【www.zhangdahai.com--民主生活会发言】
【摘要】 目的 探讨热休克蛋白70在急性肾损伤的临床价值。方法 选用住院新发急性肾损伤患者为对象，以健康人为对照。动态观察检测急性肾损伤患者 AKI 1期、AKI 2期、AKI 3期及对照组，使用ELISA检血HSP70、尿HSP70、血TNF-α、血IL-1等因子，应用BeckmanDUC28型自动生化分析仪测定血清BUN、Cr。结果 AKI 患者各期血HSP70、尿HSP70、血BUN、血CR显著性高于对照组(P[1-3]，而对肾脏研究方面较少。近几年来，其在急性肾损伤(AKI)中的作用引起特别的重视，热休克蛋白70与肾损伤关系已成为国内外的研究热点。本研究的目的在于通过检测急性肾损伤患者不同时期血液和尿液中HSP��70�水平的动态变化，以及分析其与肾功能、致炎因子的相关性，探讨HSP在急性肾损伤中的肾脏保护作用和机制。�
1 资料与方法�
1.1 对象
选择2008年9月至2011年2月期间，收治于佛山市南海区人民医院患者，住院内期间新发急性肾损伤男性或女性的患者36例，年龄 18~70 岁。设置对照组：(27例)均为健康志愿者，男性或女性，年龄20~65岁。本研究符合医学研究伦理准则(赫尔辛基宣言)。�
1.1.1 入选标准包括 参照2005年9月在阿姆斯特丹举行的急性肾衰竭(ARF)国际研讨会提出的急性肾损伤(AKI)定义(诊断标准)是指由导致肾脏结构或功能变化的损伤引起的肾功能突然(48 h以内)下降，表现为血肌酐(Cr)绝对值增加≥0.3 mg/dl(≥26.4 μmol/L)，或者增加≥50%(达到基线值的1.5 倍)，或者尿量＜ 0.5 ml/(kg・h)，持续超过6 h。并将AKI 分为1、2、3期，分别为急性肾损伤1期(危险期)：血清肌酐升高≥0.3 mg/dL (26.4 μmol/L)或为基线值的1.5~2倍；或者尿量＜0.5 ml/(kg・h)，持续＞6 h。急性肾损伤2期(损伤期)：血清肌酐升高至基线值的2~3倍；或者尿量＜0.5 ml/(kg・h)，持续＞12 h。急性肾损伤3期(衰竭期)：血清肌酐升高至基线值的3倍或在血清肌酐>4 mg/dl(354 μmol/L)基础上急性增加0.5 mg/dL(44 μmol/L)；或者尿量＜0.3 ml/(kg・h)持续＞24 h或无尿持续＞12 h。�
1.1.2 排除标准 ①有慢性肾病病史者。②虽无肾病病史但住院体检发现肾功能异常者。③有糖尿病，红斑狼疮及肾肿瘤病史者。④已发生多脏器功能衰竭再出现休克者。�
1.2 方法
患者住院期间行肾损伤标志物包括尿、血、组织检测或影像学方面的检测，同时记录尿量，确定符合新发的急性肾损伤的患者。动态观察肾损伤患者各项指标，按照分期系统进行分期(AKI 1期、AKI 2期、AKI 3期)，检测AKI患者各期与对照组，使用ELISA检血HSP70、尿HSP70、血TNF-α、血IL-1等因子，应用BeckmanDUC28型自动生化分析仪测定血清BUN、Cr。�
1.3 统计学方法
用SPSS 17.0软件进行统计学分析。计量资料数据用x±s表示，两组间比较使用独立样本t经验，多组间相互比较采用方差分析，相关性分析采用Pearson相关分析。�
2 结果�
2.1 基本特征 对照组和与急性肾损伤患者年龄、性别、体质量指数在相互之间的分别差异无统计学意义。�
2.2 生化指标 AKI患者各期血HSP70、尿HSP70、血BUN、血Cr显著性高于对照组(P[4-6]。③抗凋亡作用：研究已证实，HSP��70�、HSP��60�均可通过干扰引起凋亡调节蛋白激活的信号转导通路抑制细胞的凋亡，进而减少组织的损伤, 促进应激损伤的恢复。④协同免疫应答：HSP具有类似主要组织相容性复合物结合抗原肽的结构域，结合抗原肽形成HSP-肽复合物，保护抗原肽免受酶降解，并通过自身ATP酶活性及可能的蛋白酶活性对其结合的前体抗原肽分子进行修剪, 或者由内质网腔外肽酶进行修剪, 使抗原肤适合与分子结合, 辅助抗原呈递, 增强免疫应答。�
目前国内外对于HSP70细胞内表达规律的认识在不断深化，近年研究表明，结构型HSP70(HSP73)在正常肾组织有一定量的表达，经过应激或缺血/缺氧后，细胞内HSP70合成机制被启动，诱导型HSP70(HSP72)合成将显著增加，并增强机体对随后进一步损伤的抵抗功能。Martinez等[7]对HSP70的基因结构及调控作过较多的研究，认为当细胞应激后，细胞内未折叠或变性蛋白增多，启动热体克蛋白基因的转录和表达而合成HSP70。本研究对象中急性肾损伤中血、尿HSP70浓度明显高于对照组，研究表明,肾组织缺血时，HSP70表达上调。张鸿彦等[8]在庆大霉素引起的急性肾小管损伤中,肾组织HSP73(结构型HSP70)的表达也上调,并且肾小管上皮细胞中HSP73重新分布,由细胞核向细胞浆转移。HSP具有细胞保护作用,并参与损伤的修复过程。亚砷酸钠、小剂量环胞菌素A、短暂输尿管结扎等均可诱导HSP��70�的表达上调,对随后的缺血/再灌注或肾毒药物引起的肾组织损伤有明显的保护作[9-11]。此外，国内周立文等[12]有报道在相同性质但程度不同的应激条件下，HSP70的合成将随损伤程度的加深而增加。本研究对象中急性肾损伤中血、尿HSP70在AKI3期较AKI 1期明显增多有统计学意义，血HSP70与血BUN、血Cr正相关说明HSP70升高可能与肾组织的肾损伤成正比，这与McCabe等[13]曾报道整体动物热应激后组织损伤的程度与IISP70阳性显成正比相一致。�
