【www.zhangdahai.com--学校工作计划】
尿素乳膏主要用于治疗手足皲裂、鱼鳞病、灰指甲、冻疮、湿疹等疾患，也可用于皮炎［1］，是医院常用的乳膏剂之一。所谓新型尿素乳膏，即是采用逆相转型法(逆转相法)进行配制的尿素乳膏。通过正交实验，对尿素乳膏处方进行优选，提高了制剂的质量。
1 仪器与材料
pHS-3B精密pH计；751-G型紫外分光光度计(上海分析仪器厂)；UV230+紫外-可见检测器：大连依利特分析仪器有限公司；MCU-15测微目镜：上海大庆光学仪器厂；尿素对照品，20 mg，批号110781-200612，中国药品生物制品检定所；尿素：批号20080813，湖南省芙蓉联合制药厂。
2 研究内容
2.1 正交实验设计 以乳化剂(蜂蜡/硼砂)、液体石蜡用量、硬脂酸用量3个因素为考察因素，以各样品油球粒度为指标，用正交实验L�9�(3��4�)表布点试验，优选最佳处方配比，以提高制剂的质量。见表1。
尿素乳膏的处方组成:
尿素 20 g液状石蜡 112 ml
硬脂酸 15 g蜂蜡 24 g
石蜡 26 g硼砂 1 g
纯化水 33 ml
表1
因素水平表
水平A乳化剂(蜂蜡/硼砂)B液体石蜡用量/mlC硬脂酸用量/g
120/0.835206
224/15609
328/1.166007.5
处方中油相为液状石蜡、石蜡、硬脂酸、蜂蜡；水相为尿素、硼砂、纯化水；处方系蜂蜡-硼砂为基础制成的水/油型乳剂，蜂蜡的游离脂肪酸和硼砂中和成钠皂，是很好的乳化剂［2］。
乳化剂对乳膏的形成与稳定起着至关重要的作用，且蜂蜡作为类脂类基质，可用于增加乳膏稠度。液状石蜡用于调节基质的稠度。硬脂酸的用量直接影响乳膏的硬度。
2.2 样品的制备(采用逆向转型法) 按处方精密称取尿素20 g，处方中其余成分按照L�9�(3��4�)正交表进行实验，按照逆向转型法进行制备。油相：按处方精密称取液状石蜡、石蜡、硬脂酸、蜂蜡在水浴上加热熔化，用细布滤过，并保持温度约90℃左右，备用。水相：精密称取尿素、硼砂溶解在纯化水中，加热至约85℃，备用。在400 r/min的速度搅拌下，先将油相的2/5缓缓加入水相中，搅拌至初乳形成(开始乳化搅拌时温度90℃)。待乳剂温度降至70℃时，将搅拌速度调快为700 r/min，将初乳加入余下的3/5油相，使先前形成的水包油型初乳迅速转型为油包水型乳剂，然后，逐渐将搅拌速度调慢至300 r/min，在乳剂温度降至50℃时，停止搅拌，即得。
2.3 尿素乳膏质量的评价
2.3.1 油球粒度测定 油球粒度是评价乳剂优劣的重要指标，
对乳膏的稳定性有较大影响［3］。平均粒径较小、粒径分布
作者单位：255036山东淄博市中心医院
均匀，是乳膏成品质量和储存稳定性明显提高的重要保证。取30%甘油滴于载玻片上，用玻棒沾取试验样品少量，分散于30%甘油液滴中，盖上盖玻片，置显微镜下观察，每个样品量取并记录油球直径各100个，即得各样品油球粒度。结果见表1~2。
2.3.2 含量测定 通过含量测定，观察不同的考察因素对尿素乳膏中尿素的含量有无影响。
2.3.2.1 样品液的制备 精密称取尿素乳膏约1 g，用乙醚45 ml分3次将其调匀后定量转移至分液漏斗中。每次用水20 ml提取5~6次，合并提取液，并用乙醚20 ml洗涤提取液1次，分取水提取液置200 ml容量瓶中。乙醚液再用水洗1~2次，每次20 ml，洗液合并于200 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
2.3.2.2 对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的尿素对照品50 mg，置100 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
2.3.2.3 基质溶液的制备 精密称取约 1 g 乳膏基质，按样品液1 g制备方法制备，即得。
