【www.zhangdahai.com--学生个人工作总结】
【摘要】 目的 研究单唾液四己糖神经节苷脂(Monosialoganglioside,GM1)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经功能缺失评分及Caspase-3表达的影响,探讨其神经保护作用机制。方法 42只Wistar雄性大鼠随机分为三组,即神经节苷脂GM1治疗组,脑缺血再灌注损伤模型组,正常对照组。采用改良线栓法建立右侧大脑中动脉缺血再灌注模型。治疗组缺血即刻腹腔注射30 mg/kg神经节苷脂,模型组注射等剂量生理盐水,运用Zea-Longa法进行神经病学评分,用光镜观察脑组织形态学改变,用免疫组化法检测Caspase-3。结果 与模型组相比,GM1治疗组脑组织变性坏死程度轻,神经功能缺损评分显著减少, Caspase-3阳性细胞减少(P 1.3 仪器 OLYMPUS BX51F32HO1型光学显微镜(日本电子);LKB-NOVA型超薄切片机(瑞典LKB)。
1.4 动物分组、模型建立及给药方法 Wistar大鼠42只随机分为神经节苷脂GM1治疗组、脑缺血再灌注损伤模型组、正常对照组(以下相应称为GM1组、模型组、正常组),14只/组。每组又随机分为再灌注1、24 h 两个时间点,每个时间点7只。采用右侧大脑中动脉线栓法,参照Zea-Longa法[3]并改良,造成大脑局部缺血30 min模型。GM1组于缺血即刻腹腔注射GM 130 mg/kg。模型组和正常组大鼠腹腔注射相同剂量生理盐水。
1.5 神经病学评分 参考Longa等[3]评分法:0分:无神经功能缺失症状,活动正常者;1分:不能伸展对侧前爪者;2分:爬行时出现向左转圈者;3 分:行走时身体向偏瘫侧倾倒者;4分:不能自发行走,意识丧失者;5分:死亡。清醒后评分为0分和5分者均被剔除,随机补充。
1.6 取材 各组大鼠分别于再灌注后1、24 h取材,每个时间段组取7只。水合氯醛过量麻醉后,常规经心脏灌注、固定,取脑置于10% 中性甲醛中固定,去除小脑及脑干,做冠状切片,共5个脑片,取第三脑片,依次脱水、透明、浸蜡、包埋,切取5 μm厚组织切片,苏木精-伊红染色,光镜下观察脑组织变化。
1.7 Caspase-3免疫阳性细胞的检测 采用二步法检测,步骤严格按说明书进行。阴性对照用0.01 mol/L PBS代替一抗。Caspase-3阳性细胞呈棕黄色或黄褐色,显微镜下选取每个区域不重复随机10个高倍视野(×400),计数Caspase-3阳性细胞数,求平均值。
1.8 统计学方法 实验结果以(x±s)表示。用SPSS11.5软件分析,多组间比较用单因素方差分析检验,同一时间点两组间比较用Dunnett-t检验,不同时间点的比较用两样本t检验。 P
