燥剂的干燥器中，减压干燥36h)10.08mg，置于20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每lml中含甘草苷0.504mg的溶液(贮备液)，分别精密吸取溶液(贮备液)①0.1ml、②0.3ml、③0.5ml、④1ml、⑤3ml、⑥5ml；分别置于25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别得每1ml含①2.016μg，②6.048μg，③10.08μg，④20.16μg，⑤60.48μg，⑥100.8μg的对照品溶液。
取新止咳合剂10ml，用乙酸乙酯提取5次(20、20、10、10、10ml)，合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2、3方法学考察
2、3、1标准曲线和线性范围 精密吸取甘草苷对照品溶液①、②、③、④、⑤、⑥各10μl，分别注入高效液相色谱仪测定。以甘草苷对照品含量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，直线几乎通过原点，所以采用外标一点法进行含量测定。线性回归方程为y=1541.84x+13.19737，r=0.99990，线性范围为0.02～1.0μg。
2、3、2精密度试验
取同一甘草苷对照品溶液④10μl，注入液相色谱仪，连续测定6次，结果峰面积积分值分别为：324.6795,325.4753,325.0652,326.3199,325.5747，326.7230；积分值平均为：325.64，RSD=0.23％。结果表明仪器精密度较好。
2、3、3稳定性试验
取同一对照品溶液④和同一供试品溶液(批号为20070428)各10μl，分别于0，2，5，10，15，20，24h注入液相色谱仪测定，结果峰面积积分值的RSD=1.3％，表明在24h内对照品和供试品的峰面积积分值稳定，说明测定溶液配制好后，放置24h内测定均可。
2、3、4重现性试验 取同一批号的新止咳合剂(批号：20070428)，按供试品溶液的制备方法重复操作测定6次，结果平均含量为67.0μg/ml，RSD=1.25％。
2、3、5回收率试验
采用加样回收法，取已知含量的同一批号(20070428)新止咳合剂(含量为：67.0μg/ml)适量，分别精密加入甘草苷对照品适量，按供试品溶液的制备及测定法操作。结果见表1。
2、3、6阴性干扰试验
照上述条件测定新止咳合剂空白(不含甘草药材制成的阴性合剂)制剂，结果在甘草苷色谱峰相对应的保留时间处无吸收峰，说明处方中其它药味对甘草中的甘草苷测定无干扰。见图1。
2、4样品含量测定 按供试品溶液的制备及测定法操作，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，外标一点法计算。结果见表2。
3、讨论
甘草苷是甘草中主要的活性成分之一，也是新止咳合剂治疗疾病的重要成分，故选择该物质作为考察指标。
试验中曾使用过色谱柱Allteeh Apollo C18(4.6mm×250mm，5μm)和phenomenex C18ODS3 110A(4.6mm×250mm，5μm)，均能用于新止咳合剂中甘草苷的含量测定，但理论板数不得低于5000。
本法简便、快速、专属性强、重现性好，可作为新止咳合剂的质量控制方法。