2.3.2.4 供试品溶液的制备 取1.2.2相下滤液2 ml，离心取上清液，0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。
2.3.2.5 紫外吸收光谱 取样品液、对照液和基质溶液各4 ml，分别置于25 ml容量瓶中，精密加入对二甲氨基苯甲醛试剂10 ml，加水至刻度，摇匀。放置15 min后，置1 cm 吸收池中［4］。在紫外分光光度计380~480 nm波长范围扫描。结果表明，尿素在426 nm波长处有最大吸收，基质对样品的测定无干扰。
2.3.2.6 标准曲线的绘制 精密吸取尿素对照液1，2，3，4，5，6 ml，分别置于25 ml容量瓶中，精密加入对二甲氨基苯甲醛试剂10 ml，加水至刻度，摇匀。放置15 min后，置1 cm 吸收池中，以10 ml水做空白按同法操作，在426 nm波长处测定其吸收度。
2.3.2.7 精密度考察 精密吸取同一批供试品溶液10 ml连续6次测定含量，计算精密度。
2.3.2.8 稳定性考察 精密吸取同一批供试品溶液，分别在配制完毕后0，1，4，8，24 h进行测定，考察稳定性［5］。
2.3.2.9 重现性 按供试品溶液制备方法处理同一批样品5份，依次测定尿素含量，考察重现性。
2.3.2.10 回收率 按处方比例精密称取空白乳膏基质 1.0 g 5份，精密加入尿素对照品0.15 g， 按供试品溶液制备方法制备加样回收供试品溶液，测定尿素的含量，计算回收率［6］。
2.3.2.11 含量测定 取正交实验的9个样品，依法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10 ml，进行含量测定，结果见表2。
3 结果
3.1 正交试验的结果与分析
3.1.1 正交试验结果 见表2。
表2
尿素乳膏配制工艺正交实验结果
因素A乳化剂(蜂蜡/硼砂)B液体石蜡用量/mlC硬脂酸用量/gD空列油滴粒径(n=100)尿素的含量(%)
111110.5599.26
212220.5099.28
313330.4799.34
421230.3099.32
522310.2199.40
623120.3399.40
731320.4199.36
832130.4499.37
933210.5999.27
K11.521.261.321.35
K20.841.151.391.27G�1� =3.8
k31.441.391.091.21G�1�T =1.604
R0.680.240.30.14
K1、K2、K3表示每个因素各水平下得率的总和。R表示极差。b为加权系数。G�1�为9次测得结果的总和。GT=G�2/9
根据表1~2所示的计算结果，R�A�>R�C�>R�B�，这说明影响油滴粒径的最主要因素是乳化剂组分的配比，硬脂酸用量的影响次之，而液体石蜡用量对油滴粒径的影响最小。
根据上述分析，可以确定尿素乳膏处方的最优组合为A2B2C�3�。
直观分析以各因素水平为横坐标，油滴粒径为纵坐标作图(图1)。
图1
油滴粒径因素指标关系图表
方差分析油滴粒径方差分析见表3。
3.1.2 正交实验结果分析
3.1.2.1 直观分析 由表3可以看出，尿素含量各数据间无明显差异，故不作为评价指标。将油滴粒径作为主要考察目标，对所得数据进行分析，由表3中的R值及图2中因素指标关系可知，影响因素大小顺序为A >C>B，即乳化剂组分配比、硬脂酸用量、液体石蜡用量。
图2
尿素标准曲
3.1.2.2 方差分析 由表3可知：因素A对指标影响显著，因素B、C的影响不显著。油滴粒径的次序为：A22，B22B2C�3�；即乳化剂(蜂蜡/硼砂)：24/1，液体石蜡用量：560 ml，硬脂酸用量：7.5 g。
3.2 含量测定的结果
3.2.1 标准曲线 线性关系考察结果见表，以吸收度为纵坐标(Y)，以尿素对照液的量为横坐标(X)，进行线性回归统计，得回归方程为Y =0.0881X+0.2297(R�2 =0.9990)。结果表明，尿素浓度在30-180ug/ml 范围内其浓度与吸收度呈线性关系。
