【www.zhangdahai.com--征文稿】
摘要：目的：建立高效液相色谱法测定白族药西归中阿魏酸的含量。方法：色谱柱为Agilent ZORBA SB-C18(4.6×150mm，5μm)，流动相为甲醇：0.1％磷酸水溶液(30:70)，流速为1.0ml／min，检测波长为320nm，柱温为30℃。结果：阿魏酸在0.0202～0.202ug范围内线性关系良好，回归方程为A=3089.3C+3.8794(r=0.9999)，加样平均回收率为99.66％，RSD为1.06％。结论：本法操作简便、准确、重现性好。
关键词：高效液相色谱法；西归；阿魏酸
中图分类号；R927.2 文献标识码：A
文章编号：1007-2349(2007)12-0029-02
西归(seselopsis)是伞形科属植物西藏凹乳芹(Vicatiathibetica deBoiss)的根，凹乳芹属植物全球约5种，产于印度、巴基斯坦、尼泊尔和中国，在中国主要分布于云南西北部、四川西部及西藏等地，在云南大理有少量栽培。在滇西北及川西，民间用它作中药当归的代用品，称为西归(大理)、独脚当归(马尔康)。据研究报道西归中化学成分有阿魏酸、伞形花内酯、佛手柑内酯、芹菜素、胡萝卜苷等，通过动物实验证明西归与人参一样具有明显抗疲劳、抗缺氧和耐热作用，具有较高的开发价值。西归中有关成分的含量测定未见报道，本实验采用高效液相色谱法对西归中阿魏酸的含量进行测定，为进一步建立西归药材的质量标准奠定基础。
1 仪器与试剂
Agilent 1100高效液相色谱仪，包括G1315A／B DAD检测器，G1313A ALS自动进样器，Agilent 1100色谱工作站(美国安捷伦科技有限公司)；梅特勒电子天平AE240(瑞士)；SZ-97自动三重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)；DZKW-4水浴锅(上海科析实验仪器厂)；甲醇(色谱纯)、磷酸(分析纯)、水(重蒸馏纯净水)、阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所)、西归直接从产地收集，并由大理学院药学院生药学教研室马晓匡教授鉴定。
2 方法与结果
2.1色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBASB―C18(4.6×150mm，5μm)，流动相：甲醇-0.1％磷酸水溶液(体积比为30:70)，流速：1.0ml／min，柱温：30℃，检测波长：320nm.进样量:10ul。
2.2对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的阿魏酸对照品5.05mg。置50ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，作为储备液。
2.3提取溶剂的选择 精密称取5份样品，每份约1g，分别精密加入甲醇、乙醇、乙酸乙酯、石油醚、乙醚10ml，称重，超声提取30min，冷却补重，按2.1项条件进行测定，结果见表1。
从上表可以看出甲醇提取率最高，故采用甲醇。
2.4提取方法选择 根据2.3项的结果采用甲醇作提取溶剂，称取样品3份，每份约1g，分别用回流提取、超声提取、索氏提取进行考察，结果见表2。
从上表可以看出回流提取效果最佳，故采用回流提取法。2.5提取时间的选择根据2.3的结果采用甲醇作提取溶剂，称取样品5份，每份约1g，用回流提取法提取1h、1.5h、2h、2.5h、3h，结果见表3。
从上表可以看出2h后，提取率不再发生改变，所以采用2h提取西归中的阿魏酸比较合适。
2.6供试品溶液的制备 精密称取研磨成80～100目的西归试样1g，于100ml磨口烧瓶中，精密加入甲醇10ml，加热回流2h，放冷至室温，甲醇补重，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤.即为供试品溶液。
2.7线性关系的考察 取2.2项中制备好的阿魏酸对照品储备液2ml于10ml容量瓶中，用甲醇稀释并定容，即得质量浓度为0.0202mg／ml的对照品溶液。按2.1项色谱实验条件.取0.0202mg／ml的对照品溶液，2、4、8、10、14、16、20u1分别进3次，测定阿魏酸的峰面积值，以进样量(ug)为横坐标，色谱峰峰面积为纵坐标作图，得回归方程：y=3069.3X+3.8794，r=0.9999，结果表明进样量在0.0404～0.404ug范围之间线性关系良好。
2.8精密度试验和稳定性试验 精密吸取阿魏酸对照品溶液(0.0202mg／m1)，按选择的色谱条件连续进样6次，其峰面积的RSD为0.31％，表明仪器精密度较好。取同一样品液，每隔1h进样1次，每次10ul，测定峰面积，结果表明样品液在6h内稳定(n=6)，阿魏酸峰面积的RSD为1.63％。
2.9重现性试验 精密称取烘干至恒重的西归粉末(100目)5份，每份1g。按“供试品溶液的制备”进行平行提取，在选定色谱条件下测定阿魏酸的含量，RSD为1.80％，分析结果表明重现性较好。
2.10回收率试验 精密称取已知含量的西归粉末(100目)5份，分别精密加入一定量的阿魏酸储备液，照2.5项下方法操作，进行回收率测定，结果见表4。
2.11样品的测定 取六批样品制备成供试液，按上述色谱条件进行分析，按外标法计算阿魏酸的含量。西归中阿魏酸含量为124.58ug／g(n=2)。西归与阿魏酸对照品的HPLC色谱图见图1。
3 讨论
有关西归的研究报道很少，其化学成分的含量测定均未见报道。本实验通过提取溶剂、提取方法、提取时间的选择，确立西归中阿魏酸的最佳提取条件为10倍量甲醇回流提取2h。
由于西归中阿魏酸、芹菜素等都含有酚羟基，具有一定酸性，易电离，参照有关文献，流动相中水相采用0.1％的磷酸水溶液，可以减少拖尾，改善峰形，且分离效果好。本试验曾用乙腈：水(0.1％磷酸)15:85进行测定，经试验，以甲醇：水(0.1％磷酸)30:70为流动相时分离效果最佳。
实验结果表明，该方法可以用于西归药材中阿魏酸的含量检测和质量标准的控制，并且具有操作简便、灵敏、准确等特点。