急性肾损伤的患者有大量活性氧族(ROS),淋巴细胞释放细胞因 IL-1,IL-2,IL-8 及 TNF-α 等， ROS 及细胞因子上调HSP,激活 HSP 基因,增强 HSP 的表达，使血浆中 HSP70 的表达继续上升达高峰。较早出现的高表达的 HSP70 通过发挥其“分子伴侣”作用，抗氧化、抗细胞凋亡、抗炎症损伤，参与细胞保护等内源性保护机制对肾组织起保护作用，促进了肾功能的恢复，本实验研究研究与血HSP70与TNF-α、IL-1炎性因子呈负相关。可能HSP70的升高抑制炎症因子的表达，从而对减少对细胞的损伤。一些研究表HSP70表达增加有明显的抗炎症作用，HSP70的抗炎症作用与其抑制NF-kB的活性,减少炎症介质产生,以及增加抗炎细胞因子IL-10的表达有关。NF-κB与炎症反应密切相关,HSP70 可抑制 TNF-α 和 IL-1β 对 NF-kB 的激活, 进而抑制 TNF-α 和 IL-8 的表达[14]。�
综上所述，急性肾损伤HSP70表达增多反映肾损伤的严重程度，同时HSP70表达可能抑制炎症因子的的激活，启动了内源性保护机制，利于肾脏损伤的修复。�
参 考 文 献�
［1］ 马宏仲,薛荣亮.热休克蛋白与脑缺血再灌注损伤.国外医学麻醉学与复苏分册， 2004,25(1):20-21.�
［2］ 王占明,曾建国,赖大年,等. 热休克蛋白与肝脏缺血预处理延迟保护作用.第四军医大学,2001,22(13):1200-1203.�
［3］ 王峰, 尚立芝, 曹珊,等.参附注射液预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤后 HSP70 基因表达的影响.河南中医学院院报,2007,22(128):36-38.�
［4］ Suzuki S, Maruyama S,Sato W，et al.Geranylgeranylacetone ameliorates ischemic acute renal failure via induction of Hsp70.Kidney Int, 2005,67(6):2210-2220.�
［5］ Barisic K, Petrik J, Rumora L,et al.Expression of Hsp70 in kidney cells exposed to ochratoxin A.Arch Toxicol, 2002, 76(4):218-226.�
［6］ 李峰.热休克蛋白70的免疫学进展.陕西医学杂志，2004，33(4)：352-356.�
［7］ Martinez BMA， Dey A， Rabindran SK， et al. Displancement of sequence- specific transcription factor from miotc chromatin. Cell，1995,83(1):29.�
［8］ 张鸿彦, 孙玲娣, 赵达亚.庆大霉素诱导急性肾损伤大鼠肾脏热休克蛋白70的表达.实用儿科临床杂志, 2007, 22(5):333-335.�
［9］ 丁弘,刘殿阁.不同类型热休克蛋白在肾脏疾病中作用.临床荟萃,2008, 23(18):1366-1367.�
［10］ 张鸿彦,赵达亚, 孙玲娣. 环胞霉素A 诱导急性肾损伤大鼠肾脏热休克蛋白70的表达. 哈尔滨医科大学学报,2007,41(2):136-139.�
［11］ Zhang PL, Lun M, Schworer CM, et al. Heat shock protein expression is highly sensitive to ischemia- reperfusion injury in rat kidneys.， Ann Clin Lab Sci, 2008, 38(1):57-64.�
［12］ 周立文，王焱林，万德宁.不同剂量氯胺酮对大鼠脑组织热休克蛋白70表达的影响.中华麻醉学杂志，1999，29(2):118.�
［13］ McCabe T, Simon-RP. Hyperthermia induces 72kDa heat shock protein expression in rat brain in non-neuronal cells. Neurosci Lell, 1993, 159(1-2):163.�
［14］ Yamamoto Y, Kume M, Yamaoka Y, et al. Implications of heat shock proteins during liver surgery and liver perfusion.Recent Results Cancer Res, 1998,147157-147172.
