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[摘要]目的:应用TO型生物透明剂代替二甲苯进行病理制片。传统的病理制片一直延用甲醛和二甲苯,然而,这些试剂对人体的危害已经引起了人们的关注。引进先进设备,改善环境,加强防护,虽然可以减少污染,但是,这些措施都不能解决根本问题。于是就试用TO型生物透明剂替代二甲苯制片。方法:组织脱水。在全自动封闭式脱水机13个脱水缸中,各加入溶液2500ml,其中,AFⅠ-Ⅱ各40min,95%乙醇Ⅰ～Ⅲ各40min,无水乙醇Ⅰ～Ⅲ各40min,TO型生物透明剂Ⅰ～Ⅱ各40min,石蜡Ⅰ～Ⅳ各40min。透明剂的处理,一种是在室温下进行,一种将TO型生物透明剂加温至36℃。脱水后进行包埋制片。根据制片顺利程度,切片质量,统计出蜡块数,推断出TO型生物透明剂的消耗情况,并及时给予更新。切片脱蜡与透明,脱蜡缸3个,透明缸2个,每缸加TO型生物透明剂400ml,各5～10min。封片,将固体中性树胶溶于TO型生物透明剂中,调好稠度便成为芳香型封片剂。封好的切片放入烤箱数小时后就可供阅片。结果:把其他条件设为最佳状态,对室温和加温制成的蜡块的制片情况进行观察。随机抽查室温下制成的蜡块1114块,其中,116块制片失败(10.41%),998块制片成功(89.59%),加温制成的蜡块1482块,其中,6块制片失败(0.4%),1476块制片成功(99.6%)。结果表明,TO型生物透明剂经加温36℃制成的蜡块可以获得很好效果。蜡块统计数表明,每制成1450个蜡块,TO型生物透明剂的透明效果就要降低,应当更新。TO型生物透明剂在切片脱蜡时,每当充分脱掉1112张腊片,其脱蜡效果就会下降,只有及时更新方可保证质量。切片染色脱水后透明,TO型生物透明剂因为挥发慢,完全可以避免二甲苯因挥发快引起的组织干裂。参照中华医学会临床技术操作规范病理学分册,关于常规石蜡包埋HE染色切片质量的基本标准,抽查切片1265张,甲级片1124张(88.85%),乙级片77张(6.09%),丙级片64张(5.06%)。切片优良率为94.94%,完全可以与使用二甲苯制片质量相蓖美。结论:TO型生物透明剂代替二甲苯效果比较满意。组织脱水透明时,给TO型生物透明剂加温可以取得理想的效果。在切片透明方面效果比较理想。而在封片后必须在烤箱放置一定时间才好阅片。TO型生物透明剂挥发性有轻微的刺激作用,应当设法避免。
[关键词]TO型生物透明剂;病理制片
[中图分类号]R446
[文献标识码]A
[文章编号]1006-1959(2009)11-0262-02
传统的病理制片一直延用甲醛和二甲苯,然而,这些试剂对人体的危害已经引起了人们的关注[1-4]。引进先进设备,改善环境,加强防护,虽然可以减少污染,不过这些措施都不能解决根本问题。于是,一些试图应用其他试剂替代二甲苯制片的文章陆续发表[2-6]。本文谈一点使用TO型生物制片透明剂制片的体会。
1 材料与方法
在小批量试验取得成功的基础上,于2004年开始,用TO型生物透明剂常规制片。TO型生物透明剂,广西岑溪市松香厂研制,以优质松节油为主要原料制成的无色,无毒芳香透明液体,折光率1.4580～1.470,25℃以上能与95%酒精互溶。能溶解石蜡和封固树胶。
1.1 组织脱水,在全自动封闭式脱水机13个脱水缸中分别加入溶液2500ml,其中,AFⅠ-Ⅱ各40min,95%乙醇Ⅰ～Ⅲ各40min,无水乙醇Ⅰ～Ⅲ各40min,TO型生物透明剂Ⅰ～Ⅱ各40min,石蜡Ⅰ～Ⅳ各40min。透明剂的处理,一种是在室温下进行,一种是将TO型生物透明剂加温至36℃。脱水后进行包埋制片。根据切片制顺利程度,统计出蜡块数,推断出透明剂的消耗情况,并及时给予更新。
