【www.zhangdahai.com--入党自传】
【摘要】 根据文献，对近年来国内外降血脂的实验方法作一综述，为降血脂药物的筛选研究提供参考。� 【关键词】高脂血症；胆固醇；降血脂；实验方法
高脂血症是血脂代谢异常所致。随着人们生活水平的提高，高脂血症成为人类健康“隐形的杀手”，因血脂过高诱发的动脉粥样硬化、冠心病、心肌梗死等心脑血管疾病已成为全球人类健康“第一杀手”[1]。�
近年来，降血脂药物的研究备受学术界关注，国内外学者对降血脂药物的作用途径、作用机理及筛选方法进行了广泛探讨。本文简要概述近年来降血脂的实验方法研究进展。�
1 体外实验方法�
1．1 分子水平 胆固醇是动物机体不可或缺的重要类脂分子，但过多的胆固醇会引起动脉硬化，已成为导致人类心血管疾病的重要因子之一。胆固醇的生物合成可分为3个阶段：甲羟戊酸的合成；鲨烯的合成；27C胆固醇的合成。其中参与第一阶段合成的HMG-CoA还原酶是胆固醇生物合成的限速酶[2]。通过抑制HMG-CoA还原酶的活性，可以减少内源性胆固醇的生成，从而起到降血脂作用。�
分光光度法：李鹏等[3]研究了血脂康与洛伐他汀、辛伐他汀对HMG-CoA还原酶抑制作用的比较，从猪肝中提取HMG-CoA还原酶，以NADPH、Cysteamine为底物，HMG-CoA还原酶为催化剂，通过监测由于NADPH的氧化而使340 nm吸收的下降率来测定可溶性酶的活性，测活体系(1 ml)：70 mM磷酸缓冲液，pH 6．5，2 mM EDTA，2 mM Cysteamine，0．06%BSA，0．25 mM NADPH，抑制剂浓度0~200 μg/ml，酶制品50 μL。这种分析方法快速，不必分离底物与产物，以Cysteamine代替昂贵的HMG-CoA可以极大地节约成本。但由于背景反应明显,且有光散射性，故只适用于测定可溶性还原酶活性,而不适用于微粒体。作者认为采用高效液相色谱法在340 nm对NADPH进行分离测定，结果应该更加准确可靠，且成本低，可以大规模筛选，但目前尚未见相关报道。�
薄层层析法：胡海峰等[4]建立了体外酶反应系统，以HMG-CoA还原酶抑制剂美伐他汀为阳性对照，使用TLC分析胆固醇合成量的多少，筛选从土壤中分离的真菌次级代谢产物。薄层层析法可有效地将底物与产物分离，是一种常用方法。其它分离方法，如纸层析法和柱层析法，也可达到同样的目的。�
同位素掺入法：用鼠肝微粒体或胞浆酶作为粗酶制剂，在反应体系中加入同位素标记的合成前体如［��14�C］-乙酸，或D，L-［��14�C］HMG-CoA，或D，L［�14�C］-甲羟戊酸作为底物，反应后测定形成的固醇中同位素的掺入率，样品抑制固醇脂质合成能力可以通过与对照组数据对比求得[5]。该方法简便，可以省略分离步骤，且灵敏度高，定位定量准确，但对实验人员要求较高。�
最近，我国学者发现调控胆固醇代谢新机制：加速胆固醇合成代谢关键酶-羟甲基戊二酰辅酶A还原酶的降解，可以增强细胞对低密度脂蛋白的吸收，降低血液胆固醇水平[6]。这一重要发现为寻找有效的新型降胆固醇药物提供了靶点和理论基础。�
1．2 细胞水平 细胞内胆固醇的流出对维持细胞胆固醇平衡、促进胆固醇逆转运及抗动脉粥样硬化都起着非常重要的作用[7]。�
张露等[8]研究了银杏叶提取物GBE50对培养细胞内胆固醇代谢的影响，采用胆固醇氧化酶终点法检测GBE50对培养细胞HepG2、HUVEC、SH-SY5Y总胆固醇含量的影响。结果表明，GBE50可有效降低部分培养细胞内总胆固醇的含量。�
