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摘 要：目的：观察三七总皂苷对肺纤维化大鼠smad 2/3表达的影响，探讨其作用机制。方法：56 只 SD 大鼠随机分为模型组、对照组、三七总皂苷组、地塞米松组。采用博莱霉素制备肺纤维化大鼠模型，24 h 后给予干预药物，分别于 14 d、28 d处死动物后观察其病理变化、肺系数及Smad 2/3的表达。结果：与模型组比较，三七总皂苷组的肺泡炎和肺纤维化明显减轻，肺组织Smad 2/3表达降低。结论：三七总皂苷抑制博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的机制与其抑制Smad 2/3蛋白有关。
关键词：三七总皂苷；Smad 2/3蛋白；博莱霉素；肺纤维化
中图分类号：R285.5文献标识码：A
文章编号：1007-2349（2011）05-0065-02
肺纤维化（Pulmonary fibrosis，PF）疾病是各种不同病因肺部疾病的共同结局，包括特发性肺纤维化、结节病、尘肺、过敏性肺炎、药物和放射线导致的纤维化，与胶原血管病有关的致纤维化肺泡炎等，病因各异，疾病谱广泛。目前有研究显示三七总皂苷对肝纤维化有一定干预作用［1］。本研究采用博莱霉素制备肺纤维化大鼠模型，以Smad2/3为靶点，观察其肺纤维化组织中的表达，有助于揭示肺纤维化的发病机制以及指导临床防治。
1 材料与方法
1.1 动物来源 健康雄性SD大鼠56只，体重 200 ±20 g，购于昆明医学院实验动物中心 ，合格证号：0010295。
1.2 药物与试剂 博莱霉素：15mg/支，日本化药株式会社生产；三七总皂苷（络泰注射用血塞通）由昆明制药集团有限公司提供；Smad 2/3试剂盒购自武汉博士德生物有限公司；DAB显色试剂盒由福州迈新生物技术开发有限公司提供。
1.3 动物模型的建立及分组 将大鼠随机分为模型组（MG）、对照组（CG）、三七总皂苷组（PG）、地塞米松组（DG），每组 14 只。除对照组外，其他3组大鼠均按照文献报道的方法，经气管一次性注入博莱霉素A5（5mg/kg体重）复制肺纤维化大鼠模型。对照组以生理盐水代替博莱霉素。术后置动物于干燥、温暖条件下喂养，定期消毒喂养场所。模型建立24 h 后腹腔内注射干预药物，每日1次，PG为三七总皂苷100mg/ kg•d，DG为地塞米松1 mg/ kg•d，MG则为0.9%氯化钠注射液0.4 mL/d。
1.4 标本的采集 各组大鼠分别于手术后第14 d和28 d各处死7只。大鼠称重后麻醉，剖胸取肺并称重，取左下肺叶固定于10%的福尔马林溶液中，供HE染色和免疫组化检测用。
1.5 检测指标 （1）一般情况观察。（2）病理组织学检查：HE染色。（3）smad 2/3蛋白测定：普通光镜下观察，每张切片随机选取5个低倍视野，胞浆呈清晰棕色为阳性。按染色结果分为：0级阴性（-），1级灶状阳性（+），2级弥漫性弱阳性（++），3级弥漫性中等阳性（+++），4级弥漫性强阳性（++++）。
1.6 统计学方法 数据以均数±标准差表示，采用SPSS11.0统计软件包进行分析，采用t检验，P［2］。Smad家族蛋白是细胞因子受体的胞内激酶底物，介导了TGF-β1对基因表达的调控［3］。三七总皂苷具有抗脂质过氧化作用，改善肺部微循环；抑制炎性细胞的渗出与趋化，减少细胞因子的产生和释放；抑制肺成纤维细胞增殖，减少胶原的合成；增强胶原酶活性，促进已合成的胶原的降解，从而达到抑制肺纤维化的作用［4］。本实验结果显示，经气管注入博莱霉素造模后，MG一般情况变差，病理呈肺纤维化改变，smad 2/3广泛表达于肺组织细胞胞浆和胞核，14 d和28 d均强阳性表达。PG、DG大鼠肺组织炎症及肺纤维化程度均好于MG，但低于CG。而smad 2/3蛋白表达趋势同MG，但低于MG，高于CG。说明三七总皂苷和地塞米松对肺纤维化有一定干预作用，能延缓肺纤维化发生，但不能治愈。但DG，死亡率高，副作用大，不宜于长期使用。
综上所述，三七总皂苷可在一定程度上干预肺纤维化进程，其干预博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化机制与抑制Smad 2/3蛋白表达有关。Smad 2/3是肺纤维化发生发展的关键性因子。因此，Smad 2/3及其家族作为抗纤维化机制中的重要靶点，可进一步研究。
参考文献：
［1］张荣华，周子成，洪多伦，等.三七抗肝纤维化的实验研究［J］.第三军医大学学报，2000，（04）：307~309.
［2］邵长周.细胞因子在肺纤维化形成中的作用［J］.国外医学•内科学分册，2001，28（11）：484.
［3］Ulrika Zagai，Elham Dadfar，Joachim Lundahl，et al.Eosinophil Cationic Protein Stimulates TGF-β1 Release by Human Lung Fibroblasts In Vitro［J］.Inflammation，2007，（5）：153~160.
［4］李学军，崔社怀.三七总皂苷抗肺纤维化的实验研究［J］.药物研究，2004，13（4）：342.
（收稿日期：2011-03-23）
