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【摘要】 目的了解湖南省湘乡市中医院革兰阴性(G-)杆菌标本来源、菌种分布及耐药情况。 方法 收集2006年1月至2008年12月间临床各科送检标本做微生物病原学检测和药物敏感试验。 结果 共分离1190株G-杆菌,其中大肠埃希菌459株(38.57%)、铜绿假单胞菌214株(17.98%)、不动杆菌168株(14.12%)、肺炎克雷伯菌114株(9.58%)、阴沟肠杆菌104株(8.74%)、其他G-杆菌131株(11.01%)。其标本主要来源于痰液(54.78%)。所分离菌种对亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢噻肟、左氟沙星耐药率较低,依次为4.08%、20.28%、24.45%、33.65%、38.01%、40.19%。对氨苄西林耐药率最高,达94.31%。超广谱β-内酰胺酶检出率呈逐年上升趋势。 结论 G-杆菌分离自呼吸道,菌种分布以大肠埃希菌和铜绿假单胞菌为多,耐药菌株有逐年上升的趋势,需引起重视。
【关键词】 革兰阴性菌;抗药性,微生物;超广谱β-内酰胺酶;抗感染药
The analysis of distribution and resistance of gram -negative bacilli in the separation of our hospital’s clinical specimens
ZOU Shou-hua Clinical Laboratory, the Chinese Medicine Hospital of Hunan province Xiangxiang City Hunan, Xiangxiang 411400,China
【Abstract】 Objective To study the source,distribution and antimicrobial resistance of gram-negative bacilli isolated in our hospital. Methods Pathogenic detection and antimicrobial sensitivity tests were performed for samples collected from clinical department from January 2006 to December 2008.Results 1190 gram-negative bacilli strains were isolated,459(38.57%)of which were Escherichia coli, 168(14.12%) were Acinetobacter,214(17.98%)were Pseudomonas aeruginosa,114(9.58%)wereKlebsiella pneumoniae,104(8.74%)were Escherichia cloacae,131(11.01%)were the rest of Gram-negative bacilli.,most strains(54.78%) were from sputum samples.The antimicrobial resistant rate of all the isolated bacterias to Imipenem,amikacin,pipracillin/Tazobactam,ceffazidime,Cefotaxima,levofloxacin was low, which was as follows:4.08%, 20.28%, 24.45%,33.65%, 38.01% and 40.19% respectively.The resistant rate to ampicillin was 94.31%.The isolation rate ofESBLs strains had an increasing tendence. Conclusion Gram-negative bacilli are mainly isolated from respiratory tract. The main isolated bacteria are Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa,the resistant bacteria strains are increasing every year.
【Key words】 Gram-negative bacilli ;Drug resistance; Microbial;Extended-spectrumβ-lactamases;Antimicrobial agents
作者单位:411400湖南省湘乡市中医院检验科
随着广谱抗菌药物的大量使用,准确及时的细菌耐药性监测结果可帮助临床医师掌握细菌对抗生素的耐药动向和耐药变迁及抗菌药物的抗菌活性强弱,对临床合理使用抗生素具有重要意义。
1 材料与方法
1.1 标本来源 收集本院2006年1月至2008年12月间临床各科送检标本,包括痰液、分泌物、尿液、血液等,同一患者多次分离的菌株不重复计入。
1.2 菌株鉴定及药敏实验 菌种的分离培养按照《全国临床检验操作规程》[1]进行,所有菌株鉴定采用天地人微生物分析系统鉴定至种;药敏试验采用天地人微生物分析系统相配套的药敏试验卡测试。
1.3 产ESBLs的检测 ①筛选试验选用头孢泊肟、头孢他啶、氨曲南、头孢噻肟、头孢曲松(每片含量均为30 μg),用M-H药敏琼脂,按标准纸片扩散法测试抑菌环直径。按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)1999年标准进行判断。对头孢泊肟或头孢他啶,抑菌环直径≤22 mm,头孢曲松≤25 mm,氨曲南、头孢噻肟≤27 mm均应高度怀疑为ESBLs菌株。应进一步做确认试验加以确诊[4];②确认试验,将筛选试验中所得的高度疑似产ESBLs的菌株进行确认试验。调菌液浓度为0.5麦氏单位,取菌液10 μl加入8、ml药敏培养液内,然后每孔加入150 μl抗菌药物。C10、D10两孔为生长对照孔。采用超广谱β-内酰胺酶试验卡进行确认试验,ESBLs试验卡的药物及其浓度见表1;③结果判断在C10、D10生长的情况下,其他孔生长则为耐药,不生长则敏感。头孢他啶(A)、头孢他啶/棒酸(B)或头孢噻肟(C)、头孢噻肟/棒酸(D),(A) 和(B)或(C)和(D)的抑菌浓度差三个梯度包括三个浓度为产ESBLs。
表1
试验卡的药物及其浓度
药物名称药物浓度
123456 78 9 10
(A)*0.250.51.02.04.08.016.0 32.064.0 128.0
