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摘 要：目的：建立复方蒲黄肠康胶囊中五倍子的质量标准。方法：用TLC法鉴别制剂中的五倍子，用HPLC法测定制剂中没食子酸的含量。色谱柱为C18柱(200mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇：0.1%磷酸溶液(10∶90)；检测波长为273nm。结果：在TLC色谱中能检出五倍子，没食子酸在26～56μg/ml范围内，线性关系良好(r2=0.9999)，平均回收率为98.99%，RSD为1.22%。结论：所建鉴别方法专属性强，定量方法简便、准确，可用于复方蒲黄肠康胶囊中五倍子的质量控制。
关键词：薄层色谱法；高效液相色谱法；复方蒲黄肠康胶囊；五倍子；没食子酸
中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1673-2197(2008)04-031-03
复方蒲黄肠康胶囊是辽宁医学生物技术研究所新开发的复方中药制剂，以天然药物蒲黄为主药，联合五倍子、苦参等中药材，经提取后而制成的肠溶胶囊，具有抗菌消炎、止血、涩肠、解痉、止泻的作用。临床上主要用于治疗溃疡性结肠炎。
没食子酸是五倍子中主要成分之一，它能与蛋白质结合，对肠道细菌有直接的杀灭作用[1]。对其进行定性、定量分析的方法有三氯化铁法[2]，薄层扫描法[3]和高效液相色谱法[4]。为有效的控制其质量，本实验以五倍子中的没食子酸为指标，用薄层色谱法鉴别胶囊中五倍子的存在，用高效液相色谱法测定没食子酸的含量，并初步制订了质量标准。
1 仪器与试剂
高效液相色谱仪：岛津SCL―10Avp高效液相色谱仪，SPD―10Avp二极管阵列检测器，LC-10ATVP色谱泵。薄层用硅胶GF254(青岛海洋化工厂)；复方蒲黄肠康胶囊由辽宁医学院新药研究所提供；没食子酸对照品，购自中国药品生物制品检定所，为含量测定用；甲醇为色谱纯；水为重蒸水；其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 五倍子的鉴别
2.1.1 供试液的制备
将复方蒲黄肠康胶囊除去囊壳，取0.5g本品粉末，加甲醇5ml，超声处理15min，滤过，滤液作为供试品溶液。
2.1.2 对照品溶液的制备
取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
2.1.3 阴性对照溶液的制备
按处方比例制成缺五倍子的阴性对照药，按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验[5]，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-甲酸乙脂-甲酸(5∶5∶1)为展开剂，上行展开12cm，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。阴性对照品相应的位置上无干扰。(见图1)
图1 五倍子TLC色谱图
1.供试品溶液；2.对照品溶液；3.阴性对照品溶液
2.2 五倍子的含量测定
2.2.1 色谱条件
用Hypersil 0DS2色谱柱(200mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇：0.1%磷酸溶液(10：90)；检测波长为273nm。理论塔板数按没食子酸计算应不低于3000。
2.2.2 对照品溶液的制备
称没食子酸对照品2mg，置50ml容量瓶中，加50%甲醇制成40μg/ml的溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备
取本品胶囊内容物，研细，称约1g，精密称定，精密加入4mol/L的盐酸溶液50ml.，在水浴中加热水解3.5h，放冷，滤过。精密量取续滤液1ml，置100ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.2.4 阴性对照溶液的制备
按处方比例制成缺五倍子的阴性对照药，按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
2.2.5 系统适用性试验
分别取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液适量，用0.45μm滤膜滤过，各进样10μl，按上述色谱条件测定，记录色谱图(见图2)，按外标法计算样品含量。
图2 阴性对照品(上)，对照品(中)，供试品(下)
2.2.6 标准曲线的绘制
精密称取没食子酸对照品置于10mL容量瓶中，以甲醇溶解并定容，制成浓度分别为26μg/ml、32μg/ml、40μg/ml、48μg/ml、56μg/ml的溶液。分别精密量取以上5种浓度溶液10μl注入高效液相色谱仪进行测定，以峰面积与浓度进行线性回归，得回归方程为：Y=41218X-49520，r2=0.9999。表明浓度在26～56μg/ml范围内线性关系良好。
