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【摘要】目的:优选葛根清肠颗粒的最佳提取工艺。方法:采用正交试验筛选药味的提取工艺。以加水量(A)、浸泡时间(B)、提取时间(C)作为考察因素。结果:通过正交试验筛选的最佳制备工艺条件显示提取次数为主要影响因素,其次是溶媒量和乙醇浓度。确定最佳工艺为用85%乙醇,加8倍量水,浸泡1小时,提取1小时,提取3次。结论:优选的工艺稳定可行。
【关键词】葛根素;正交设计;提取工艺;高效液相色谱
【中图分类号】R283.3【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)14-047-2
葛根清肠颗粒是我院历经多年临床实践总结出来的用于治疗胃肠湿热,气机郁滞的泄泻,便溏,腹痛,肠鸣,里急后重,食少倦怠及胃肠性腹泻的中药处方。该处方由葛根、诃子肉、生地榆、黄连、秦皮、生龙骨、五倍子、儿茶、香附、白芍、茯苓、14味药组成。我院制剂室已将处方制成颗粒剂用于临床,但只是将各味药共煎制得,考虑到各位药所含有效成分理化性质的差异,认为其提取工艺欠合理。为了保证制剂质量和临床疗效,用正交试验法进行最佳提取工艺的研究。
1仪器与材料
1.1仪器挥发油提取器(天津玻璃仪器厂)、电子调温型电热套(天津市泰斯特仪器有限公司)、AE241电子分析天平(瑞士梅特勒公司)、AS3120A超声清洗器(奥特塞恩斯仪器有限公司)、Agilent 1100液相色谱仪、101～1电热鼓风干燥箱(江苏海门县试验仪器厂)
1.2药材葛根、诃子肉、生地榆、黄连、秦皮、生龙骨、金樱子、五倍子、儿茶、香附、白芍、茯苓、青皮、木香各味药材均由石家庄乐仁堂中药饮片厂提供,经鉴定均符合《中国药典》2005年版I部有关规定。
1.3试药葛根素对照品(中国药品生物制定品检定所,批号:0752―200209),甲醇为色谱纯,其它试剂为分析纯。
2工艺设计的理论依据
2.1工艺的设计[1-2]根据处方中药有效成分性质的差异,将药材分为挥发油提取组,水提取组,醇提取组,并用正交试验确定最佳提取工艺。
2.2挥发油提取工艺
正交实验设计:依据影响挥发油提取的因素,选取加水量(因素A)、浸泡时间(因素B)、提取时间(因素C)作为考察因素,每个因素取3个水平(见表1)。选用L9(34)正交表安排试验,以挥发油的提取率作为考察指标,见表2。
表1 挥发油提取工艺正交试验因素水平表
水平 因素A(倍) 因素B(h) 因素C(h)
1
2
3 8
10
12 1
2
3 5
7
9
表2 挥发油提取工艺正交试验结果
试验号 因素 出油量
(g/100g)
A B C D
1
2
3
4
5
6
7
8
9
K1
K2
K3 1
1
1
2
2
2
3
3
3
0.3584
0.3824
0.3834 1
2
3
1
2
3
1
2
3
0.3674
0.3705
0.3836 1
2
3
2
3
1
3
1
2
0.3220
0.3752
0.4270 1
2
3
3
1
2
2
3
1
0.3677
0.3599
0.3966 0.2911
0.3395
0.4442
0.3974
0.4234
0.3463
0.4134
0.3483
0.3482
挥发油提取:按处方比例称取青皮、香附药材细粉,采用水蒸气蒸馏法,按正交试验号进行试验,提取的油水混合物用乙醚萃取3次,合并萃取液,水浴蒸发乙醚至最小体积,加无水硫酸钠脱水,过滤,滤液蒸干乙醚,称重即得。
结果分析:从表2数据分析说明在挥发油提取工艺中,影响因素依次为提取时间>加水量>浸泡时间,因此结合实际生产经验A2B1C3,即药材加10倍量水,浸泡1小时,水蒸气蒸馏9小时为最佳工艺。
2.3醇提工艺
依据影响醇提工艺因素,选取乙醇浓度(A)、加乙醇量(B)、回流时间(C)、回流次数(D)作为考察因素,每次去因素3个水平,见表3。选用选用L9(34)正交表安排试验,见表4。
按处方比例称取葛根、茯苓、儿茶、木香、秦皮药材粗颗粒,合并青皮、香附提取挥发油后的药渣按正交试验号进行醇提。提取液浓缩至约80ml,转移至100ml量瓶中,加乙醇稀释至刻度摇匀。
表3 醇提工艺正交试验因素水平表
水平 因素
A乙醇浓度(%) B加乙醇量(倍) 回流时间C(h) D回流次数(次)
1
2
3 65
85
95 6
8
10 1