1.2 切片脱蜡与透明,切片染色前,用TO型生物透明剂Ⅰ～Ⅲ,每缸400ml,脱蜡5～10min。切片染色脱水后用TO型生物透明剂Ⅰ～Ⅱ,每缸400ml,透明5～10min。其他条件不变。统计出切片数,根据切片质量推断出溶剂更新时间,并及时更换。
1.3 封片,将固体中性树胶溶于TO型生物透明剂中,调好稠度便成为芳香型封片剂[2、3]。封好的切片放入烤箱数小时后就可供阅片。
2 结果
2.1 只有经过充分固定、脱水、透明、浸蜡的组织所制成的腊块,才能切出质量上乘的蜡片,才能成功地制出令人满意的优质切片。我们在切片时已经不再使用防脱剂,完全靠蜡片自然牢固地附贴在载玻片上。因此,对蜡块的质量要求更加严格。我们把其他条件设为最佳状态,对
室温和加温制成的蜡块的制片情况进行观察。随机抽查室温下制成的蜡块1114块,其中,116块制片失败(10.41%),998块制片成功(89.59%),加温制成的蜡块1482块,其中,6块制片失败(0.4%),1476块制片成功(99.6%)。结果表明,TO型生物透明剂经加温36℃制成的蜡块可以获得很好效果。因为我们已经设定其他因素都保持在最隹状态,所以,一但发现切片有问题时,就应该想到TO型生物透明剂需要更新,并记录下从上次更换透明剂到当前更换透明剂,这一段时间所制成蜡块数,取几次更换透明剂所制蜡块的均数(大约1450个蜡块)作为更换透明剂的依据。
2.2 TO型生物透明剂能溶解石蜡,实践证明,其溶解强度和溶解速度都不如二甲苯,因此,脱蜡时间要适当长些,三个脱蜡缸,每缸10min可以充分脱蜡,切片统计证实,大约溶解1112张蜡片后,溶解度就趋向保和.组织中有微小蜡点残留,影响染色,必须及时更新。据厂家材料介绍,将TO型生物透明剂加热可以使脱蜡效果更快更好。TO型生物透明剂在切片染色透明方面要比二甲苯更具优越性,它不会像二甲苯那样使组织干裂,因为它挥发速度慢。因此,是比较理想的透明剂。相反,这也是TO型生物透明剂在封片时的一大弱点,不经烤片,封片胶很难干固。
2.3 综合评定,参照中华医学会临床技术操作规范病理学分册,关于常规石蜡包埋HE染切片质量的基本标准,抽查切片1265张,甲级片1124张(88.85%),乙级片77张(6.09%),丙级片64张(5.06%)。切片优良率为94.94%,完全可以与使用二甲苯制片质量相蓖美。
3 讨论
传统的病理制片技术已经很成熟了,但是由于甲醛和二甲苯的污染可能影响人体健康,试图研究代用试剂,这是对传统制片技术的一种挑战。它必须经得起实践和时间的考验。我们用TO型生物透明剂代替二甲苯制片时间不长,仍然是在试验阶段。经过摸索,体会到,在组织脱水过程中,给TO型生物透明剂加温到36℃制成的蜡块,切片时手感非常好,切片容易成带,入水平展,捞片后组织与玻片附贴牢固,不用防脱剂也不必担心掉片。根据中华医学会病理技术操作规范,对切片进行的评定说明,在制片质量比较满意。制片的过程是一系列多因素综合的过程,任何一个环节都可以影响制片质量。现在,我们把各个环节都保持在最佳状态来观察TO型生物透明剂在制片中的效果,结果证实,在质量上是可行的。
存在的问题,TO型生物透明剂是否真的对人体无毒无损害,尚待进一步研究。TO型生物透明剂由松节油制成,它仍然有松节油的芳香味和轻微的刺激性,会不会刺激眼睛和呼吸道粘膜,用TO型生物透明剂制成的封片胶挥发性差,必须在恒温箱中才能干固,消除挥发性刺激性气体。TO型生物透明剂在透明和溶蜡方面都比较温和,必须延长时间或加温才能取得满意效果。
