【www.zhangdahai.com--行政管理论文】
[摘要]目的：研究环索奈德的RP-HPLC含量测定及有关物质的检测方法。方法：采用C18柱(5μm，4.6mm×250mm)，流动相为甲醇一水(90: 10)，检0Qc波长为242nm。结果：环索奈德在0.5～0.005mg/ml浓度范围内，峰面积与浓度呈良好线性关系(r=0.9999)，平均回收率为(99.8q±0.85)％。结论：本法简便，专属性及重现性好，可用于测定环索奈德含量及有关物质。
[关键词]环索奈德；反相高效液相色谱法；有关物质
文章编号：1009-5519(2008)08-1236-02 中图分类号：R9 文献标识码：B
环索奈德是由德国ALTANA公司合成的一种新的用于治疗哮喘的糖皮质激素类药物。该药物的气雾剂首先于2004年在澳大利亚获得上市许可，环索奈德是一种酯类前体药物，本身无药理活性，必须在体内经过酯酶催化水解为有活性的环索奈德，其每天使用1次，每次根据症状的严重程度为80～160μg。是到目前为止惟一的1个每天使用1次的糖皮质激素类药物。环索奈德是采用16-α羟基泼尼松龙为原料合成的。本试验采用HPLC法，建立了用于检测环索奈德含量与有关物质的检测方法，本方法可以将环索奈德与中间产物，降解产物进行分离，可以用于测定本品含量与有关物质。
1 材料与方法
1．1 仪器与色谱条件：美国ALLTECH-426液相色谱仪(单元泵、自动进样器、紫外检测器、工作站)，北京普析7U-1901l型紫外分光光度计，Waters 2695型HPLC OVater8 996型光电二极管阵列检测器，Millennium32512作站)。色谱柱：LunaCl8(5μm，4.6mm×250mm)；流动相：甲醇：水(90:10)；检测波长：242nm；流速：1.0ml/min，进样量：20μl；温度：室温。
1．2 药品与试剂：环索奈德精制品：纯度为99.9％；批号：20030801；合成中间体1，2，3，均由成都一研究所提供。甲醇(色谱纯)，纯水(自制)。环索奈德及中间体结构式(见图1)。
1．3 色谱条件的优化确定
1．3．1 检测波长的选择：分别取环索奈德精制品、中间体1，2，3，加乙醇溶解并稀释成每1ml中约含50μg的溶液，在200～400nm波长范围内扫描，环索奈德与中间体紫外图谱接近(见图2)，均在242nm有最大吸收，故选择242nm为检测波长。
1．3．2 测定浓度的选择：预定有关物质测定浓度为0.5mg/ml，含量测定浓度为50μg/ml。
1．3．3 流动相的优化：环索奈德为甾体类药物，参考其他同类品种的质量标准，另根据本品的结构特点和理化性质，选择3种体系流动相：(1)甲醇：水(90:10)，不同比例(70～90:30～10)，仅比例为90:10时，与中间体可有效分离，保留时间短，其他比例保留时间长，峰形差。(2)乙腈；水保留时间长，峰形差。(3)乙腈：甲醇：水(50:40:10)，峰形差，分离差，进一步调整比例，分离情况较好，但是峰形差，最终确定甲醇：水(90:10)为流动相。
2 结果
2．1 专属性检查
2．1．1 中间体分离试验：取环索奈德精制品及各中间体适量，加乙醇溶解并稀释制成各成分约为50μg/ml的混合液，进样20μl。结果表明：环索奈德的保留时间为7.88min，分离度符合规定(见图3)。
2．1．2 降解产物的分离试验：(1)样品强光(4000Lx)连续照射10d，变为黄色。(2)样品直火加热至分解变棕褐色。破坏后样品分别加乙醇溶解并稀释成每1ml中约含0.5mg的溶液，摇匀，滤过，奋进样20μl，结果降解产物与主峰能较好分离。
2．1．3 峰纯度检查：取精制品溶液(25μg/ml)进样，用二极管阵列检测器检测峰纯度角显示，样品峰纯度角为0.364，阈值为0.534，均小于1，表明该色谱条件下，样品主峰为一纯峰。
2．2 柱效试验：取环索奈德的细粉适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含50μg的溶液，进样20μl，色谱工作站计算的理论塔板数为7961。
2．3 线性试验：精密称取环索奈德精制品(含量99.9％)50.00mg，置100ml量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；精密量取贮备液适量分别置10ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，将最小浓度溶液继续倍比稀释至5μg/ml，分别进样20μL，以峰面积为因变量A，以浓度为自变量C，得线性方程：A＝2×1007C+12554，r=0.9999，n=5，线性范围5～500μg/ml。
2．4 溶液的稳定性试验：精密量取线性试验项下的溶液(50μg・ml-1)，室温下放置，分别于0，2，4，6，8 h取样测定，结果RSD=0.17％，表明环索奈德溶液在室温下放置8h内稳定。
2．5 精密度试验：取溶液稳定性试验项下的溶液，连续进样5次，计算平均值，结果RSD=1.17％，表明本方法精密度良好，可满足含量测定的要求。
2．6 回收率试验：精密称取环索奈德精制品9份(含量为99.9％)，按含量测定浓度的80％，100％，120％取样，分别置100ml量瓶中加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液1.0ml，分别置10ml的量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件测定。计算回收率。结果表明，本方法的平均回收率为99.8％，RSD=0.85％，表明方法准确度良好。
2．7 最小检出量：取分离试验项下的精制品溶液及各中间体溶液，分别加流动相稀释成约10μg/ml的稀溶液，进样10μl，计算信噪比。以信噪比为3:1时计算最低检出量，以信噪比为10:1时计算定量限。结果环索奈德最低检出量为0.1ng，定量限0.3ng。
2．8 含量及有关物质测定
2．8．1 含量测定：精密称取环索奈德适量，加乙醇溶解并稀释制成每lml含50μg的溶液，作为供试品溶液；另取经105℃干燥至恒重的环索奈德精制品适量，加乙醇溶解并稀释制成每1ml中含540μg的溶液，作为对照品溶液。量取供试品及对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算含量。
2．8．2 有关物质测定：由于环索奈德测定的有关物质含未知杂质，故采用自身对照法，色谱条件同含量测定法。
测定法：精密称取环索奈德适量，加乙醇溶解并稀释制成每1ml中约含0.5 mg的溶液，作为供试品溶液；量取供试品溶液适量，加流动相稀释制成每1ml中含5μg的对照溶液。量取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20％～30％；再取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍。供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液的主峰面积(1.0％)。
3 讨论
紫外检测器到目前仍为一种常用检测器，具有光源能量高、辐射强度大、单色性好、附加噪声小、光源稳定的特点，根据合成路线，可能引进的中间体为1，2，3，其与样品具有相同的结构母核，所以其紫外吸收图谱基本一致。由图3可见，精制品和各中间体等摩尔浓度在242nm处吸收度基本一致，且灵敏度高。本实验选择242nm波长，可以增加方法的通用性。
