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中图分类号：R512.6+2 文献标识码： A 文章编号： 1814-8824(2008)-9-0007-02 摘要:目的 了解测定低水平血清乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人群分布及相关乙肝病毒血清标志物模式特征。方法 微粒子酶免疫分析技术测定6186例非肝炎病区住院患者血清HBsAg及 表面抗体(抗-HBs )、乙肝病毒e抗原及e抗体(HBeAg 、抗-HBe)和乙肝病毒核心抗体(抗-HBc)：根据定值参比血清和样本的HBsAg荧光速率值／阴性对照荧光速率值之比值(S／N值)，并结合中和试验结果确定浓度在5ug/L以下的HBsAg阳性例数，并分析相关乙肝病毒(HBV )血清标志物模式。结果 共检出HBsAg阳性626例，HBsAg浓度在5ug/L以下的有158例，占总数的2.55％，占HBsAg 阳性人群的25.24％ 。其中，HBsAg浓度在1ug/ L以下的有73例(46.20％)；1~2ug/ L的有28 例 (17.72％)；2～5ug/ L的有61例(38.61％)。对上述低水平HBsAg人群的5项HBV血清标志物检测获得8种模式，以“HBsAg 、抗-HBc、抗-HBe阳性”，“HBeAg和抗-HBs 阴性” 模式为主(74. 60％)；累计HBsAg和抗-HBc同时阳性者占94.17％ ；HBsAg与抗-HBs同时阳性只出现在HBsAg lug/L以下人群中(6 .45％)。结论 低水平血清HBsAg人群不容忽视，提高HBsAg 检测灵敏度有重要意义；同时检测相关HBV血清标志物，对于确定上述人群有帮助。
关键词 肝炎表面抗原 病毒 免疫酶技术
Determination of Low Level HBsAg in Serum By MELA.Wu Huan-xue，Zhang Xiao-tao.GuanghanPeople′sHospital, guanghan 618300,Sichuan.
【Abstract】ObjectiveTo investigate the distribution of the population with low level HBsAg in serum and the characteristics of their HBV serologic maker.Methods We detected HBsAg,HBeAg,anti-HBc, anti-HBe,and anti-HBs in the serum samples from 6186non-hepatic inpatients and defined the paitients with HBsAg concentration equal to or less than 5ug/L by using AxSyM MEIA system.Result 158 patients with HBsAg equal than 5 ug/L (2.55% of all 6186people and 25.24% of 626 HBsAg positive people ) included 73(46.20%), 28(17.72%) and 61(38.61%) with HBsAg equal to or less than 1ug/L ,1-2ug/L and 2-5ug/L respectively .Most of these patients were detected with “positive for HBsAg ,anti-HBc and anti-HBe but negative for HBeAg anti-HBs”,and anti-HBc antibodies were frequently present in their sera.Conclusion The population with low level HBsAg in serum should not be neglected and it is important to improve the test sensitivity of HBsAg and to detect the other HBV serologic markers .
【Key words】 Hepatitis B surface antigen ; Immunoenzyme techniques
乙肝表面抗原(HBsAg)为乙肝病毒感染的最主要病原标志和直接证据之一，对以低水平存在的血清HBsAg进行有效检测，具有重要的临床和流行病学意义。 我们使用微粒子酶免疫技术 (microparticle enzyme immunoassay ，MEIA)对6 186例血清标本进行了部分乙肝病毒标志物的检测，并对其HBsAg浓度在5ug/L 以下病例存在的比例，相关乙肝标志物模式及临床意义作了初步分析。