表4
油滴粒径方差分析
方差来源离差平方和自由度均方差FP
A0.093020.046542.2730.05
C0.017020.00857.727>0.05
e=D0.002220.0011
表4
尿素标准曲线结果
对照液的量(ml)123456
吸收度0.3150.4120.4890.5850.6690.757
3.2.2 精密度 精密吸取同一批供试品溶液10 ml连续5次测定含量，精密度结果见表5。精密度系指用该法测定同一匀质样品的一组测量值彼此符合的程度，它们越接近就越精密，常用相对标准(偏)差(RSD)表示。结果显示，本次试验的精密度符合相关要求。
表5
精密度实验结果(n=5)
供试品量(ml)吸收度RSD(%)
100.4910.50
100.510
100.501
100.494
100.504
3.2.3 稳定性 精密吸取同一批供试品溶液，分别在配制完毕后0，1，4，8，24 h进行测定， RSD值为0.64%，结果表明供试品溶液在室温下放置24 h稳定。
3.2.4 重现性 按供试品溶液制备方法处理同一批样品5份，依次测定尿素的含量，重现性的RSD值为 0.43%(n=5)，结果表明方法重现性良好。
3.2.5 回收率试验 按处方比例精密称取空白乳膏基质1.0 g 5份，精密加入尿素对照品 0.10 g，5份结果分别为99.6%、99.2%、99.9%、98.8%、99.7%。平均回收率为99.4%，RSD为0.50%。回收率是验证仪器稳定性的一个重要指标，仪器越稳定，回收率的范围就越小。结果显示，本次试验的回收率符合相关要求。
3.2.6 显色后稳定性考察 取3个不同浓度的对照液，显色后测其不同时间下的吸收度，结果见表6。表 6结果显示，在显色后 15~25 min吸收度最大且最稳定，回收率最高，所以选定在显色后暗处放置20 min后测定吸收度。
表6
显色后稳定性考察
时间(min)0.150.250.35
50.6211.0471.450
100.6241.0581.462
150.6311.0621.469
200.6391.0721.474
250.6421.0721.488
300.6401.0701.488
350.6361.0631.479
400.6311.0591.463
3.2.7 含量测定 取正交实验的9个样品，依法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10 ml，进行含量测定，结果见表2。
4 讨论
4.1 pH对测定的影响 测定必须在强酸性条件下进行。因为在强酸性条件下，尿素可与对二甲氨基苯甲醛形成稳定的有色化合物，在 30~180 μg/ml 浓度范围内符合朗伯比尔定律，线形关系很好［7］。
4.2 试液对测定的影响 结果表明，试液对测定影响很大，同一批号试液储存时间不同，可影响吸收度的测定值［8］。因此，试液必须新鲜配制。
参考文献
［1］ 张流明.尿素乳膏的研制.海峡药学,2003,15(1):13.
［2］ 南京药学院药剂学教研组编.药剂学.第2版.北京:人民卫生出版社,1985:387-388.
［3］ 张辉.尿素霜的处方改进. 黑龙江医药,2002,15(6):442.
［4］ 徐凤梅.紫外分光光度法测定尿素乳膏含量. 天津医药,2002,14(2):61.
［5］ 朱学骏.现代皮肤病性病诊疗手册.第2版.北京:北京医科大学出版社,2001:86.
［6］ 张润清,吴海玲,滕世虎.尿素乳膏制备工艺的改进.中国民康医学,2008,20(21):61.
［7］ 雍德卿.实用医院制剂注解.北京:人民卫生出版社,1998:224-236.
［8］ 中华人民共和国卫生部药政局编.中国医院制剂规范.第2版.北京:中国医药科技出版社,1995:134.
注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文
