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[摘要] 目的：探讨抗凋亡基因bcl-2在正常大肠黏膜、大肠腺瘤和大肠癌中的表达变化及与大肠癌发生、发展和转移的关系。方法：采用免疫组化方法,分别检测20例正常大肠黏膜、22例大肠腺瘤和69例大肠癌中bcl-2 蛋白表达情况。结果：bcl-2蛋白在正常大肠黏膜、大肠腺瘤和大肠癌中阳性表达率分别为20.00%、50.00%、52.17%。大肠腺瘤和大肠癌中bcl-2蛋白表达阳性率均显著高于正常大肠黏膜(P＜0.05)。在伴有淋巴结转移癌组织中bcl-2 表达率为33.33％ ,无淋巴结转移者为62.22％,统计学分析差异有统计学意义（P =0.022 1＜0.05）；在高、中和低分化腺癌中Bcl-2 表达率分别是100.00%(5/5) 、82.35％（14/17）、36.17％(17/47),高分化、中分化与低分化腺癌相比,差异均有统计学意义(P值分别为0.023 2、0.001 1)；TNM IV期bcl-2表达率显著低于I、II、III 期，（P0.05）。结论：bcl-2蛋白高表达对大肠癌的发生起重要作用。bcl-2蛋白参与了大肠癌的发生,其表达高低与肿瘤细胞的病理分级、TNM临床分期和淋巴结转移密切相关。
[关键词] bcl-2；大肠腺瘤；大肠癌
[中图分类号]R735.3+4 [文献标识码]B [文章编号]1674-4721（2008）12（a）-048-03
大肠癌是消化道常见的恶性肿瘤, 严重危害人类健康,大肠腺瘤是最常见的癌前病变, 是发展为癌的首要危险因素。大量的研究[1,2]表明,肿瘤的发生发展与细胞增殖、凋亡的动态平衡受破坏有关。本研究旨在探讨bcl-2在大肠癌、腺瘤和正常大肠黏膜中的表达变化规律及发展和转化过程中的作用, 为大肠癌的早期发现和预后评估提供有力帮助。
1 材料与方法
1.1 标本来源
收集我院及东莞市太平人民医院2003年3月～2008年3月手术切除，经病理证实的大肠腺瘤标本22例,大肠癌标本69例。另外选取正常大肠黏膜标本20例作为对照观察。69例大肠癌标本中,男38例,女31例，年龄28～82岁，平均年龄59.1岁,术前均未作任何抗肿瘤治疗。高分化腺癌5例,中分化腺癌17例,低分化腺癌47例。24例有淋巴结转移。TNM分期:I期10例、II期27例、III期23例、IV期9例。
1.2 试剂及免疫组化染色方法
鼠抗人bcl-2 单克隆抗体、抗体稀释液及试剂盒均购自基因公司。其稀释度为1∶200。所有标本均用10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,4 μm连续切片,按二步法进行免疫组化染色,染色前标本切片进行抗原修复处理,一抗在室温孵育1 h，二抗在室温下孵育0.5 h,DAB显色,苏木素复染。用已知阳性的大肠癌标本作bcl-2抗体的阳性对照,用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。
1.3 判断标准
所有免疫组化片子用奥林帕斯BX50显微镜进行定性和半定量评估。请三个高职称病理医生在不知道临床信息的情况下，独立的对所有免疫组化片子进行评估。阳性判断标准为细胞浆和(或)细胞膜出现了黄色或棕黄色颗粒状,并用阳性片作为对照。每张切片随机选择10个视野,40×10高倍显微镜下观察计数。参照文献[3]方法根据染色的强度及阳性细胞的数量分别记分。不着色为0分,浅黄色为1分,黄色为2分,棕黄色为3分。无阳性细胞染色为0 分,阳性细胞数少于30%为1分,31%～70%为2分,70%以上为3分。根据染色强度与阳性细胞数得分之和分为4级,即(-)为0分,弱阳性(+)为1～2分,阳性(++)为3～4分,强阳性(+++)为5～6分。
1.4 统计学方法
统计学处理应用SPSS10.0软件进行χ2检验和Fisher确切概率法, P＜0.05差异有统计学意义。
2 结果
bcl-2阳性表达主要表现为胞质染色。正常大肠黏膜阳性表达主要局限于腺窝底部,而表面上皮细胞少有表达。69例腺癌中弱阳性(+) 5例、阳性(++) 10例、强阳性(+++) 21例, 表达率为52.17%（见图1）；22例大肠腺瘤中弱阳(+) 5例、阳性( ++) 5例、强阳性(+++)1例, 表达率为50%（见图2）；20例正常黏膜中弱阳性(+)2例、阳性(++)2例, 表达率为20%（见图3）。腺癌与腺瘤的阳性表达率基本相同（P=0.859 0>0.05）。两者的阳性表达率与正常大肠黏膜相比差异有显著性(P
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（收稿日期：2008-11-12）
