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【摘要】目的建立清肺饮颗粒中绿原酸的含量测定方法。方法采用薄层扫描法。结果绿原酸在0�24~2�01 μg范围内线性关系良好。平均回收率为101�09%，RSD为1�69%。结论本方法准确、灵敏、可靠，可有效地用于清肺饮颗粒的质量监控。
【关键词】清肺饮颗粒；绿原酸；薄层扫描法
Determination of chlorogenic acid in Qingfeiyin Keli of Chinese MedicineYANG Zhi�hua, CHEN Yi�hua, HONG Mei�hua� Shantou Hospital Of Skin disease prevention and cure,Guangdong Shantou 515041,China
【Abstract】ObjectiveTo establish a method to determine the content of chlorogenic acid in Qingfeiyin Keli� MethodsTCL�Scanning used� ResultsA good linear range of chlorogenic acid was shown at the concentration from 0�24~2�01 μg� The average recovery was 101�09% and the RSD was 1�69%� ConclusionThe method was accurate、sensitive and credible，It can be effectually applied to the quality control of chlorogenic acid in Qingfeiyin Keli.
【Key words】Qingfeiyin Keli；Chlorogenic acid；TCL�Scanning
作者单位：515041广东省汕头市皮肤性病防治院(杨志华)；广东省汕头市中医医院(陈毅华)；广东省汕尾市药品检验所(洪美华)清肺饮颗粒是本医院的自制中药制剂，该处方由黄芩、银花、连翘、紫花地丁、桔梗、枇杷叶等药物组成，具有清热泻火、凉血解毒、消痰止咳的功效。主要用于实热火毒型急性咽喉炎，多见口腔溃烂、口舌生疮；也用于肺、胃热盛型的痤疮，脂溢性皮炎等皮肤病的治疗。本制剂在保持中医用药理论的前提下，结合现代研究成果将其制成疗效可靠、质量稳定、携带服用方便的口服液。该制剂中成分复杂，绿原酸为主要成分之一，为控制制剂的内在质量，根据其所含化学成分及性质，查阅相关文献［1~5］，本文采用薄层扫描法测定制剂中绿原酸的含量，为制剂的质量保证奠定了基础。
1仪器与材料
1�1仪器CS�9301PC型双波长薄层色谱扫描仪(带FDU�3电脑显示及DR�13数据处理机，日本岛津)；高效硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂，20101015)；定量毛细管(美国Drummond Scientific Co�)；薄层板自动涂布器(重庆贝尔�)；BP211 d电子分析天平(Sartorius�德国)。
1�2材料清肺饮颗粒及所用药材均由本医院制剂室提供，绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供；所用试剂均为AR级。
2方法与结果
2�1薄层层析与扫描条件的选择硅胶G层析板，于105℃活化约1 h，放入干燥器中备用；展开剂：醋酸丁酯�甲酸�水(14∶5∶5)的上层溶液；λs=325 nm，λR=370 nm。狭缝为1�2 mm×1�2 mm；SX=3，灵敏度2；双波长反射锯齿扫描。
2�2对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品2�5 mg，加甲醇使溶解，定容至5 ml摇匀，制成对照品溶液。
2�3供试品溶液的制备量取本口服溶液10 ml，加于D101大孔吸附树脂柱上，用50 ml水洗脱，弃取水洗液，再用20%乙醇30 ml，收集洗脱液，将20%乙醇液蒸干，残渣加甲醇适量溶解并过滤，滤液加甲醇定容至5 ml，制成供试品溶液。
2�4阴性对照溶液的制备按处方比例，取缺金银花的其他各味药材适量，按制备工艺和供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。
2�5干扰性试验吸取供试品溶液、阴性对照溶液各2 μl，对照品溶液0�5 μl，分别点于同一硅胶G层析板上，照上述色谱条件扫描。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同吸收峰，阴性无干扰(结果见图1)。
1~3、供试品;4、绿原酸对照品;5、阴性对照
2�6线性关系精密吸取对照品溶液0�5、1、2、3、4 μl，分别点于同一薄层板上，展开，定位，按拟定条件进行测定。以点样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得回归方程：Y=21073�65X�7401�95，r=0�9982。结果表明绿原酸点样量在0�24 μg~2�06 μg范围内呈现良好的线性关系。
2�7精密度试验精密吸取同一样品(批号20110309)溶液各0�5 μl，点于同一硅胶G薄层板上共5个点，同法展开后测定，RSD为3�19%(n=5)。
2�8稳定性试验取供试品溶液按上述条件点样，展开，定位，每隔30 min扫描测定1次。结果表明，绿原酸斑点在2 h内稳定，RSD为1�22%。
2�9重复性试验取批号20110309的样品6份，分别按含量测定方法测定，平均含量为1�691 mg/ml，RSD为2�52%,表明本方法重现性良好。
2�10加样回收率试验采用加样回收法，精密吸取已知含量的清肺饮颗粒样品5份，分别加入一定量的绿原酸对照品，按上述方法制备样品溶液。吸取1 μl点样，按上述色谱条件测定绿原酸的含量，结果表明，加样回收率为101�09%,RSD=1�69%。
2�11样品含量测定分别精密吸取不同批号的清肺饮颗粒各10 ml按供试品溶液制法制备，精密吸取供试品溶液1 μl、对照品溶液0�5 μl与4 μl分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，依法展开测定，共测定样品3次，结果见表1。
表1样品含量测定
项目样品批号201103092011031720110325123123123含量(mg/ml)1�6561�7511�6031�8231�8121�7761�7771�7991�801平均含量(mg/ml)1�6701�8041�792RSD(%)4�41�40�743讨论
3�1本文章采用薄层扫描法对金银花中绿原酸的含量进行测定，在选择薄层层析条件时进行比较，醋酸丁酯∶甲酸∶水(14∶5∶5)的上层溶液，正丁醇∶冰醋酸∶水(4∶1∶2)和氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸(4∶4∶2)。经实验选用醋酸丁酯∶甲酸∶水(14∶5∶5)的上层溶液为展开剂能达到较好分离效果，斑点集中。
3�2绿原酸含量测定试验中，采用通过大孔树脂排除干扰时，还应注意选用洗脱液乙醇的比例，当分别用水、10%以下浓度的乙醇液洗脱时，除去杂质，不会造成绿原酸损失。选用20%及以上乙醇液经检验含有绿原酸，故选用水及10%乙醇洗脱杂质，收集20%乙醇洗脱液备用。
3�3本文为了保证制剂的质量，对不同产地的金银花药材中绿原酸的含量进行测定，结果表明不同产地的金银花绿原酸的含量有较大差别，其中河南金银花绿原酸的含量最高，所以本方规定制剂所用金银花应为河南产“蜜银花”。
3�4金银花为方剂中主药，绿原酸为金银花的主要活性成分，故选择绿原酸作为控制本品质量的指标成分。通过上述研究，建立清肺饮颗粒的质量标准，同时用于清肺饮颗粒的工艺筛选，稳定性试验，以及对原药材的质量控制，为全面控制制剂质量提供了理想的方法。
参考文献
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