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【摘要】 目的 建立甲钴胺注射液细菌内毒素检查方法。方法 参照《中国药典》2005版(二)部附录细菌内毒素检查法及其原则进行实验。结果 当甲钴胺注射液稀释至600倍(即浓度为0.000 833 mg/ml)时可消除对鲎试剂与细菌内毒素凝聚反应的干扰。 结论 甲钴胺注射液可用细菌内毒素检查法进行安全性质量检查。
【关键词】 甲钴胺注射液; 细菌内毒素检查; 鲎试剂; 干扰试验
Study of Bacterial Endotoxin test for Mecobalamin Injection
XIE Dong-mei.Department of Pharmary, The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, Bengbu, Anhui Province,Bengbu 233004, China
【Abstract】 Objective To establish the bacterial endotoxin test in mecobalamin Injection.Methods According to the CHP(2005 Edt.), inhibition or enhancement test forbacterial endotoxin test was carried out of sodium bicarbonate injection.Results The interference could be eliminated when mecobalamin injection was diluted by 600 times 0.000 833 mg/ml.Conclusion Bacterial endotoxin test could be used for mecobalamin injection.
【Key words】 Mecobalamin injection; Bacterial endotoxin test(BET); Tachypleus amebocyte lysate(TAL); Interference test
甲钴胺注射液(mecobalamin injection)是一种内源性的辅酶B12,易转移至神经细胞器,从而促进核酸和蛋白质的合成,促进轴索内输送和轴索的再生,促进正红母细胞的成熟,分裂,改善贫血血象等。目前国内尚未见甲钴胺注射液细菌内毒素方法的报道。本试验旨在探讨用鲎试剂(TAL)法检查甲钴胺注射液细菌内毒素的可行性。
1 试验材料
1.1 样品 甲钴胺注射液3批,规格1 ml(0.5 mg),批号080264A,080363A,080368A,生产厂家:日本卫材株式分社,分装厂家:卫材中国药业有限公司。
1.2 试剂
鲎试剂:批号080730,规格0.1 ml,λ=0.5 EU/ml,湛江安度斯生物有限公司;批号0610170规格0.1 ml:λ=0.25EU/ml湛江博康海洋生物有限公司。
细菌内毒素工作标准品: 批号2005-3,效价120EU 规格1 ml,中国药品生物制品检定所。细菌内毒素检查用水,以下简称(BET),批号0807150,规格5 ml /支湛江安度斯生物有限公司。
1.3 仪器 XW_80A旋涡混旋器,上海医科大学仪器厂;HH.214电热恒温水浴锅,江苏医疗器械厂。
2 试验方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度复核结果[1] 按照《中国药典》2005版(二部)进行鲎试剂的标示灵敏度复核,结果见表1所示。
2.2 供试品内毒素理论限值(L)的确定及最大有效稀释浓度倍数MVD的计算[2]。
2.2.1 供试品内毒素理论限值(L)的确定 本品临床使用每次1 ml,1次/d,成人体质量按60 kg计,人体致热阀(k)为5.0EU/(kg.h)则L=K/M=5.0EU.(kg•h)÷(1 ml•ml÷60 kg)=300 EU/ml。
2.2.2 最大有效稀释浓度倍数的计算MVD 根据公式计算MVD=CL/λ计算。MVD(λ=0.5)=1.0 ml•ml×300EU/ ml÷0.5.EU/ml=600倍。MVD(λ=0.25)=1.0 ml•ml×300EU/ ml÷0.25.EU/ml=1200倍。
注:湛江安度斯生物有限公司 批号080730λ=0.5 EU/ml
2.3 供试品干扰试验
2.3.1 干扰预试验 为排除供试品本身对TAL与细菌内毒素凝胶反应可能存在干扰,取供试品批号为080363A的原液,分别按表2,表3的所列的稀释倍数稀释,制成供试品溶液系列,并制备含2λ 内毒素的供试品稀释液(PPC)进行干扰预试验。同时作阳性和阴性对照。结果见表2和表3。
注:湛江博康海洋生物有限公司 批号0610170 λ=0.25 EU/ml
由以上预干扰试验结果可以初步了解,两个厂家鲎试剂对甲钴胺注射液用细菌内毒素检查在600倍稀释即0.0008333 mg/ml浓度时无干扰。
2.3.2 干扰确证试验
为了最终确认是否存在干扰,进行以下正式干扰试验。取甲钴胺注射液用细菌内毒素检查用水进行稀释,使其最终为1:600稀释即0.000833 mg/ml,按《中国药典》2005版(二部)附录细菌内毒素检查供试品干扰试验项进行试验,结果见表4和表5。
干扰试验结果表明,最大浓度2.0λ管均为阳性,最低浓度0.25λ管均为阴性,阴性对照管均为阴性,用BET水和供试品溶液制成的内毒素溶液的反应终点浓度几何平均值Es在2.0～ 0.5λ,Et在0.5～2.0Es范围内,说明本品在该浓度下对两批鲎试剂均无干扰,可进行细菌内毒素检查。
2.4 供试品细菌内毒素检查 取甲钴胺注射液3批,将原液1:600稀释即0.000833 mg/mL后用以上两种鲎试剂分别按《中国药典》2005版(二部)附录细菌内毒素检查法进行细菌内毒素检查,结果3个批号供试品的内毒素检查均符合规定,与家兔法检查一致。结果见表6和表7。
3 讨论
甲钴胺注射液原液对TAL凝聚反应存在抑制作用,通过干扰预试验确定供试品1:600稀释即浓度0.000833 mg/mL时,对细菌内毒素检查法无干扰作用。试验结果与家兔法检测结果相符,且操作简单,精确度高,重现性好。细菌内毒素法代替热源检查法用于甲钴胺注射液检查是可行的。
参 考 文 献
[1] CH.P2005 VOLⅡ中国药典,2005: 85-88.
[2] HUANG QQ,XIE IM,Experiment design of Bacerial endotoxin in drugs,Chin Pharm J (中国药学杂志),1997,322:72-74.