2.2.7 稳定性考察
取同一样品溶液3批，精密吸取10μl，分别在0，6，12进样，结果RSD为2.94%(n=3)，表明样品溶液在12h内稳定。
2.2.8 精密度考察
精密吸取没食子酸对照品溶液，重复进样5次，测定峰面积，结果RSD为1.82%(n=5)。
2.2.9 回收率实验
精密称取5份已测定没食子酸含量的样品(批号060307)，分别准确加入没食子酸对照品适量，按供试品溶液制备方法操作和色谱条件进行测定，计算回收率，测得平均回收率为98.99%，RSD为1.22%(见表1)。
2.2.10 样品含量测定
分别取批号060206、060307、060409的三批样品，照供试品制备方法制备供试液，依法测定没食子酸的含量，三批样品测定结果见表2。
3 讨论
(1)处方中主药五倍子的有效成分为没食子酸，是一种比较复杂的高分子多元酚类化合物，处方中其他药材不含没食子酸成分，故以没食子酸作为鉴别依据。薄层色谱法(TCL)设备简单，分析速度快，分离效率高，结果直观，是定性分析的常用方法。本文采用薄层色谱法鉴别复方蒲黄肠康胶囊中的五倍子，方法简便，分离效果好，斑点清晰，空白无干扰，本鉴别方法专属性强。实验中薄层板的制备很关键，铺板要均匀，活化要充分，否则有背景荧光斑点的干扰。
(2)本文样品的提取曾采用超声提取和水浴加热提取两种方法，经过实验比较，结果后者明显优于前者，并对样品水解条件进行了选择，结果显示，3.5个小时提取完全。
(3)含量测定采用高效液相色谱法，考察了多种不同类型和不同比例的流动相系统，实验结果表明：以甲醇0.1%磷酸溶液(10∶90)为流动相系统时分离效果最佳，保留时间适当，重现性好。
(4)采用HPLC法测定复方蒲黄肠康胶囊中没食子酸的含量，方法简便，重复性好，结果可靠，可以作为制剂生产中控制质量的方法。
参考文献：
[1] 季宇彬.中药有效成分药理与应用[M].哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1995：203.
[2] 姚敬明，张李俊，王娟平，等.石榴皮、五倍子中鞣质的提取及测定试验[J].中兽医学，2004，118(3)：5.
[3] 郭耀武，杨瑞瑞.五倍子中没食子酸薄层扫描法测定[J].现代中医药，2002(5)：77.
[4] 侯惠婵，梁前，卢迅聪.五倍子、没食子中没食子酸的含量测定[J].中国药品标准，2005，6(3)：38.
[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：化学工业出版社，2005.45.
(责任编辑：陈涌涛)
Studies on Quality Standards of Galla Chinensis for Fufang Puhuang Changkang Capsules
ZHAO Yan，WANG Hongxin
(Scientific Experimental Center of Liaoning Medical College，Jinzhou 121001，China)
Abstract：Objective：To establish the quality standards of Galla Chinensis for Fufang Puhuang Changkang capsules.Methods：The presence of Galla Chinensis was identified by TLC.The content 0f gallic acid was determined by HPLC.The separation of gallic acid was performed on Hypersil 0DS2 chromatographic column；the mobile phase was composed of methanol-0.1% phosphoric acid solution(10∶90) with a flow rate of 1.0ml/min and detection wavelength of 273nm.Results：TLC can be used to determine the presence of Galla Chinensis.The linear range of gallic acid was 26～56μg/ml(r2= 0.9999).the average recovery rate was 98.99%(RSD=1.22%).Conclusion：These methods are specific and accurate.they can be used to control the quality of Galla Chinensis for Fufang Puhuang Changkang capsules.
Key words：TLC；HPLC；Fufang Puhuang Changkang capsules；Galla Chinensis；Gallic acid
