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【摘要】目的：考察不同产地乌药有效成分的含量，为乌药的质量标准提供一定的依据。方法：采用HPLC法测定不同产地乌药中乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯及去甲异波尔定的含量。结果：不同产地乌药中乌药内酯的含量在0.3516～1.4403 mg/g之间；乌药醚内酯的含量在0.8724～3.1380 mg/g之间；异乌药内酯的含量在0.5792～1.8281 mg/g之间，去甲异波尔定的含量在2.9488～11.9372 mg/g之间。结论：不同产地的乌药中4种有效成分的含量差异较大。
【关键词】乌药；HPLC；乌药内酯；乌药醚内酯；异乌药内酯；去甲异波尔定
乌药为樟科植物乌药Lindera aggregate (Sims) Kosterm．的干燥块根，具有活血化瘀，行气止痛等功效，主要用于寒凝气滞，胸腹胀痛，气逆喘急，膀胱虚冷等症[1]。主产于浙江、湖南、安徽、广东、广西等地，均系野生，其中以浙江台州、金华为道地药材[2]。乌药中主要含有挥发油、异喹啉类生物碱及呋喃倍半萜三大类成分，共同构成了乌药的化学特征，其中最能体现乌药特征的成分应是呋喃倍半萜及其内酯类成分，包括乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯等成分[3]。药理研究表明，乌药总碱具有抗类风湿关节炎的活性，去甲异波尔定是其中主要成分[4]，2010年版《中国药典》乌药项下除乌药醚内酯含量测定外，也增加了去甲异波尔定的含量测定。文献研究发现，乌药的质量控制指标单一，主要集中在乌药内酯或乌药醚内酯的含量测定上[5,6]。本实验采用高效液相测定不同产区乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯及去甲异波尔定的含量，较《药典》更加全面的检验了乌药中有效成分，为乌药的质量评价提供一定的依据。
1 仪器与试药
1.1仪器
Agilent-1100高效液相色谱仪（DAD检测器、自动进样器、在线脱气、四元泵）、KQ-300VDB型数控超声波清洗器、A4DL型自动纯水蒸馏器、BS210S型电子天平。
1.2试药
乌药内酯对照品购自中国药品生物制品检定所，乌药醚内酯、异乌药内酯等对照品均购自上海顺勃生物工程技术(云南)公司；去甲异波尔定对照品由四川省维克奇生物科技有限公司提供；乌药药材采集于浙江、广西、广东、江苏、河北等地，经广东医学院中药鉴定教研室鉴定为樟科植物乌药Lindera aggregate (Sims) Kosterm．的干燥块根；乙腈、甲醇均为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯净水。
2方法与结果
2.13种呋喃倍半萜类成分含量测定
2.1.1色谱条件
色谱柱：迪马 kromasil C18 (250 mm × 4.6 mm 5 μm) ；流动相甲醇―乙腈―水（35：25：40）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：235 nm。进样量为10 μl。
2.1.2 对照品溶液的制备
分别精密称取乌药内酯对照品1.52 mg，乌药醚内酯对照品2.31 mg，异乌药内酯对照品3.54 mg置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。
2.1.3供试品溶液制备
取乌药粉末（50目）1.0 g，精密称定，置50 mL锥形瓶中，加甲醇50 mL，称重，超声30 min，放至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，过0.45 μm微孔滤膜，即得。
2.1.4 标准曲线的制备
分别精密吸取混合对照品溶液1、2、4、6、8、10 μL，注入液相色谱仪中，测定3种对照品的色谱峰面积。结果乌药内酯的标准曲线为：y = 1287.74x �8.7915（R2=0.9993）；乌药醚内酯的标准曲线为y = 1081.24x 6.7915（R2=0.9995）；异乌药内酯的标准曲线为：y = 1203.19x 0.7412（R2=0.9996）；3种对照品的线性范围分别为：0.0608～0.608 μg；0.0924～0.924 μg；0.1416～1.416 μg。
2.1.5 精密度的考察
精密吸取乌药内酯、乌药醚内酯及异乌药内酯对照品溶液10 μL，按上述色谱条件重复进样5次，测定峰面积积分值，结果乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯的峰面积的RSD(n=5)分别为2.39％，2.08％，1.62%。
2.1.6 稳定性的考察