1 材料和方法
1.1 标本来源 自2002年l1月～2007年1月本院非肝炎病区住院患者入院体检血清样本共6 186例。
1.2 仪器及试剂 AxSyM免疫荧光分析仪为美国雅培公司产品。试剂：(1)HBsAg及其抗体(抗-HBs)，乙肝病毒e抗原及其抗体(HBeAg、抗-HBe)，乙肝病毒核心抗体 (抗-HBc)测定用试剂盒，HBsAg 确定试剂盒均为美国雅培公司产品。其中，HBsAg检测灵敏度为0.23ug／L。 (2)1 ug/L、2 ug／L和5ug／L HBsAg定值参比血清(批号，卫生部临检中心提供)。
1.3 检测方法 MEIA技术原理(以夹心法为例)：待测抗原与包被于微粒子的相应单抗结合，再与生物素标记二抗结合，形成微粒子包被抗体-待测抗原-生物素标记二抗复合物，微粒子复合物不可逆地被比色皿底部的玻璃纤维捕获，并在表面富集，再与HRP标记的抗-生物素结合，而游离的微粒子则被洗脱。荧光底物4-甲基磷酸伞形酮(MUP)被HRP分解成MU，在360 nm 激发光照射下产生荧光，速率法测定荧光强度，并计算实际含量。HBsAg、HBeAg、抗-HBs采用夹心法测定，抗-HBc、抗-HBe采用竞争法测定，HBsAg以样本荧光速率值与阴性对照荧光速率值之比(s／N)≥2. 00为阳性，HBeAg以 S／N>2.100为阳性，抗-HBc和抗-HBe均以样本荧光速率值与临界质控荧光速率值之比(S／CO)≤1.000为阳性，抗-HBs为定量分析，并以≥10 IU／L为阳性。对HBsAg 5ug/ L以下者进行中和确定试验，同时测定同一标本加与未加中和抗体的HBsAg S／N值，以二者差值占后者S／N值的百分率为中和率，中和率≥50％确定为HBsAg阳性。对HBsAg 5ug／L以下患者的5项血清标志物检测结果归列为A～H等8种模式，见表1。
2 结果
2.1 对1ug/L、2ug/ L和5ug/L HBsAg定值参比血清经202次测定，S／N平均值(x±s)分别为20.12±3.04，40.76±5.25和71 .27±7.40。
2.2 6186例血清标本中，共检出HBsAg阳性626例，其中HBsAg浓度在5ug／L以下(S／N≤71. 27)的有158例，占总样本数的2.55％，占HBsAg阳性人群的25.24％。在上述158例中，HBsAg浓度在1ug／L以下(2．00≤S／N≤20.12)的有73例(占46.20％)； 1～2ug/ L(20.12 2.3 呈上述3组不同水平分布的HBsAg阳性人群，其相关的HBV血清标志物(HBeAg、抗-HBc、抗-HBe和抗-HBs)检测结果及存在模式可知，本组以C模式最多见，占74.60％ ；累计HBsAg和抗-HBc同时阳性(B+C+D+E)者占94.17％ ； HBsAg和抗-HBe同时出现(C+E+F)者占80.42％ ； HBsAg和HBeAg同时阳性(D+G)者占8.99％ ； HBsAg和抗-HBs同时阳性(E+F+H)者占6.45％ ，且只出现在HBsAg 1ug/ L以下人群中。
3 讨论
研究证实，在部分HBV感染人群中，血清HBsAg呈低水平存在［1-3］，而目前普遍采用的检测方法，对上述人群易造成漏检。微粒子免疫荧光分析技术对HBsAg检测具有高灵敏度，利用此特点，同时为了减少假阳性，进行中和确定试验，力图对5 ug/L以下HBsAg阳性人群的分布状况作较全面的了解。我们对较大范围的非肝炎患者住院人群的检测结果表明，血清HBsAg约在5 ug/L以下者占总人群的2.55％ ，占HBsAg阳性人群的25.24％。其中，以1ug/L以下者占多数(46.20％)，其次为2～5 ug/L (38.61％)，1～2ug/ L者最少(17.72％)。初步证实低水平血清HBsAg人群占有不小比例，尤其我国是乙肝的高发区，加之人口众多，此类人群更不容忽视。否则，不仅对乙肝的确诊带来困难，尤可导致乙肝病毒通过手术，输血等途径发生传播等严重后果。因此，进一步提高血清HBsAg检测的灵敏度具有重要的现实意义［2,4］ 。
进一步对5项HBV血清标志物的检测结果表明，在上述低水平HBsAg人群中，以“HBsAg、抗-HBc、抗-HBe阳性，HBeAg、抗-HBs阴性”模式最为多见(74.60％)；多数情况下，HBsAg和抗-HBc是同时存在的(94.17％)，单独存在的情况并不多见。因此，日常工作中即使所用方法不能检测上述低水平HBsAg时，如能同时检测抗-HBc等相关指标，尤其是进一步提高抗-HBc等的检测质量和完善其意义的解释，对于人群中的流行病学筛查和临床诊断会有较大帮助，特别是在保证输血安全和控制医院内感染方面。值得注意的是，HBsAg与抗-HBs同时存在的模式也占一定数量(6.45％)，且只出现在HBsAg 1 ug／L以下人群中。二者同时存在的内在机理可能是HBV发生变异，还有待进一步探讨［3,5］。
参考文献:
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