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【摘要】目的:利用,以穗花杉双黄酮为对照品,测定十三批次的竹柏和竹柏叶中穗花杉双黄酮的含量。方法:高效液相色谱法,以Agilent Hypersil ODS C18柱(4.6mm*150mm,5μm);乙腈-0.05%磷酸水液为流动相,梯度洗脱;检测波长为310nm。流速1.0ml/min,柱温20℃。结果:竹柏叶中穗花杉双黄酮含量在0.1618mg/g～0.5721mg/g之间,显著高于长叶竹柏叶(0.039mg/g～0.1304mg/g)。结论:本法结果准确,操作方便,可作为竹柏和长叶竹柏叶质量控制方法的参考;穗花杉双黄酮在两者中含量差异明显,可作为两者理化鉴别参考。
【关键词】竹柏;长叶竹柏;穗花杉双黄酮;HPLC;含量测定
罗汉松科竹柏Podocarpus nagi (Thun. ) Zoll et Mor和长叶竹柏Podocarpus?fleuryi?Hickle具有较强的抗肿瘤作用,均含有穗花杉双黄酮,且含量较高[1]。为了控制竹柏和长叶竹柏的内在质量,参考文献[2、3]的方法对其共有的特征性成分穗花杉双黄酮进行含量测定研究。
1材料与仪器
1.1仪器Agilcnt 1100型高效液相色谱仪(美国惠普公司);BS124S电子分析天平(德国Sartorius); BP211电子分析天平(德国Sartorius);超声清洗器(北京医疗设备二厂)。
1.2试药乙腈为色谱纯,磷酸、甲醇等均为分析纯,水为三蒸水。穗花杉双黄酮对照品由广东省中医研究所提供,纯度为99.8%。
1.3样品竹柏叶和长叶竹柏叶均采集于广东省广州市,原植物经广东省中药研究所蔡岳文副主任中药师鉴定,分别为罗汉松科竹柏Podocarpus nagi和长叶竹柏Podocarpus?fleuryi。经水分测定,鲜品竹柏叶含水量约33.7%,鲜品长叶竹柏叶含水量约53.4%。
2方法与结果
2.1方法
2.1.1对照品溶液的制备精密称取穗花杉双黄酮对照品,加甲醇溶解,制成0.013mg/ml的对照品溶液。
2.1.2供试品溶液的制备分别取药材样品,剪碎,取0.5g,精密称定,加50%乙醇10ml,称重,超声提取35分钟,取出,放冷,称重,补足损失的重量,摇匀,滤过,滤液做为供试品溶液。
2.1.3含量测定Agilent Hypersil ODSC18柱(4.6mm*150mm,5μm);乙腈-0.05%磷酸水液为流动相,梯度洗脱;检测波长为310nm。流速1.0ml/min,柱温20℃。理论塔板数按穗花杉双黄酮计应不低于5000。
2.1.4线性范围的考察分别精密吸取对照品溶液1、2、5、8、10μl进行色谱测定,按上述色谱条件测定峰面积,以进样量(X,μg)对峰面积(Y , A)进行线性回归,得标准曲线。结果显示,进样量在0.013～0.130μg范围呈线性关系,回归方程为y = 3273.1x + 1.2429,相关系数R2= 0.9998。
2.1.5精密度试验 精密吸取样品溶液10μl,按上述色谱条件,重复测定6次,测得峰面积的积分值,计算精密度,其RSD(%)为0.29。
2.1.5稳定性试验 取同一供试品溶液10μl按上述色谱条件测定0、0.5、2.5、5、20小时,测得峰面积并计算含量,结果显示20小时内稳定,RSD
