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[摘要] 目的 将射频能量应用于正常家犬前交叉韧带(ACL),分析术后6周和12周的组织学变化以及固定对它们的影响。方法 将24只成年家犬,随机分为A、B两组。A组射频处理ACL的中间段,B组处理ACL的两端部。每只家犬双后肢进行固定和非固定的对比。于6周、12周行血管免疫组化染色。结果 6周时和12周时,两端紧缩固定组ACL血管密度高于中间段紧缩固定组,12周时非固定组ACL全部断裂。结论 紧缩ACL前半部分的上下端效果较好,射频处毛细血管从滑膜发生并向深层生长。ACL射频术后有必要进行外固定制动。
[关键词] 动物实验; 前交叉韧带; 射频; 组织紧缩; 组织学检查; 制动; 血管化
[中图分类号] R873 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2009)23-05-03
Revascularization Study of Anterior Cruciate Ligament after Radiofrequency Shrinkage in a Canine Model
MA Wenpu ZHAO Jianbin HA Xin GAO Youjuan YUAN Zhenfeng YUAN Xin
Orthopedic Surgery,People’s Hospital of Liaocheng City of Shandong Province 252000,China
[Abstract] ObjectiveTo treat the normal anterior cruciate ligament(ACL) with radiofrequency shrinkage,and then analyze the histologic changes and the impact of immobilization at Weeks 6 and 12 after initial treatment. MethodsTwenty-four skeletally mature canis familiaris were divided into A and B groups randomly. The radiofrequency shrinkage technique was applied in midportion of the ACLs in Group A and in the amph-portions of the ACLs in Group B. We carried out a contrast between the immobility and the non-immobility in the two posterior limbs of each dog. At Weeks 6 and 12 after that,the capillary number was counted in normal ACLs and treated ACLs after FⅧ immunohistochemical histologic examination in every portion. ResultsAt Week 6,the vascularity in amph-portions immobilized groups was higher than that in immobilized midportion group. At Week 12,all the free ACLs in non-immobilized groups ruptured. ConclusionIt may be a better method to shrink the amph-portions of the front portion in the elongated ACL radiofrequency-treatment than to shrink the midportion. The capillary vessels originate from the synovial envelope and invade the radiofrequency-treated parts from the surface toward the deep portion. A period of immobilization is necessary after operation.
[Key Words]Animal study; Aterior cruciate ligament; Radiofrequency energy; Soft-tissue shrinkage; Histological examination; Immobilization; Revascularization
前交叉韧带(ACL)松弛是运动损伤中的常见疾病,20世纪90年代及其以前主要以保守治疗为主,如肌肉锻炼、支具保护及限制运动水平等,但效果均不确切[1]。射频技术开始被应用到肩关节不稳的治疗后在治疗ACL松弛方面取得了较好的效果[2,3],但是也出现了一些并发症[4]。关于ACL射频紧缩术的基础研究较少,而且多数集中在射频术后即时的生物力学和组织学的改变方面。射频术后的组织学随时间变化方面的动物实验也较少。我们认为,如果想进一步在ACL外科开展射频技术,必须由基础研究提供足够的动物实验结果方面的支持。
1 材料与方法
1.1 实验动物与分组
25只成年家犬,平均体重(16.5±2.2)kg,年龄(4.1±0.7)岁,家犬的体重相近,行走步态正常,关节活动自然。X线摄片确定动物骨骺已经闭合。在实验家犬中随机选出24只并随机分为A、B两组。A组射频处理ACL的中间段,B组射频处理ACL的两端部。A组的每只家犬的一条后肢随机分入A1组,手术后进行固定处理;另外一条分入A2组,不做固定处理。B组的每只家犬的一条后肢随机分入B1组,手术后进行固定处理;另外一条分入B2组,不做固定处理。另取家犬的正常ACL 6条作为射频实验的对照组,和手术后的ACL一同进行组织学检查。
1.2 手术操作
术前半小时肌内注射安定5mg、速眠新2mL后,双后肢常规消毒铺无菌巾单,取髌前外侧入路,暴露ACL。术中使用直径2.5mm射频汽化仪时,设定射频汽化仪为25W。紧缩方式:射频电极从一个端开始以2.5mm/s速度开始向另一端移动,韧带每一部分均经紧缩,无遗漏,不重叠。按照实验设计紧缩处理韧带的中1/3或者ACL的两端各1/3,手术部位的前后方向占韧带周径50%～60%。紧缩完成用爱昔康缝线逐层缝合关节囊及皮肤,包扎伤口,随机将一侧膝关节用石膏固定于家犬的自然屈膝位置,另一侧则无任何外固定。固定侧三个月后取下石膏固定。每日观察实验家犬的的行走步态是否有异常。正常的步态应该是家犬行走和跳跃时没有肉眼可见的异常。当家犬出现跛行或者一侧下肢向上提起无法负重时认做异常步态。按照实验计划的时间于术后6周、12周时取出A、B组实验动物各6条ACL。
1.3 组织学分析
横切片行兔抗FⅧ(武汉博士德公司)的免疫组化染色,采用不含一抗的PBS溶液代替一抗作为阴性对照。阳性对照采用已知阳性的家犬的子宫内膜标本。
微血管计数:每个标本有两个横切片进行观察计数。标出横切片的中心,将中心与邻接滑膜的韧带边缘之间的连线分为三部分,这样每个横切片被分为滑膜下部(邻接滑膜层)、中间部、核心部三部分。滑膜下部、中间部各计数5个200倍镜视野,核心部计数3个高倍视野。将每区所有高倍镜视野中的计数平均,然后按面积(mm2)标准化取值代表韧带横切片的微血管密度。由三位不知临床资料的高年资病理医师采用背对背方法分别进行,取计数的平均值。
1.4 统计学处理
实验数据使用SPSS 11.0处理,分6周和12周利用析因分析对固定与否以及射频处理韧带两端或中间进行检验,同时检验两者是否有交互效应。利用配对t检验及独立样本的t检验对比分组间的血管密度的差别。当P [4] Perry JJ,Higgins LD. Anterior and posterior cruciate ligament rupture after thermal treatment[J]. Arthroscopy,2000,16:732-736.
[5] Carter TR,Bailie DS,Edinger S. Radiofrequency electrothermal shrinkage of the anterior cruciate ligament[J]. Am J Sports Med,2002,30:221-226.
[6] Lopez MJ,Markel MD. Anterior cruciate ligament rupture after thermal treatment in a canine model[J]. Am J Sports Med,2003,31:164-167.
[7] Hsiao-Li Ma,Wei-Jau Jiae,Chang-Hung Huang,et al. Thermal effects after anterior cruciate ligament shrinkage using radiofrequency technology: a porcine cadaver study[J]. Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc,2005, 13:619-624.
[8] Benedetto KP,Klima G. Effect of the Hoffa fat pad on revascularization of the ruptured anterior cruciate ligament:A histologic study of the rabbit mode[J]. Z Orthop Ihre Grenzgeb,1986,24:262-265.
[9] Unterhauser,Frank NMD. Endoligamentous revascularization of an anterior cruciate ligament graft[J]. Clin Orthop Relat Res,2003,414:276-288.
[10] Sven Scheffler,Heike Chwastek,Veronika Schonfelder,et al. The impact of radiofrequency shrinkage on the mechanical and histologic properties of the elongated anterior cruciate ligament in a sheep model[J]. Arthroscopy,2005,21:923-933.
(收稿日期:2009-03-16)
