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【摘要】 目的 观察8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)在2型糖尿病模型大鼠肾脏的表达及瑞舒伐他汀钙(Rosuvastatin)对它的影响。方法 将大鼠分为正常对照组(C)、糖尿病组(D)、瑞舒伐他汀钙治疗组(N)，比较各组大鼠肾组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物岐化酶(SOD)活性，和8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量，同时观察血糖、血胰岛素、肾功能和肾脏形态变化。结果 与正常组比较，糖尿病组血液中MDA含量明显上升(P[3]。而8-OHdG是DNA氧化损伤的产物，故它可以作为反映DNA氧化损伤的生物指标，从而反映糖尿病的发生发展。瑞舒伐他汀钙上市以来，主要作为降胆固醇及抗动脉粥样硬化药。近年来，大量资料及体内外试验表明，其也有很强的抗氧化作用。因此，本实验以2型糖尿病(diabetes mellitus,DM)模型大鼠为研究对象，观察瑞舒伐他汀钙对该模型大鼠肾脏8-OHdG的影响。�
1 材料与方法�
1.1 材料�
1.1.1 实验动物 25只清洁级Wistar大鼠，雄性，购自河南大学动物中心，体重100~150 g。�
1.1.2 试药 链尿佐菌素(STZ，德国MERCK公司，以0.1 mol／L、PH为4.2的枸橼酸缓冲液溶解，临用前配制)；瑞舒伐他汀钙(商品名可定，阿斯利康制药有限公司)；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、8-OHdG检测试剂盒(日本Japanese aged control institute)。�
1.1.3 仪器 紫外分光光度计 (上海分析仪器厂)；自动生化分析仪 (美国Technicon公司)；磁酶联免疫测定仪(北京倍爱康生物技术有限责任公司)。�
1.2 方法�
1.2.1 动物分组与处理 大鼠适应性饲养1周后，按体重随机分为正常对照组 (C组，7只)和实验组(B组，18只)。C组给予普通食料，B组给予高糖、高脂饮食 (由常规饲料加15％蔗糖、5％猪油、0.5％胆固醇配制而成)。4周后B组腹腔注射STZ(注射量为35 mg／kg)，72 h后经尾静脉采血测空腹血糖(FBG)。以禁食后血糖水平≥7.8为标准，判定2型糖尿病大鼠模型是否建立成功，成功者(共 14只)。再随机分为糖尿病组 (D组，7只)和糖尿病可定治疗组(N组，7只)，N组以可定500 mg／(kg/d)灌胃，C组、D组则给予相同剂量的蒸馏水各组大鼠均单笼饲养，自由进食、饮水。给药8周后代谢笼收集24 h尿液，低温离心后测尿微量白蛋白。后麻醉大鼠，自下腔静脉取血，摘取双侧肾脏，称重，取部分皮质以4％的多糖甲醛固定，部分以3.7％的戊二醛液固定。�
1.2.2 检测项目与方法�
1.2.2.1 生化指标的检测 血糖水平用葡萄糖氧化酶法检测，血胰岛素水平采用磁酶联免疫吸附法检测，血尿素氮 (BUN)、血肌酐(Cr)由自动生化分析仪检测，24 h尿微量白蛋白采用放射免疫法测定。�
1.2.2.2 肾组织中MDA含量、SOD活性的测定 取0.5 ml组织匀浆，低温离心，取上清液，采用化学比色法测定光吸收度，计算MDA、SOD含量。�
1.2.2.3 肾组织免疫学检查 常规脱蜡，封闭，一抗37℃孵育2 h，4℃冰箱过夜，标记二抗，作免疫染色，应用高清晰度彩色免疫图像分析系统(IPP55.0)分析，测定肾小球(平均光密度)直径。�
1.2.2.4 肾脏组织电镜观察 肾组织固定，脱水，包埋，切片，染色，在Hitachi-7500透射电镜下观察。�
1.3 统计学方法
实验数据以x±s表示，应用SPSS 13统计软件进行处理，两组间数据采用ANOVA检验，若方差不齐，采用非参数统计检验，P0.05)，但其肾重及肾重／体重均明显低于D组(P[1,2]。�
本研究还表明糖尿病的氧化应激与糖尿病肾病的发生存在密切关系，2型糖尿病大鼠成模12周后，BUN，Cr和ALB升高，DBM增厚，系膜区明显增宽，部分肾小球出现硬化，足突成阶段性融合，说明高糖状态下肾脏功能和形态均受到损伤。相关分析表明糖尿病大鼠尿白蛋白排量与8-OHdG和 MDA呈正相关，与SOD呈负相关, 说明氧化应激参与了糖尿病肾病的发生发展[3]。Chang JM等[4]发现局部氧自由基水平与肾小球硬化和系膜增生相关，在糖尿病发展中起重要作用。因此，抗氧化治疗可减轻DM引起的肾脏损伤。�
8-OHdG被认为是DNA氧化应激损伤的重要标志物[5,6]。当机体修复机制正常时，这种DNA氧化损伤产物被机体的特异性DNA修复酶hOGG1等从DNA链上切除并重新渗入正常的鸟嘌呤碱基而经肾脏随尿排泄，因而其含量可以反映机体的DNA氧化损伤程度，是目前国际上公认的一种新型的评价机体的DNA氧化损伤和机体氧化应激状态的敏感指标和生物标志物。近年研究发现糖尿病肾病时8-OHdG表达明显增高[7]，是肾小球细胞蛋白质氧化应激的指标。本研究发现成模后的2型糖尿病大鼠肾脏的8-OHdG表达明显高于正常组(P[8,9]，Umeji K等[10]在一些干预动脉硬化的实验中发现可定能够减少8-OHdG的含量，其机制为通过减少NADPH的氧化反映来减少ROS的含量。但有关瑞舒伐他汀钙干预肾脏8-OHdG表达国内外未见类似报道。本实验就对此问题进行了研究，实验发现瑞舒伐他汀钙治疗组肾脏8-OhdG的表达较糖尿病组明显下降(P ［5］ Wu L L, chiou C C, Chang P Y,et al. Urinary8-OHdG:a marker of oxidafives tress to DNA and a risk factor for cancer, at heroseclerosis and diabetics. Clin Chim Acta,2004,339(7):1-9.�
［6］ Echtay K S, Roussel D, St-Pierre L, et al. Superoxide activates mitochondrial uncoupling proteins.Nature,2002,415(6):96-99.�
［7］ Fan Q L, Liao J. Candesartan reduced advanced glycation end-products accumulation and diminished nitro-oxidative stress in type 2 diabetic KK/Ta mice. Nephrology Dialysis Transplantation,2004, 19(12):3012-3020.�
［8］ Yoshida M, Kimura H, Kyuki K, et al. Combined effect of probucol and insulin on renal damage in diabetic rats fed a high cholesterol diet.Eur Pharmacol, 2006, 24 (3):174-180.�
［9］ Kim D S, Kim H R. Protective effect of calceolarioside on adriamycin-induced cardiomyocyte toxicity. Eur Pharmacol, 2006,10(2):24-32.�
［10］ Kyoko U, Umemoto S. Comparative effects of pitavastatin and probucol on oxidative stress, Cu/Zn superoxide dismutase, PPAR-γ, and aortic stiffness in hypercholesterolemia. Am. Physiol Heart Circ Physiol,2006, 291(1):2522-2532.