(B)*0.25/40.5/41.0/42.0/44.0/48.0/416.0/432.0/464.0/4128.0/4
(C)*0.250.51.02.04.08.016.032.064.0
(D)*0.25/40.5/41.0/42.0/44.0/48.0/416.0/432.0/464.0/4
注: (A)*头孢他啶(μg/ml),(B)*头孢他啶/棒酸,(C)*头孢噻肟(μg/ml),(D)*头孢噻肟/棒酸
1.4 质量控制 以标准菌株大肠埃希氏菌ATCC25922和肺炎克雷伯菌ATCC700603,分别作为产ESBLs阴性和阳性对照菌。每次质控结果符合美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)的质控要求。
2 结果
2.1 标本类型与各种细菌检出率共分离G-杆菌1190株,其中大肠埃希菌检出率最高,为38.57%,详见表2。
表2
标本类型与菌种分布(株,%)
标本
菌种分布
大肠埃希氏菌铜绿假单胞菌 不动杆菌 肺炎克雷伯菌阴沟肠杆菌其他G-杆菌合计构成比
痰液172146130626577652 54.78
分泌物106 5012241313218 18.32
尿液101 3 5 758129 10.84
血液10 6 3 453312.61
其他70 918171630160 13.45
合计459214168114104 1311190100.00
构成比(%)38.57 17.98 14.129.58 8.74 11.01- 100.00
2.2 药物敏感性试验所分离的菌种对亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢噻肟、左氟沙星具有较低的耐药率依次为4.08%、20.28%、24.45%、33.65%、38.01%、40.19%。耐药率最高的是氨苄西林为94.31%,见表3。
2.4不同年份ESBLs检出率(%)分析不同年份ESBLs检出率发现随年份有上升趋势,见表4。
表3
1190株G-杆菌对15种抗菌药物的耐药率(%)
抗菌药物大肠埃希氏菌铜绿假单胞菌杆菌不动肺炎克雷伯菌阴沟肠杆菌其他G-杆菌合计
氨苄西林86.9097.78 96.60100.00 100.0095.59 94.31
氨苄西林/舒巴坦56.1598.89 36.17 60.0066.3770.59 61.32
氨曲南36.1035.56 85.96 37.6584.9667.64 54.50
头孢唑啉 38.77 95.00 91.4948.24100.0098.52 71.28
头孢哌酮 39.5730.0070.2150.59 55.7551.47 48.15
头孢曲松 36.1081.1181.2836.4769.91 41.1857.82
头孢噻肟 13.1065.0040.0049.4157.52 50.0038.01
头孢他啶 32.8917.7834.8918.8277.87 20.5933.65
阿米卡星 27.00 7.7815.7414.1229.20 25.0020.28
亚胺培南0.0015.006.38 0.00 0.001.47 4.08
环丙沙星 62.0325.0048.94 24.71 61.06 29.4147.58
左氟沙星 46.5228.8935.32 34.12 60.18 26.4740.19
庆大霉素48.13 30.0055.74 37.64 80.53 98.5252.60
哌拉西林/他唑巴坦4.0118.3346.81 15.29 68.14 14.7124.45
复方新诺明50.2789.4443.40 47.05 50.44 51.4755.26
表4
不同年份ESBLs检出率(%)
年份大肠埃希菌
肺炎克雷伯菌
产酶株(株)非产酶株(株)检出率(%) 产酶株(株)非产酶株(株)检出率(%)
20063283 27.83920 31.03
20074085 32.0014 2436.84
20085184 37.7822 2546.81
注:各年份ESBLs检出率比较,均P>0.05
3 讨论
近年来,许多新的抗菌药物的不断问世和广泛应用,使医院感染病原微生物的种类及耐药性发生了变化。本次监测结果表明,本院近3年临床标本分离的1190株G-杆菌主要来自呼吸道,其次是泌尿道和外科感染的标本。耐药性检测与分析结果显示,所分离细菌中以阴沟肠杆菌的耐药性最为严重,抗生素呈多重耐药性,末见亚胺培南耐药株。阴沟肠杆菌对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为68.14% ,居所有革兰阴性杆菌耐药率之首。有文献报道,阴沟肠杆菌是常见的既可产ESBLs酶,又可以高产质粒介导AmpC酶的 细菌,其感染造成临床治疗的极大困难[3]。铜绿假单胞菌是临床最常见的细菌,也是引起医院感染的主要病原菌,且其耐药率有逐年上升的趋势。铜绿假单胞菌耐药率> 60% 的抗菌药物有氨苄西林 、氨苄西林/舒巴坦、头孢唑啉、头孢曲松、头孢噻肟、复方新诺明,高于有关报道[4]。对第三代广谱头孢菌素的耐药率在17.78%～81.11%不等;对阿米卡星、庆大霉素的耐药率分别为7.8% 和30.0% 与文献报道存在差异[5]。
本研究中,大肠埃希菌在G-杆菌中的分离率占首位,对第三代头孢菌素、氟喹诺酮类药的耐药性增高,可能与大量使用此类药物有关。肺炎克雷伯菌已占克雷伯菌属的80% 以上,其对多种抗菌药物耐药,一旦感染,病情多较严重[6]。不动杆菌对亚胺培南的耐药率最低,为6.38%,可能是由于亚胺培南特殊的结构,具有快速穿透细胞外膜的能力,对β-内酰胺酶高度稳定性及其多位点与PBP结合,对不动杆菌仍有较高的活性,其次是对氨基糖苷类的耐药率较低,阿米卡星的耐药率(15.74%)低于GEN (55.74%)。对三代头孢菌素的耐药性也明显增强,如头孢噻肟、头孢他啶的耐药率分别为40.00%和34.89%,因此,对于不动杆菌引起的感染,用亚胺培南加可得到协同治疗的作用。上述5种G-杆菌对氨苄西林耐药率均达85% 以上,对亚胺培南、阿米卡星的耐药率低。肠杆菌科细菌产超广谱β-内酰胺酶的代表株是大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌,通过对不同年份ESBLs检出率发现,随年份有上升趋势与文献报道相似[7]。对于产ESBLs肠杆菌科细菌的治疗,可首选亚胺培南。细菌的耐药性是一个全球性问题,为了防止耐药菌株的产生以及不断增多的趋势,临床上经验选药应当参考当地近期的细菌耐药性监测结果,合理选用抗生素,在药敏报告出来后,再以实际药敏结果为选药依据,调整临床用药,尽可能选择敏感和窄谱的抗菌药物。
参 考 文 献
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