【www.zhangdahai.com--教育教学方案】
【摘要】 2002年9月在南京市雨花台区发生了一起因食用超市销售的卤菜而引起的23例患者食物中毒事件，本实验室按国家标准从流行病学，实验室检验，小白鼠毒力试验证实是由溶藻弧菌引起的。
【关键词】溶藻弧菌;食物中毒
溶藻弧菌是海水中常见的一类弧菌，以前被认为是副溶血弧菌的生物型[1],1974年《伯杰氏细菌鉴定手册》中将它列为副溶血弧菌Ⅱ型，后证实两者的DNA中G+C含量不同，1984版把它从副溶血弧菌中划分出来，成为一个独立的种[2]。溶藻弧菌在食品中特别是海产品中的数量远比副溶血弧菌为多，它的检出以前被认为与食物中毒无关[3]。溶藻弧菌可经创面感染人体引起蜂窝组织炎，游泳者中耳炎，甚至引起败血症等肠道外感染。近年由溶藻弧菌污染食品引起的中毒频繁报道：嘉兴市郊区[4] 、济南市污染的凉拌海带丝[5]、我市溧水县[6]。因此，由溶藻弧菌引起的肠道感染越来越得到实验室的重视。2002年9月在我区梅山一大型超市也发生了一起因溶藻弧菌污染卤菜而引起的食物中毒。现将调查结果
报告如下：
1 流行病学调查
1．1 中毒经过 2002年9月12日，梅山某医院从晚上7时至13日上午陆续收治了33例急性腹泻患者，其中女8例，男23例，2例为儿童，患者出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻、水样便等急性胃肠炎症状，腹痛多为下腹或脐部阵发性绞痛，少数人有发热高达38℃以上，有头痛头晕症状，潜伏期最短6 h，最长12 h，经补充电解质，抗生素对症治疗，效果良好，于9月13日中午全部出院。
1．2 现场调查 雨花台区疾病预防控制中心于2002年9月13日上午接报赴梅山进行采样，问询调查。据患者称，均有食用某大型超市出售的A品牌盐水鸭、酱鸭、盐�鸡等卤菜。我实验室立即赶赴超市采样，共采A、B两个品牌卤菜各6份。超市工作人员穿白大褂，戴口罩，一次性手套，符合有关规定，柜台面对顾客一面有一面大玻璃遮挡。A、B两品牌卤菜分别由工人销售，切、售分开。
2 实验室检验
2．1 样品采集 采集患者提供的剩余食物样A品牌酱鸭（200 g）、盐水鸭（250 g）、盐�鸡（400 g），B品牌烤鸭（200 g）。采集9月13日在售柜台卤菜A品牌酱鸭、盐水鸭，凤爪等6份，B品牌酱鸭、烤鸭等（9月13日生产）6份。患者提供的未用药呕吐物2份，未用药前水样便未采到。但根据文献[7] 报道采集8份用药后水样便，尚有7份检出，其检出率为87．5%。本实验室将在以后的检验中加以验证。另二名患者发病期、恢复期血清，营业员肛拭子3份、砧板、切菜刀擦拭子各2份。
2．2 检验方法 对采集的标本按国家标准[8]检测菌落总数、大肠菌群、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、沙门氏菌、志贺氏菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、其它嗜盐弧菌。
培养基、血清、小白鼠、生化反应管均由江苏省疾病预防控制中心培养基厂提供，培养基按国家标准[8]配制。
2．3 实验结果 对剩余食物样4份，其它食品样12份，肛试子3份，擦拭子4份，呕吐物2份，均采用增菌后分离和直按分离两种分离方法，在患者提供的品牌A卤菜（酱鸭、盐水鸭、盐�鸡）、患者呕吐物2份中检出形态、菌落特征、生物学性状均相同的溶藻弧菌5株，其它样均未检出本菌，所有样均未检出其他致病菌。患者提供的剩余食物样菌落总数均达10�6个/g多，大肠菌群均≥24 000 mPN/100 g，与样品隔夜放置有关系。在9月13日采样的12份卤菜中菌落总数也有10�5个/g及以上之多，大肠菌群均在150以上。病原株表现如下：
2．3．1 形态特征 革兰染色阴性、微弯曲短杆菌、有两端浓染，用压片法可看出有动力，无荚膜。
2．3．2 培养特性 在SS琼脂平板上生长不良、半透明、细小、不发酵乳糖，分区划线接种仅在N01区有少量菌生长。在嗜盐性琼脂平板上，直接分离时优势明显，长势不错、菌落大，2~3 mm灰白色，光滑、湿润、边缘不整齐，有点似蜡滴状。在TCBS平板上，菌落大，2~3 mm，湿润、光滑、产生明显色素，黄色、分解蔗糖，在血平板上有溶血，灰白色。
2．3．3 生化试验结果 将经双糖铁纯培养的菌落进行接种生化反应管，一系列结果如下:阳性或生长的有：氧化酶（试纸法）、靛基质、蔗糖、甘露醇、葡萄糖产酸、动力、甘露糖、麦芽糖、硝酸盐还原、枸橼酸盐、果糖、V-P、赖氨酸脱羧酶试验。阴性或不生长的有：鸟氨酸脱羧酶、乳糖、阿拉伯糖、尿素、气体、H�2S、苯丙氨酸、葡萄糖产气、β-半乳糖苷、鼠李糖、山梨醇、木糖、棉子糖。重要的耐盐试验溶藻弧菌在无盐胨水和11%氯化钠胨水不生长，在3%~10%氯化钠胨水中生长良好，属于在嗜盐弧菌中较耐盐的。其与副溶血弧菌的重要区别是副溶血弧菌在10%氯化钠胨水中不生长。
