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摘 要目的:建立一套更适合于基层艾滋病初筛实验室的室内质控方案。方法:结合质控图法和“即刻法”质控的优点,将其联合应用于室内质控。结果:通过室内质控监控实验操作的一致性以及判断结果的有效性,同时了解各批次试剂盒之间的误差(批间误差)。
关键词即刻法;质控图
随着艾滋病流行形势的日益严峻,艾滋病感染者数量的不断增加,而艾滋病初筛实验室是发现感染者的第一道关口,保证其检测工作质量是很重要的。原则上每一次实验必须使用外部对照质控血清,建立质控图。但对于检测数量较少的艾滋病初筛实验室来说,如果用单一的质控图法,对同一批次的试剂进行连续20次以上的检测难度较大,我们结合了质控图法和“即刻法”质控的优点,创建了一套更适合于基层艾滋病初筛实验室的室内质控方案。
1材料与方法
1.1 仪器
美国宝特Bio-Tek ELX800全自动酶标仪。
1.2 材料
外部对照质控血清,通过向有关机构购买或由实验室制备获得。制备方法:收集HIV抗体阳性和阴性血清,56℃30min灭活,3000r/min离心15min。按一年使用量配制用0.2μm滤膜过滤除菌。按一周实验用量分装、分类、标记、封口,-20℃冻于非自动除霜冰箱中。外部对照血清不可反复冻融,一旦融化后应该存放2～8℃,供一周内使用。
1.3方法
将质控图法和“即刻法”质控结合起来,每一批次试剂的1～20次实验采用“即刻法”质控,第21次实验开始采用质控图法。每次改用新批号试剂盒,应重新制作室内质控框架图。
1.3.1“即刻法”质控
采用“即刻法”质控统计方法,只需在常规条件下对外部质控血清连续测定3次,按以下统计方法计算,如连续测定3次的结果都在控制范围之内,即可对第3次结果进行质控,以保证检验结果的质量。具体计算方法如下:①先将测定值从小到大排列:x1,x2,x3……xn(x1为最小值,xn为最大值);②计算 x 和 s;③计算SI上限值和SI下限值;④将SI上限、SI下限与SI值表(表1)中的数字比较。
当SI上限和SI下限 n3s值时,说明该值已在3s范围之外,属“失控”。 处于“告警”和“失控”状态的数值应舍去,需重新测定该外部质控血清和病人样本。舍去的只是本次失控的数值及同时测定的样本,其他次测定值仍可继续使用。
以同一批次英科新创抗-HIV试剂为例:
在第3次测定后,按“即刻法”计算:
n=3三次S/CO值从小到大排列为:1.9932.0132.033
求出x = 2.013, S = 0.020
计算: SI下限 =(2.033-2.013)/0.020=1.0 SI上限=(2.013-1.993)/0.020=1.0
查SI值表: n=3时, n2s=1.16, n3s=1.15, SI上限和SI下限均小于n2s,表示该三次检测数据在控制范围内。同理,第4次实验SI下限 =1.08,SI下限=1.32;第5次试验SI下限 =1.38,SI下限=1.29,比较SI值表,该五次检测数据均在控制范围内。
当检测的数值超过20次后,不必再使用“即刻法”质控,可以转入常规的质控图质控。
1.3.2质控图法
将“即刻法”测定的20个S/CO值,求出算术平均值 (x )、标准差(s)、变异系数(cv)。
以S/CO值作纵座标(Y轴),每一次(天)试验作横座标(X轴),将x 、x±S、 x±2S、x±3S分别在质控框架图中标示出来。
从第21次起,将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中,实验进入质控状态。
质控图的判断和分析:①如果检验进入质控状态时,质控对照值超出 2s,则本次实验结果不能被接受( 失控 )。②位移:如果几个连续质控对照值 (3～5次) 都落在均值(中心线)的一边则称之为位移,通常表示存在大的变化 ( 失控 )。引起位移的原因有使用新批号的试剂盒、使用新试剂、实验员的更换、孵育温度的改变、仪器 ( 移液器 ) 故障等。③趋势:当几个连续质控对照值(5～7个)几乎按一个方向分布时称之为趋势(失控),通常由参数的缓慢改变引起,如试剂失效和移液器逐渐不准确等。发生漂移和趋势的最常见的原因是试剂(如酶标记物)或对照的失效。④采用S/CO比值制图要比单用OD或A值制图的方法给出更为精确的评估,因为它将每次/每天OD值的浮动考虑在内。从S/CO质控图中可以直观地发现外部对照值的漂移和趋势。
2讨论
本文将“即刻法”和质控图法联合起来应用于抗-HIV ELISA检测的实验室室内质控,克服了基层艾滋病初筛实验室由于检测数量少、试剂盒有效期短,无法用同一批次试剂连续测定20次的缺点,只要测定3次后就可进入质控,第21次后又可运用质控图法进行质控。比起单一的质控图法在基层艾滋病初筛实验室更具可行性,并且同样适用于其它ELISA检测如抗-HAV、HBsAg等免疫实验室的室内质控中。
参考文献
[1] 全国艾滋病检测技术规范.2004年版.北京:中国疾病预防控制中心.
[2] 赵国有、林滢.联合应用即刻法-质控图法进行抗-HIV酶联免疫法检测的室内质控.中国卫生检验杂志.2004.14(5):623.