于碧莲等[9]研究了烟酸对分化成熟的3T3-L1脂肪细胞胆固醇流出的影响，3T3-L1细胞促分化成熟后，给予不同浓度的烟酸干预24 h后，收集细胞，采用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出。结果表明，烟酸可加速细胞内胆固醇流出，降低细胞内胆固醇含量。�
匡双玉等[10]以血管平滑肌细胞源性荷脂细胞为模型，不同浓度姜黄素作用于细胞24 h及同一浓度姜黄素不同时间作用于细胞，高效液相色谱分析法检测细胞内总胆固醇。结果表明，姜黄素可降低血管平滑肌细胞源性荷脂细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量，且这种作用跟SREBP-Ⅰ蛋白的表达上调有一定关系。�
2 体内实验方法�
2．1 高脂乳剂及饲料模型 万丽等[11]研究了脂肪乳剂的最佳配制(配方：20 g 猪油，10 g 胆固醇，1 g 丙硫氧嘧啶，吐温-80 20 ml，丙二醇 20 ml，10%去氧胆酸钠水溶液 20 ml，加蒸馏水至100 ml)，建立小鼠高脂血症模型，用酶比色法测定模型组与正常组血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)。结果，模型组与正常组TC、TG差异有统计学意义。表明，该方法切实可行。�
刘全亮等[12]饲喂小鼠高脂饲料(配方：77．5%基础饲料，2%胆固醇，10%猪油，10%蛋黄粉，0．5%去氧胆酸钠)，建立小鼠高脂血症模型，分别给予含等量总黄酮的不同纯度的山楂叶总黄酮样品，测定小鼠血清TC、TG值。结果表明，不同纯度的山楂叶总黄酮样品均有明显降低高脂血症小鼠TC和TG的作用。�
高脂乳剂及饲料模型中报道的造模时间相差较大，可能原因是两者的配方差异较大及灌胃方式不同所致。根据作者的研究情况，小鼠造模时间相对较长，不易成功；而兔造模时间相对较短，易成功。可能原因是小鼠的自我调节能力相对较强，被吸收的胆固醇在体内可以较快的进行代谢、转运。�
2．2 蛋黄乳液模型 刘凯等[13]进行了大鼠高胆固醇血症快速造型法初筛降脂中草药的研究，大鼠腹腔注射75%蛋黄乳液(新鲜鸡蛋，取蛋黄用消毒生理盐水配成75%乳液)，24 h血清TC达到峰值，即复制出高胆固血症模型。大槐合剂组各鼠TC值，与造模组比较差异有统计学意义，与传统造型方法所得到的结果相同。�
李亚红等[14]研究了丹皮酚、山楂黄酮不同剂量配伍对高脂血症小鼠血清TC的影响，采用小鼠腹腔注射75%蛋黄乳液造模，用终点法试剂盒测定血清TC含量。结果表明，丹皮酚与山楂黄酮以2:1的比例配伍具有明显的降低血清TC作用。�
杨晓泉等[15]采用75%蛋黄乳诱导小鼠高胆固醇血症，研究柚皮中黄酮化合物对小鼠血脂的影响。结果，柚皮黄酮化合物能显著降低小鼠血清的TC、TG和LDL-C的浓度，并提高HDL-C浓度。�
蛋黄乳液模型具有操作简便、快速，且造模周期短、易成功的特点。腹腔中的腹膜表面积大，密布血管和淋巴管，吸收能力特强，血清胆固醇的升高可能是由于外源性胆固醇的迅速吸收所致。�
2．3 其它模型 其它常用的降血脂动物模型还有Triton WR-1339(表面活性剂)尾静脉注射法[5]。从尾静脉注射Triton WR-1339盐水溶液给大鼠，注射后立即停止喂食，并持续饥饿，被检测的大鼠在注射Triton后分几次给药，在注射Triton 24 h后取肝和血浆测总胆固酵和三酰甘油，用于对评价样品降血脂的效果。�
影像学研究[16]也可揭示药物在延缓和逆转颈动脉粥样硬化病变进展方面的疗效。主要是通过超声检测颈动脉内膜中层厚度(inteima-media thickness，IMT)来判断药物疗效，该方法越来越受到人们的重视。�
3 结语�
高脂血症引发的心脑血管类疾病是危害人类健康的三大疾病之一，寻找有效、安全的降脂药物成为当前研究的热点，降血脂实验方法的发展为药物的筛选提供了新的思路，拓展了研究领域。降血脂药物的筛选具有重大的现实意义与广泛的应用前景，本文简要介绍的国内外资料具有一定的参考价值。�
参考文献
［1］ 仲崇山．高血脂类疾病成健康第一“杀手”．中外健康文摘，2008，5(6)：79．�
［2］ 周顺伍．动物生物化学．中国农业出版社，1999：137-141．�
［3］ 李鹏，陈兰英．血脂康与洛伐他汀、辛伐他汀对HMG-CoA还原酶抑制作用的比较．中华医学信息导报，2001，16(3)：22-23．�
［4］ 胡海峰，朱宝泉，龚炳永．生物活性物质的筛选与新药研究．国外医药：抗生素分册，1998，19(6)：401-406．�
［5］ 张致平．微生物药物学．化学工业出版社，2003：474．�
［6］ 我国学者发现调控胆固醇代谢新机制．糖尿病之友，2007，12：24．�
［7］ 杨薪，全智华．细胞内胆固醇流出的不同途径及在胆固醇逆转运过程中的相对重要性．美国中华临床医学杂志，2005，7(2)：164-166．�
［8］ 张露，谢作权，宋怀光，等．银杏叶提取物GBE50对培养细胞内胆固醇代谢的影响．中国药理学通报，2008，24(3)：313-317．�
［9］ 于碧莲，赵水平，谢湘竹，等．烟酸对3T3-L1脂肪细胞胆固醇流出的影响．中国动脉硬化杂志，2007，15(4)：289-292．�
［10］ 匡双玉，庹勤慧，朱炳阳，等．姜黄素对血管平滑肌细胞源性荷脂细胞胆固醇代谢及SREBP-Ⅰ表达的影．南华大学学报：医学版，2006，34(3)：317-319,323．�
［11］ 万丽，张加雄，陈芳用，等．脂肪乳剂建立小鼠高脂血症模型．成都中医药大学学报，2004，27(3)：36．�
［12］ 刘全亮，杨中林．不同纯度山楂叶总黄酮降血脂作用的比较研究．海峡药学，2008，20(2)：23-25．�
［13］ 刘凯，李传富．大鼠高胆固醇血症快速造型法初筛降脂中草药．徐州医学院学报，1990，10(4)：260-262．�
［14］ 李亚红，王雨艨，刘雪艳，等．丹皮酚与山楂黄酮优化配伍降低胆固醇作用研究．安徽医药，2007，11(10)：876-878．�
［15］ 杨晓泉，张海德，李琳．柚皮黄酮类抗氧化物质的纯化及其降血脂作用研究．营养学报，2004，26(5)：378-381．�
［16］ John J.P.Kastelein MD，PhD，Philip T.Sager MD，et al．Comparison of ezetimibe plus simvastatin versus simvastatin monotherapy on atherosclerosis
progression in familial hypercholesterolemia:Design and rationale of the Ezetimibe and Simvastatin in Hypercholesterolemia Enhances
Atherosclerosis Regression(ENHANCE)trial．American Heart Journal，2005，149(2)：234-239．