2．3．4 小白鼠毒力试验 在市疾病预防控制中心微生物实验室的协助下，参照GB4789．7-94进行[9] 购买了10只（18~20 g）的小白鼠。将分离出的4株溶藻弧菌无菌转种于1%氯化钠肉汤，37℃培养20 h，取培养物0．3 ml注射8只小白鼠腹腔内每2只为一组，另2只小白鼠注射无菌肉汤作为对照。3 h后，注射溶藻弧菌培养物的小白鼠开始陆续发病，症状为竖毛、反应迟钝、运动迟缓、呼吸困难、四肢抽搐、厌食、弓背，至12 h 8只小白鼠全部发病死亡。死亡后解剖，取腹腔积液培养，检出溶藻弧菌。而对照组的2 只小白鼠无中毒反应，3天后也无死亡，解剖未培养出致病菌。
2．3．5 药敏试验 我实验室在市疾病控制中心进行了药敏试验，药敏纸片在省疾病预防控制中心购买。试验结果如下: 敏感：头孢噻肟、丁胺卡那、复方磺胺、氯霉素、氟哌酸、庆大霉素、多粘菌素B、强力霉素。
中度敏感：四环素、卡那霉素。耐药：氨苄青霉素、头孢呋新、氨苄青霉素。
2．3．6 血清凝集试验 见表1。
2．3．7 仪器鉴定 将分离出的病原菌送往南京市疾病预防控制中心经API-ATB系统鉴定，确定该病原菌为溶藻弧菌，概率为97．7%。
3 讨论
根据流行病学及实验室的检验、小白鼠毒力试验、血清学试验可证实此次食物中毒的病原菌为溶藻弧菌。另据溧水县疾病预防控制中心传报同日也发生一起超市所售A牌卤菜引起的食物中毒，其实验室也检出溶藻弧菌，B品牌卤菜并未检出，9月13日所售卤菜也未有顾客食用后中毒报告。因此可推定A牌卤菜加工场所9月12日生产的卤菜受到了卤汁或其他海鲜加工品的污染，而造成此次人数较多的食物中毒事件。9月14日，白下区对该加工场所作了封存，限期整改。
溶藻弧菌属于嗜盐性弧菌，一般在海产品中携带率较高，有报道[10] 称海产品中副溶血弧菌检出率为50．4%，溶藻弧菌为21．6%。卤菜的加工、销售、食用给病原菌的污染有一定的可乘之机。我区是首次在卤菜引起的食物中毒中检出溶藻弧菌。须在以后的实验室检验中引起足够重视。
溶藻弧菌的致病机理教科书中未有提及。有报道[11] 研究称121株溶藻弧菌中，ST阳性率为5．0%；54株溶藻弧菌检测LT，阳性率为20．4%；101株溶藻弧菌采用绵羊血液琼脂平板溶血法检测溶血素，阳性率为88．1%。国外Lee k k等人报道[12,13] 溶藻弧菌分泌的外毒素分子量约33 kD，是一种碱性丝氨酸蛋白质酶，可能是其主要致病因子，我实验室也将在有条件时展开有关研究。
参考文献
1 Song YL.Proposal of Vibrio alginolyticus for biotype 2 Vibrio parahaenolyticusJpn J Med Sci Biol,1968,21:359-362.
2 Krieg N R.Bergeys manual of syste matic bacteriology .Voll London Williams,1984,518-534.
3 孟昭赫.食品卫生检验注解微生物学部分.人民卫生出版社,1990：187.
4 史海根.一起混合性污染引起的食物中毒浙江预防医学,2003年第15卷第11期.
5 李波,刘尊玉,等.1起溶藻弧菌引起的食物中毒预防医学情报杂志,2003年第19卷第3期.
6 赵上瑛.一起溶藻弧菌引起的食物中毒调查报告,江苏预防医学,2001年9月第11卷第3期.
7 潘黎正,周旭,等. 一起由多种弧菌科细菌引起和食物中毒检测报告.中国卫生检验杂志,2001年4月第11卷第2期.
8 中华人民共和国卫生部 食品卫生检验微生物学部分期,1994:140-157.
9 中华人民共和国卫生部 食品卫生检验微生物学部分期,1994:36-38.
10 林朝.部分海产品携带致病性弧菌情况调查.现代预防医学,2001,28(2):192.
11 林业杰,等.溶藻弧菌的病原学研究. 海峡预防医学杂志,2001年第7卷第1期.
12 Lee K K,Yu S R,Liu P C,Alkaline serine protease is an entaeus of Vibeio alginolyticus in Kuruma prawn,penaeus japonlcus.Chrv Microbiol,1997,34(2):110-117.
13 Lee K K,YU S R,Chen F R,etal,Virulence of Vibrio alginolyticus isolated from disased tigsr prawn,penaeus mondon.Curr Microbiol,1996,32(4):229-231.