1.5
2 1
2
3
表4 醇提工艺正交试验结果
试验号 因素 葛根素含量
(mg/g)
A B C D
1
2
3
4
5
6
7
8
9
K1
K2
K3 1
1
1
2
2
2
3
3
3
0.2704
0.2419
0.2452 1
2
3
1
2
3
1
2
3
0.2331
0.2788
0.2373 1
2
3
2
3
1
3
1
2
0.2626
0.2458
0.2494 1
2
3
3
1
2
2
3
1
0.2223
0.2708
0.2642 0.1383
0.1895
0.1462
0.1278
0.1306
0.1435
0.1391
0.1925
0.1167
2.3.1葛根素含量的测定精密称吸取样品液1ml,至10ml量瓶,加甲醇稀释至刻度摇匀,作为供试品溶液。分别吸取对照品和供试品溶液各10µl,注入液相色谱仪依法测定即得。
2.3.2结果分析影响效果的因素提取次数>加乙醇量>乙醇浓度>提取时间,结合实际经验,最优醇提工艺为回流3次,乙醇浓度为85%,乙醇量为8倍,提取时间1.5小时。
2.4水提工艺
依据影响水提工艺的因素,选取加水量(A)、煎煮时间(B)、煎煮次数(C)、作为考察因素,每个因素取3各水平,见表5。选用选用L9(34)正交表安排试验,以芍药苷的含量作为考察指标,见表6。
按处方比例称取白芍、黄连、金樱子、生龙骨、五倍子、诃子肉、生地榆,合并合并青皮、香附提取挥发油后的药渣及葛根、茯苓、儿茶、木香、秦皮药材醇提后的药渣,按正交试验号进行水提(第一次加水时按药材吸水率166.7%补加水),提取液浓缩至80ml,转移至100ml量瓶中,加水稀
(下转第51页)
(上接第47页)
释至刻度,摇匀。
表5 水提工艺正交试验因素水平表
水平 加水量A(倍) 煎煮时间B(h) 煎煮次数C(次)
1
2
3 8
10
12 1
1.5
2 1
2
3
表6 水提工艺正交试验结果
试验号 因素 芍药苷
(mg/g)
A B C D
1
2
3
4
5
6
7
8
9
K1
K2
K3 1
1
1
2
2
2
3
3
3
0.5501
0.6198
0.6324 1
2
3
1
2
3
1
2
3
0.5766
0.6006
0.0485 1
2
3
2
3
1
3
1
2
0.4443
0.6262
0.7319 1
2
3
3
1
2
2
3
1
0.6324
0.5318
0.6381 0.4011
0.5064
0.7429
0.6583
0.7824
0.4186
0.6704
0.5131
0.7138
2.4.1芍药苷的含量测定
①色谱柱:HypesilC18柱(4.6*250mm,10µm);流动相:0.05%KH2PO4溶液-乙腈(82:18);流速:1.0ml・min-1;柱温:35℃;检验波长:230nm。②供试品溶液的制备:精密称取制备液10ml,加入中性氧化铝柱,用50%乙醇100ml慢速洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣用50%乙醇转移至25ml量瓶中并稀释至度,用0.45µm滤膜过滤,即得。③对照品溶液的制备:精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36小时的芍药苷对照品适量,加50%乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液,摇匀,即得。④含量测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl,注入液相色谱仪,测定即得。
2.4.2结果分析结合表6的直观分析,有考虑到中药水煎提取效率和成本,综合考虑最优水提工艺为A1B1C3,,即加8倍量水,提取3次,每次1小时。
3讨论
葛根清肠颗粒处方复杂,各味药理化性质各异,本制剂工艺较好的提取了药物的有效成分,并保留了药理活性,保证了药效的发挥,提高了药物的稳定性,方便了临床的应用。优选的工艺稳定可行。
参考文献
[1] 徐凤娟,张振秋,冯勇.正交设计优选葛根降糖颗粒的最佳提取工艺[J].辽宁中医杂志,2007,34:1615-1616.
[2] 王胜春,胡永武,贺雪梅,等.正交试验制备工艺对柴葛冲剂药效学的影响[J].中成药,1999,21(2):56-59.