分别取乌药同一份供试品溶液，按照2.1.3项下的方法进行提取，采用上述液相色谱条件，在0、4、8、16、24 h进样10 μL测定，结果乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯的RSD(n=5)分别为2.47％，2.22％，1.78%。
2.1.7 重复性的考察
取同一批乌药药材样品5份，按2.1.3项下供试品溶液制备方法操作，依上述色谱条件分别进样10 μL，由标准曲线求出其含量，结果乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯峰面积的RSD（n=5）分别为2.14％，2.05％，1.82%。
2.1.8 加样回收率考察
取乌药药材粉末1.0 g，精密称定，按照上述含量测定方法进行含量测定，测定3种对照品的含量。另外取同批药材粉末0.5 g，精密称定，加入3种对照品适量，测定其含量。结果乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯的平均回收率为98.6％，99.2％，99.3%；RSD（n=5）分别为2.44％，2.15％，1.87%。
2.1.9 含量测定
按照上述2.1项下的含量测定方法，对不同产地乌药进行含量测定。结果表明，不同产地乌药3种成分的含量差异较大，其中乌药内酯的含量：0.3516～1.4403 mg/g，以浙江台州的含量最高，广东肇庆的含量最低；乌药醚内酯的含量：0.5792～1.8281 mg/g，以浙江台州的含量最高，广东肇庆含量最低；异乌药内酯的含量：0.8724～3.1380 mg/g，以浙江台州的含量最高，山东的含量最低。结果见表1、图1。
2.2 去甲异波尔定的含量测定
取乌药粉末（50目）0.5 g，精密称定，按照2010年版《中国药典》一部乌药含量测定项下进行含量测定。去甲异波尔定的含量：2.9488～11.9372 mg/g ，以江西的含量最高，广西南宁的含量最低。结果见表1、图2。
表1不同产地乌药中有效成分的含量测定结果（单位：mg/g）
3 讨论
3.1 指标的选择
乌药中主要含有挥发油、异喹啉类生物碱及呋喃倍半萜三大类成分，其中呋喃倍半萜及其内酯类成分，如乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯等均具有一定的药理作用，而去甲异波尔定是乌药的主要抗炎成分。而2010版《药典》中只对乌药醚内酯、去甲异波尔定进行含量检查。因此，本实验采用高效液相色谱法对以上4种成分进行了含量测定，为乌药的质量标准提供一定的参考依据。
3.2 提取条件的选择
实验对提取溶剂乙醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇等进行了比较，结果表明，甲醇提取法中乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯的含量最高，同时考察了冷浸法和超声提取法，结果表明，超声提取法含量较高，并且超声30min后，含量变化不大，因此供试品的制备选择超声提取法，时间为30 min。
3.3 检测波长选择
实验于200-400nm波长下，分别对乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯等对照品进行波长扫描，实验结果表明，210 nm处3种成分均有最大吸收波长，但该波长下杂质峰干扰严重，235 nm处仍有较大吸收，而杂质峰干扰明显减少，因此选择235 nm为检测波长。
3.4含量测定结果表明，不同产地乌药的含量差异较大，4种成分的最大值和最少值之间相差3～4倍，造成了市场上乌药药材内在质量参差不齐，因此应尽快制定或完善乌药饮片的质量控制标准，同时还需对不同产地的栽培条件进行考察，建立乌药的GAP基地，从源头上保证乌药的质量。而实验结果表明，浙江台州产地乌药中4种成分含量均较高，质量最好，作为乌药的道地产区具有一定的科学性。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中国药典2010年版(一部)[S].北京:化学工业出版社,2010,71-72.
[2] 张贵君主编.中药鉴定学[M].北京:科学出版社,2006:91.
[3] 程显隆,魏锋,冯玉飞,等.RP-HPLC法测定乌药中乌药醚内酯和乌药内酯的含量[J].药物分析杂志,2003,23(3):225-227.
[4] 王禅,戴岳, �桂新,等.乌药总生物碱对大鼠佐剂关节炎的影响及其机制研究[J].中国药理与临床,2006,22(3):63-66.
[5] 邓泽宜.HPLC法测定乌药中异乌药内酯的含量[J].中国临床研究,2010,2(9):112-113,115.
[6] 舒佳妮,欧阳荣,周新蓓.HPLC法测定乌药中乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯的含量.中国现代药物应用,2009,3(8):7-8.
作者简介：
张莉， 女 (1979.11-) ， 药师， 研究方向： 药物制剂、医院药学
